解表清熱片的提取工藝研究

王牛民 ，尤海生 ，呂 軍 ，周家琛 ，魏友霞

（1.西安交通大學醫學院第一附屬醫院藥學部，陜西 西安 710061；2.大連醫科大學，遼寧 大連 116044）

解表清熱片是以荊芥穗、葛根、柴胡、紫蘇葉、薄荷、防風、桔梗、白芷、苦杏仁、苦地丁、蘆根、大青葉為原料制成的中成藥，具有疏風解表、化痰止咳功效，用于風寒感冒引起的發熱頭痛、咳嗽有痰。筆者對解表清熱的提取工藝進行了優化，現報道如下。

1 儀器與試藥

B2型中藥濃縮鍋及多功能提取罐（天津輕型制藥機械廠）；YK160型搖擺式顆粒機（寶雞制藥機械四分廠）；10A－VP型高效液相色譜儀（日本島津公司）；磁力攪拌機（德國 IKA，RCT basic）；電熱套（北京永光明醫療儀器廠）；FIG－15型真空干燥箱（江陰市干燥成套設備廠）；SF－300型高速粉碎機（航天工業總公司七一零三廠）。配制藥品原材料均為藥用級；葛根素對照品（中國食品藥品檢定研究院，批號為752－200108，含量測定用）；色譜級甲醇，其他試藥為分析純。

2 方法與結果

2.1 制備工藝設計

組方中荊芥穗、薄荷、紫蘇葉含揮發油，為活性成分[1－3]，因此將藥材分為2組：提取揮發油組，包括荊芥穗、薄荷、紫蘇葉三味；水煎煮提取組，包括除以上3味外的其他藥材。將提取揮發油組藥材采用水蒸氣蒸餾法提取揮發油，蒸餾后的水溶液另器收集，揮發油用β－環糊精包合。提取揮發油后的藥渣與水煎煮提取組藥材合并，參照傳統中藥湯劑提取方法提取水溶性成分，采用煎煮提取，煎提液濾過，濾液與上述提取揮發油后的水溶液合并，減壓濃縮至相對密度為 1.36 ～1.40（55 ℃ ）的清膏，制粒，揮發油包合物與顆?；旌?，壓片。

2.2 揮發油提取試驗

取提取揮發油組藥材，采用水蒸氣蒸餾法提取，并考察加水量及提取時間對提取率的影響。按照處方組成比例，分別稱取荊芥穗 50 g、紫蘇葉 15 g、薄荷 15 g，共 7份。其中 4份按照藥材質量比例加水（分別為 8，10，12，14 倍），水蒸氣蒸餾 4 h，對收油率進行考察；另外3份加入藥材質量的10倍水提取揮發油，提取時間分別為 1，2，3，4，5 h，計算收油率。結果顯示，加水量為 8 倍、10 倍、12 倍、14 倍時，收油率分別為 0.5% ，0.7% ，0.7% ，0.7% ；提取時間為 1，2，3，4，5 h 時，平均出油率分別為 0.3% ，0.5% ，0.6% ，0.7%，0.7%?？梢姡铀?0倍以上對收油率無明顯影響；加水10倍量時，加熱提取4 h，揮發油提取完全，最高收油率為0.7%。

2.3 揮發油包合試驗

因素水平確定：參考文獻[4]方法，按照 L9（3）4正交表設計，考察包合溫度（因素 A）、揮發油與β－環糊精比例（因素 B）、攪拌時間（因素C）對包合率的影響。因素水平結果見表 1。所用揮發油采用藥材質量的10倍水提取。

表1 揮發油包合正交試驗因素水平表

包合方法：稱取β－環糊精，加適量60℃水，攪拌使成5%溶液，按照表1中設定包合溫度，在攪拌下滴加揮發油，攪拌至規定時間后靜置，冷藏24 h，濾紙濾過，用10 mL無水乙醇清洗濾渣，去除未包合的揮發油，40℃揮干乙醇，置揮發油提取器中提取發油量，計算揮發油包合率。結果見表2。

結果分析：方差分析結果見表3?？梢?，揮發油與β－環糊精之比為1∶10與1∶8時包合物得率無太大差異，從成本節約考慮，揮發油與β－環糊精之比為1∶8為宜。因此，解表清熱片揮發油β－環糊精包合優選的條件為，揮發油與β－環糊精之比為1∶8，40℃攪拌3 h。

優選條件驗證試驗：按照工業生產投料量，對揮發油包合優選條件進行再驗證。結果見表4?？梢?，按照優選條件對揮發油進行包合工藝可行。

2.4 藥材水煎煮提取試驗

提取次數確定：中藥湯劑傳統方法為水煎煮，分析組方中藥材的有效成分，方中荊芥穗及葛根均含有黃酮苷類，柴胡及桔梗均含有皂苷，且黃酮苷及皂苷溶于水，故仍采用傳統的水煎煮法提取。葛根素為方中具有生理活性的水溶性成分[5]，參考文獻[6]方法測定提取液中葛根素含量，以對水溶性成分的提取方法進行量化考證。按處方組成比例稱取藥材60 g，加10倍量水，煎提3次，時間分別為 1.5，1.0，1.0 h，提取液分別濾過。分取一半量蒸干，105℃干燥 5.0 h，稱重，計算出膏率；分取 1/10量，置蒸發皿內水浴上蒸干，用70%乙醇轉溶入25 mL容量瓶內，以70%乙醇稀釋至刻度，搖勻，用0.45 μm濾膜濾過，精密吸取續濾液1 mL，置25 mL容量瓶中，用甲醇稀釋至刻度，作為供試品溶液，測定葛根素含量。結果見表5?？梢姡?次出膏率及葛根素提取率分別占3次合計量的91.21%和92.50%，第3次提取物含量較低，從節約的角度考慮，生產中采用提取2次。

