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多噬伯克霍爾德氏菌WS-FJ9對楊樹光合作用和生物量的影響

2014-04-27 03:50:30李冠喜吳小芹葉建仁
浙江農(nóng)林大學學報 2014年4期
關鍵詞:植物

李冠喜,吳小芹,葉建仁

(1.南京林業(yè)大學森林資源與環(huán)境學院,江蘇南京 210037;2.連云港市農(nóng)業(yè)科學院,江蘇連云港 222006;3.南京林業(yè)大學江蘇省入侵有害生物預防與控制重點實驗室,江蘇南京 210037)

多噬伯克霍爾德氏菌WS-FJ9對楊樹光合作用和生物量的影響

李冠喜1,2,3,吳小芹1,3,葉建仁1,3

(1.南京林業(yè)大學森林資源與環(huán)境學院,江蘇南京 210037;2.連云港市農(nóng)業(yè)科學院,江蘇連云港 222006;3.南京林業(yè)大學江蘇省入侵有害生物預防與控制重點實驗室,江蘇南京 210037)

為研究BurkholderiamultivoransWS-FJ9對楊樹Populus的促生機制,采用LI-6400XT便攜式光合儀對接菌后的楊樹葉片的光合指標及熒光參數(shù)進行了測定,同時對楊樹葉片的葉綠素質量分數(shù)及楊樹的苗高、地徑和生物量進行了測定。結果表明:在處理期內,接種WS-FJ9菌株處理的凈光合速率(Pn),蒸騰速率(Tr)和氣孔導度(Gs)均呈先上升后下降趨勢,胞間二氧化碳摩爾分數(shù)(Ci)呈先下降后上升趨勢,Pn和Tr在整個處理期均高于對照,Ci在整個處理期均低于對照,Gs在第30天時低于對照,其后均高于對照。熒光參數(shù)Fv/Fm和ΦPSⅡ值均高于對照;葉綠素總量及葉綠素a/b比值均高于對照;楊樹實生苗接菌處理150 d后的苗高、地徑和生物量均顯著高于對照。研究結果從光合作用及生物量的角度闡明了WS-FJ9菌株對NL-895楊的促生機制,為生物菌肥的開發(fā)與利用提供了參考依據(jù)。圖4表1參21

植物生理學;促生機制;光合參數(shù);熒光參數(shù);葉綠素;生物量

植物根際促生細菌(plant growth promoting rhizobacteria,PGPR)是指自由生活在土壤或附生于植物根系的一類可促進植物生長及其對礦質營養(yǎng)的吸收和利用并能抑制有害微生物的有益細菌。自1978年Burr等[1]首次報道了馬鈴薯Solanum tuberosum上存在植物根際促生細菌之后,大量研究證實植物根際促生細菌廣泛存在于多種植物的根圍。植物根際促生細菌可通過固氮[2]、解磷[3]、分泌酶[4]、產(chǎn)生激素[5]等途徑幫助植物對礦質營養(yǎng)的吸收和利用[6],增強植物的光合作用并促進植物生長。光合作用是植物最基本的生理活動之一,是形成植物生產(chǎn)力的根本源泉,光合速率是植物生理性狀的一個重要指標,也是估測光合生產(chǎn)能力的主要依據(jù)[7-8]。楊樹Populus為落葉樹種,是世界上栽培史最長,用途最廣的樹種之一。然而,隨著楊樹人工林的連作與過頻的輪伐,中國楊樹人工林發(fā)生了嚴重的地力衰退現(xiàn)象,影響了楊樹健康生長。目前,探尋新的生物質肥料,以替代或部分替代化肥營造楊樹速生豐產(chǎn)林的研究倍受關注。多噬伯克霍爾德氏菌BurkholderiamultivoransWS-FJ9菌株為江蘇省入侵有害生物預防與控制重點實驗室(本實驗室)在前期研究中從松樹Pinus根際篩選獲得的1株根際促生細菌。前期的研究表明:該菌具有高效解磷能力,對哺乳動物和植物安全可靠,能夠在楊樹根際定殖,具有促進植物生長、生物防治和生物降解等多種功能[9-11]。為從光合作用的途徑闡述該菌對楊樹促生的機制,本研究探討了接種WSFJ9菌株對NL-895楊光合參數(shù)、葉片的葉綠素含量及苗高、地徑和生物量的影響,旨在闡明WS-FJ9菌株對NL-895楊的促生機制,為生物菌肥的開發(fā)與利用提供參考依據(jù)。

1材料與方法

1.1供試菌株及菌懸液的制備

多噬伯克霍爾德氏菌BurkholderiamultivoransWS-FJ9由本實驗室采集于松樹根際土壤,保藏于中國典型培養(yǎng)物保藏中心CCTCC(No.CCTCC M2011435)[12]。參照的促生菌株Pseudomonas fluorescensJWJS1由本實驗室采集于楊樹根際土壤,保藏于中國典型培養(yǎng)物保藏中心CCTCC(No.CCTCCM209027)[13]。將上述待測試菌株活化后,用接種環(huán)挑取少量菌體接種于裝有50mL營養(yǎng)肉湯(nutrient broth,NB)培養(yǎng)基的100m L三角瓶中,28℃,200 r·min-1振蕩培養(yǎng)48 h。發(fā)酵液(4℃,4 629×g)離心5 min,無菌生理鹽水潤洗菌體3次后,無菌生理鹽水調節(jié)成濃度為1×108個·mL-1的菌懸液,備用。

1.2供試植物材料

供試植株為NL-895楊Populus×euramericanaNL-895。將NL-895楊的種子置于1.0 g·L-1的高錳酸鉀中浸泡2 h,無菌水漂洗3次,播種在滅菌河沙內進行育苗,待出苗40 d后,選擇長勢一致的楊樹幼苗移栽到花盆中,盆中培養(yǎng)基質為山土和草炭混合(體積比為2∶1),高壓蒸汽滅菌,1.5 kg·盆-1,基質中速效氮為30.0 mg·kg-1,速效磷6.0 mg·kg-1,速效鉀23.5 mg·kg-1。移栽后的盆栽幼苗置溫室內統(tǒng)一管理。楊樹苗接種WS-FJ9菌株后第30,60,90,120和150 d后測定光合指標,接種WS-FJ9菌株150 d后分別測定苗高、地徑及楊樹生物量。以接種JW-JS1菌株和滅菌水為雙重對照。

1.3 楊樹光合指標的測定

1.3.1 楊樹光合參數(shù)的測定在接種解磷細菌WS-FJ9處理后30,60,90,120和150 d的典型晴天上午9:00-11:30進行測量,選取各處理NL-895楊上部第4~5個葉片,設3次重復。采用LI-6400XT便攜式光合儀(Li-COR,美國)的紅藍光源葉室測定葉片的凈光合速率(Pn,μmol·m-2·s-1),氣孔導度(Gs,mol· m-2·s-1),胞間二氧化碳摩爾分數(shù)(Ci,μmol·mol-1)和蒸騰速率(Tr,mmol·m-2·s-1),設定光強800μmol· m-2·s-1。

1.3.2 楊樹葉片葉綠素質量分數(shù)的測定采用丙酮提取法測定葉綠素質量分數(shù)[14-15]。在接種解磷細菌WS-FJ9處理后30,60,90,120和150 d,采集無病蟲害、無機械損傷的葉片,洗凈擦干后,剪成1~2 mm細絲,混勻。稱取0.2 g鮮葉置入試管中,加入20mL丙酮與無水乙醇等體積混合液,保鮮膜封口后置黑暗處過夜。待試管中細絲完全變白,采用HWλIOSγ型紫外吸收分光光度計測定646 nm和663 nm處的光密度值D(646)和D(663),設3次重復。代入下式即可求出葉綠素質量分數(shù)。

其中:Ca和Cb分別為葉綠素a和b的質量濃度(mg·L-1);Ct為葉綠素提取液的總質量濃度(mg·L-1);V為樣品提取液總體積(mL);w為樣品鮮質量(mg)。

1.3.3 楊樹葉片葉綠素熒光參數(shù)的測定在接種解磷細菌WS-FJ9處理后30,60,90,120和150 d,選取各處理NL-895楊上部第4~5個葉片測量,設3次重復。采用LI-6400XT便攜式光合儀測定葉片葉綠素熒光參數(shù)。主要測定指標:暗適應后的最小熒光(Fo),最大熒光(Fm),可變熒光Fv(Fv=Fm-Fo),PSⅡ原初光能轉換效率(Fv/Fm);光適應后的穩(wěn)態(tài)熒光(Ft),最大熒光(Fm′),PSⅡ實際的光化學反應量子效率ΦPSⅡ(ΦPSⅡ=(Fm′-Ft)/Fm′)。