表2 揮發油包合正交試驗

表3 揮發油包合正交試驗方差分析結果

表4 揮發油包合優選條件驗證試驗結果

表5 提取次數考察結果

水煎煮提取正交試驗：按照 L9（3）4正交表設計，以加水量（因素 A）、浸泡時間（因素B）、煎煮時間（因素C）為考察因素，考察其對提取效果的影響。結果見表6至表8?？梢?，加水量的影響具有顯著性意義（P＜0.05），浸泡時間和煎煮時間的影響無顯著性意義（P ＞0.05），A2與 A3及 C2與 C3差異不大。從節省能源角度考察，以 A2B1C2為佳，即以加10倍量水，浸泡時間為 0.5 h，第1次煎煮1.5 h，第2次煎煮 1.0 h為最佳方案。

優選條件驗證試驗：按照工業生產投料量，對水煎煮提取條件進行再驗證。結果見表9?？梢?，優選的水煎煮提取工藝可行。

2.5 葛根素含量測定

2.5.1 色譜條件與系統適用性試驗

色譜柱：Hypersil BDS C18柱（150 mm × 4.6 mm，5 μm）；流動相:甲醇 －水(76∶24)；柱溫：室溫；檢測波長：250 nm；流速：1.0 mL /min；進樣量：10 μL。理論板數應不低于 4 000。該色譜條件下，信噪比大于10，樣品中葛根素色譜峰分離良好，分離度大于3。

2.5.2 對照品溶液制備

稱取葛根素對照品，用甲醇溶解為0.070 g/mL的對照品溶液。

2.5.3 方法學考察

線性關系考察：精密吸取葛根素對照品溶液 1，2，3，4，5，6 mL，分別置10 mL容量瓶中，用甲醇稀釋至刻度，按照擬訂的色譜條件進樣測定，以葛根素質量濃度（C）對色譜峰面積（A）繪制標準曲線，得回歸方程 A＝2 436 C ＋4 562，r＝0.999 9（n＝6）。結果表明，葛根素質量濃度線性范圍為 0.007 ～0.042 g/L。

精密度試驗:精密吸取同一葛根素對照品溶液，依法進樣測定5次。結果的 RSD為0.042%（n＝5），表明儀器精密度良好。

穩定性試驗：取2.4項下制備的同一供試品溶液，分別于0，2，4，6，8，12 h 時進樣測定，以峰面積計算葛根素含量。結果的RSD為3.01%（n＝6），表明供試品溶液在12 h內穩定性良好。

重復性試驗：取表7中1號樣品6份，按2.4項下方法制成供試品溶液，依法進樣測定，記錄葛根素的峰面積，計算含量。結果的 RSD為4.23%（n＝6），表明方法重復性較好。

加樣回收試驗：精密量取表7中1號樣品5 mL共6份，精密加入葛根素對照品溶液適量，按2.4項下供試品溶液制備方法制備溶液，依法進樣測定，記錄葛根素的峰面積，計算含量及回收率。結果見表10。

表6 水煎煮提取正交試驗因素水平表

表7 水提取正交試驗及結果

表8 正交試驗方差分析結果

表9 水煎煮提取條件驗證試驗結果（每批1萬片）

表10 葛根素加樣回收試驗結果（n＝6）

2.5.4 樣品含量測定

取2.4項下供試品溶液，分別進樣對照品溶液和供試品溶液10 μL，測定其中葛根素含量。結果見表7及表9。

3 討論

解表清熱片是醫院制劑，臨床應用多年，療效確切。本研究中利用正交試驗設計和優化影響解表清熱片提取的多因素試驗，獲得了滿意的試驗結果。優化方案是荊芥穗、薄荷、紫蘇葉加10倍量水，水蒸氣蒸餾4 h提取揮發油，蒸餾后的水溶液與水煎煮提取組藥液合并，藥渣與水煎煮提取組藥材合并水煎煮提取水溶性成分。揮發油與β－環糊精包合方案為，揮發油與β－環糊精之比為1:8，40℃攪拌3 h。水煎煮提取組藥物提取方案為，加藥材 10倍量水，浸泡 0.5 h，第 1次煎煮 1.5 h，第2次煎煮 1.0 h，共提取 2次。β－環糊精安全無毒、價廉易得，對揮發油包封后?？煞乐蛊湟萆ⅲ瑥亩岣咧苿┑姆€定性[7]。經過放大投料量，對生產工藝再驗證，結果顯示，優化工藝適合工業化生產。

參考文獻：

[1]何 婷，湯 奇，曾 南，等.荊芥揮發油及其主要成分抗流感病毒作用與機制研究[J].中國中藥雜志，2013，38(11):1 772.

[2]陳智坤，梁呈元，任冰如，等.薄荷屬植物揮發性成分及藥理作用研究進展[J].天然產物研究與開發，2013，25(6):856.

[3]劉 瀏.紫蘇葉的研究進展[J].中國醫學創新，2012，9(6):162.

[4]呂 倩，龐來祥，郭 濤，等.正交實驗法優選潤腸通樂丸中揮發油包合工藝[J].西北藥學雜志，2013，28(2):116.

[5]茅彩萍，顧振綸.葛根素的藥理作用和臨床應用研究[J].中國血液流變學雜志，2004，14(1):138.

[6]吳 波，張寒俊，黎維勇，等.高效液相色譜熒光光譜法測定葛根中的葛根素[J].中國醫院藥學雜志，2005，25(6):534.

[7]張生潭，張 帆，汪鐵山，等.正交試驗優選春砂仁揮發油羥丙基－β－環糊精包合工藝[J].中國藥房，2011，22（3）：225.