1.4 楊樹苗高、地徑及生物量的測定

Richard Lange Perpetual Calendar“Terraluna”搭載的專利軌跡月相顯示,展現(xiàn)觀測者在北半球觀望月亮、地球和太陽的位置。顯示設備由三個圓盤組成,分別為天體圓盤、其下的月相盤、中間的地球圓盤。此布局中,擺輪即代表太陽的位置。軌跡月相顯示準確追蹤月球29日12小時44分3秒的朔望軌道,1058年后才出現(xiàn)一天的偏差。

楊樹實生苗接種后150 d后測定苗高、地徑及植株生物量。植株生物量的測定方法為:將植株取出清洗干凈,105℃殺青30 min后在80℃下烘干至恒量后進行稱量,4株·處理-1,5次重復。

1.5 數(shù)據(jù)分析與處理

采用Origin 8.6軟件進行數(shù)據(jù)差異顯著性檢驗及圖表繪制。

2 結果與分析

2.1 接種WS-FJ9菌株對楊樹葉片光合參數(shù)的影響

凈光合速率(Pn)是反映作物光合效率的重要指標之一。由圖1A可知:在溫室條件凈光合速率(Pn)總體呈現(xiàn)先升后降趨勢。和對照相比,接種WS-FJ9和JW-JS1處理均能顯著提高NL-895楊葉片凈光合速率。5個測定期中接種WS-FJ9比對照分別增加了39.0%,46.6%,53.0%,68.9%和68.4%,接種JWJS1比對照分別增加了13.6%,22.4%,31.8%,37.7%和43.9%。經(jīng)差異顯著性檢驗,各時期各處理差異均達顯著水平(P<0.05)。結果表明,接種WS-FJ9和JW-JS1處理均能顯著提高NL-895楊的凈光合速率(Pn),接種WS-FJ9處理優(yōu)于接種JW-JS1處理。

由圖1B可知:在處理期內,NL-895楊的氣孔導度(Gs)呈先升后降趨勢。和對照相比,接種WSFJ9和JW-JS1處理在30 d和60 d時氣孔導度(Gs)差異均不顯著,其后各處理差異均達顯著水平。在處理90,120和150 d時接種WS-FJ9處理比對照分別增加了28.0%,46.2%和20.7%,接種JW-JS1處理比對照分別增加了16.0%,34.6%和13.8%。

由圖1C可知:在處理期內,NL-895楊的胞間二氧化碳摩爾分數(shù)(Ci)呈先降后升再降趨勢。接種WS-FJ9和JW-JS1處理均低于對照,在處理30 d和120 d時各處理間差異達顯著水平,其余處理期各處理間差異不顯著。在處理30 d和120 d時接種WS-FJ9處理比對照分別增加了9.0%和6.7%,接種JWJS1處理比對照分別增加了6.0%和3.4%。

蒸騰速率(Tr)是反映蒸騰作用強弱的一個重要指標,也是表征植物水分代謝的狀況及水分利用效率的物理量。由圖1D可知:在處理期內,NL-895楊的蒸騰速率(Tr)呈先升后降趨勢。接種WS-FJ9和JW-JS1處理均高于對照,5個測定期中接種WS-FJ9處理比對照分別增加了22.6%,7.7%,17.4%,18.0%和10.4%,接種JW-JS1處理比對照分別增加了16.1%,5.1%,10.9%,12.0%和4.2%。

2.2 接種WS-FJ9菌株對楊樹葉片熒光參數(shù)的影響

在熒光動力學參數(shù)中,F(xiàn)v/Fm代表PSⅡ光化學的最大效率或PSⅡ原初光能轉化效率,它反映了植物的潛在最大光合能力。ΦPSⅡ[ΦPSⅡ=(Fm′-Ft)/Fm′]表示作用光存在時PSⅡ實際的光化學量子效率。它反映在光照下PSⅡ反應中心部分關閉的情況下的實際光化學效率,常用來反映電子在PSⅠ和PSⅡ的傳遞情況,是熒光參數(shù)的重要組成部分。由圖2可看出,在處理期內,接種WS-FJ9菌株處理的Fv/Fm和ΦPSⅡ值均高于接種JW-JS1處理和對照,表明接種WS-FJ9菌株能增強NL-895楊葉片的Fv/Fm和ΦPSⅡ值效應。

圖1 接種WS-FJ9菌株對NL-895楊光合參數(shù)的影響Figure 1 Effect of inoculating strain WS-FJ9 on the photosynthetic parameter of NL-895 poplar seedlings

圖2 接種WS-FJ9菌株對NL-895楊葉片熒光參數(shù)的影響Figure 2 Effectof inoculating strain WS-FJ9 on the fluorescence parameter of NL-895 poplar leaves

2.3 接種WS-FJ9菌株對楊樹葉片葉綠素的影響

葉綠素是重要的光合作用物質,葉綠素質量分數(shù)在一定程度上反映植物光合作用的高低。由圖3A可知:在處理期內,接種WS-FJ9和JW-JS1處理均高于對照,5個測定期中接種WS-FJ9處理比對照分別增加了21.4%,22.2%,20.7%,30.8%和36.0%,接種JW-JS1處理比對照分別增加了14.3%,7.4%,13.7%,23.1%和20.0%。表明接種WS-FJ9和JW-JS1處理均能顯著提高NL-895楊的葉綠素總量,接種WS-FJ9處理優(yōu)于接種JW-JS1處理。

植物葉綠素a/b比值在一定程度上反映了植物對光能利用能力的強弱。由圖3B可知:在處理期內,接種WS-FJ9和JW-JS1處理均高于對照。經(jīng)差異顯著性分析,5個測定期中接種WS-FJ9處理葉綠素a/b比值均比其他2種處理顯著增高,而接種JW-JS1處理和對照相比在30 d和60 d時差異不顯著。表明接種WS-FJ9和JW-JS1處理均能增強NL-895楊對光能利用能力,但WS-FJ9的促生效果優(yōu)于JW-JS1。

圖3 接種WS-FJ9菌株對NL-895楊葉片葉綠素的影響Figure 3 Effect of inoculating strainWS-FJ9 on the chlorophyllof NL-895 poplar leaves

2.4 WS-FJ9菌株對楊樹苗高、地徑及生物量的的影響

在溫室條件下,楊樹實生苗接菌處理150 d后結果如表1和圖4所示。接種WS-FJ9和JW-JS1處理的植株苗高、地徑和生物量均顯著地超過了不接種處理,接種WS-FJ9處理的苗高和生物量顯著高于接種JW-JS1處理(P<0.05)。以上說明2株解磷細菌WS-FJ9和JW-JS1對楊樹苗期均具有明顯的促生長作用,施用WS-FJ9的效果優(yōu)于JW-JS1。

表1 WS-FJ9菌株對NL-895楊實生苗生長的影響Table 1 Effect of strainWS-FJ9 on seedling growth of NL-895 poplar seedlings

3 結論與討論

光合作用是植物重要的物質積累與生產(chǎn)的代謝活動。近年來的研究表明接種解磷菌劑能增強植物的光合作用。余旋等[16]和呂德國等[17]研究發(fā)現(xiàn):蠟狀芽孢桿菌Bacillus cereus能顯著提高美國山核桃Carya illinoensis苗和本溪山櫻Cerasus sachalinensis苗的凈光合速率(Pn)。唐菁[18]研究表明:土壤桿菌Agrbactersp.,微球菌Micrococcussp.,沙雷氏菌Serratiasp.顯著增強了I-69楊幼苗的光合作用。劉輝等[13]研究表明:接種熒光假單胞菌Psudomonas fluorenscensJW-JS1及紅絨蓋牛肝菌Xerocomus chrysenteron顯著增強NL-895楊的光合作用。陳丹[19]研究表明,將解磷細菌蠟狀芽孢桿菌Bacillus cereusJYZ-SD1與外生菌根真菌紅絨蓋牛肝菌Xerocomus chrysenteron混合接種于楊樹后能明顯增強楊樹葉片光合作用的各項指標。常河等[20]研究表明:土著叢枝菌根(AM)真菌對荔枝Litchi chinensis實生苗生長的影響與其對光合作用的影響密切相關。可見,生物菌肥可通過增強植物的光合作用促進植物的生長。本研究通過測定接種高效解磷細菌Burkholderia multivoransWS-FJ9對NL-895楊葉片凈光合速率(Pn),蒸騰速率(Tr),氣孔導度(Gs)等光合參數(shù),從光合作用的角度闡明WS-FJ9菌株對楊樹的促生機制。結果表明:接種WS-FJ9處理能顯著增加NL-895楊葉片的凈光合速率(Pn),蒸騰速率(Tr),氣孔導度(Gs)等光合參數(shù),增強了NL-895楊的光合作用,從而促進了楊樹的生長。

圖4 接種150 d后NL-895楊實生苗生長狀況Figure 4 Growth of NL-895 poplar seedling after inoculation of 150 days

葉綠體色素含量是反映植物光合能力的一個重要指標。葉綠素的合成與分解之間存在著動態(tài)平衡,它直接影響植物的光合作用及有機物質的積累,進而影響植物的生長速度[21]。在熒光動力學參數(shù)中,F(xiàn)v/Fm代表PSⅡ光化學的最大效率或PSⅡ原初光能轉化效率,它反映了植物的潛在最大光合能力;ΦPSⅡ[ΦPSⅡ=(Fm′-Ft)/Fm′]表示作用光存在時PSⅡ實際的光化學量子效率,它反映在光照下PSⅡ反應中心部分關閉的情況下的實際光化學效率,常用來反映電子在PSⅠ和PSⅡ的傳遞情況,是熒光參數(shù)的重要組成部分。本研究結果表明,BurkholderiamultivoransWS-FJ9能顯著增加NL-895楊葉片的葉綠素總量及葉綠素a/b比值,增加NL-895楊葉片的Fv/Fm和ΦPSⅡ值等熒光參數(shù)。

植物根際促生細菌對宿主植物的影響是多方面的,本研究從光合作用及生物量的途徑闡述了B.multivoransWS-FJ9對楊樹促生的機制并得出如下結論:通過增加NL-895楊葉片的葉綠素總量及葉綠素a/b比值增強其熒光效應,進而增強了NL-895楊的光合作用,從而促進了楊樹的生長。B.multivoransWS-FJ9和Pseudomonas fluorescensJW-JS1均對楊樹具有較好的促生效果,均可作為研制楊樹專用解磷菌肥的資源菌株。但從測定的各指標看,WS-FJ9的促生效果要優(yōu)于JW-JS1。因此,多噬伯克霍爾德氏菌B.multivoransWS-FJ9可以作為研發(fā)楊樹生物菌肥的極有潛力的資源菌株。至于該菌對楊樹養(yǎng)分代謝及土壤微環(huán)境等的影響,有待于進一步研究。

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Increasing photosynthesis and biomass of poplars with Burkholderiamultivorans WS-FJ9

LIGuanxi1,2,3,WU Xiaoqin1,3,YE Jianren1,3
(1.College of Forest Resources and Environment,Nanjing Forestry University,Nanjing 210037,Jiangsu,China;2. Lianyungang Academy of Agricultural Sciences,Lianyungang 222006,Jiangsu,China;3.Jiangsu Key Laboratory for Prevention and Management of Invasive Species,Na n jing Forestry University,Nanjing 210037,Jiangsu,China)

To study the growth-promoting mechanisms ofBurkholderia multivoransWS-FJ9 on poplars,photosynthetic indexes[net photosynthetic rate(Pn),transpiration rate(Tr),stomatal conductance(Gs),and intercellular CO2concentration(Ci)]and fluorescence parameters[Fv/Fm,ΦPSII,total chlorophyll(TChl),and Chla/Chlb]of NL-895 poplar(P opulus×euramericanaNL-895)leaves inoculated with a strain ofWS-FJ9 were determined by a portable photosynthetic apparatus(LI-6400XT).Simultaneously,chlorophyll content of poplar leaves,seedling height,ground diameter,and biomassweremeasured.Results showed that during the treatment period(150 days),Pn,Trand Gsall increased earlier and decreased later with Pnand Trhigher,and Cilower than control groups(P<0.05).At the 30th day,Gswas lower and after the 60th day higher than the control groups(P<0.05);whereas Ciwas reversed.The fluorescence parameters Fv/Fm,ΦPSII,TChl,and Chla/Chlb were higher than the control groups(P<0.05).At the 150th day,seedling height,ground diameter,and biomasswere also greater than the control groups(P<0.05).This study illustrated the growth-promotingmechanisms of strain WS-FJ9 on NL-895 poplar from the perspective of photosynthesis and biomass,provided a reference basis for development and utilization of bio-bacterialmanure,and could be of great importance in popularizing sustainable agriculture.[Ch,4 fig.1 tab.21 ref.]

plant physiology;growth-promotingmechanisms;photosynthetic parameters;fluorescence parameters;chlorophyll;biomass

S718.43

A

2095-0756(2014)04-0570-07

2013-10-08;

2013-11-30

國家林業(yè)公益性行業(yè)科研專項(201004061);江蘇省重大科技支撐與自主創(chuàng)新專項項目(BE2008393);江蘇省普通高校研究生科研創(chuàng)新計劃項目(CXLX11-0552);江蘇高校優(yōu)勢學科建設工程資助項目(PAPD)

李冠喜,副研究員,博士,從事微生物學研究。E-mail:guanxili@163.com。通信作者:吳小芹,教授,博士生導師,從事微生物學研究。E-mail:xqwu@njfu.edu.cn

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