金蓮花藥渣及發(fā)酵物總黃酮含量測(cè)定

錢(qián) 莊，周 哲，石雪靜，敖 楊，韓淑英，呂志偉

(河北聯(lián)合大學(xué)，河北 唐山 063000)

?

金蓮花藥渣及發(fā)酵物總黃酮含量測(cè)定

錢(qián) 莊，周 哲，石雪靜，敖 楊，韓淑英*，呂志偉

(河北聯(lián)合大學(xué)，河北 唐山 063000)

目的：測(cè)定金蓮花藥渣及發(fā)酵物中總黃酮含量，為金蓮花藥渣資源的充分利用提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)。方法：分別以水和乙醇-水為溶劑提取金蓮花藥渣及其發(fā)酵物中總黃酮；采用UV法，以蘆丁為對(duì)照品，測(cè)定其中總黃酮含量。結(jié)果：金蓮花原藥材、金蓮花藥渣和藥渣發(fā)酵物的水提物中總黃酮含量依次為8.16%、1.93%和0.93%；乙醇提取物中總黃酮含量依次為13.93%、9.27%和3.51%。結(jié)論：金蓮花藥渣中仍具有較高含量的黃酮成分，應(yīng)充分開(kāi)發(fā)利用其價(jià)值。

金蓮花；藥渣；發(fā)酵；總黃酮；UV法

中草藥經(jīng)藥廠提取有效成分后的藥渣仍含有一定量的活性成分，但多數(shù)中藥渣被廢棄掉，如何充分利用中藥資源，解決中藥渣環(huán)境污染，是亟待解決的問(wèn)題。金蓮花(TrolliuschinensisBunge)為毛茛科植物金蓮花，富含黃酮類(lèi)成分，如葒草苷、牡荊苷等[1]，具有抗炎抑菌、抗病毒、抗氧化等作用[2]。目前，用金蓮花制備的中藥很多，用于治療上呼吸道感、扁桃體炎、咽炎等，因此，每年有大量金蓮花藥渣廢料。本文對(duì)金蓮花藥渣中主要成分總黃酮的含量進(jìn)行了測(cè)定，旨在為金蓮花資源的充分利用提供參考依據(jù)。

1 材料

1.1 藥品及試劑

金蓮花藥渣(由唐山百善藥業(yè)提供)，蘆丁對(duì)照品(中國(guó)食品藥品檢定研究院，批號(hào)0080-9705)，安琪高活性干酵母(安琪酵母股份有限公司)，蛋白胨(北京奧博星生物技術(shù)有限公司)，葡萄糖(天津市北方天醫(yī)化學(xué)試劑廠)，無(wú)水乙醇為分析純，水為超純水。

1.2 儀器

電子天平(型號(hào):FA2104N,上海菁海儀器有限公司)；恒溫箱(型號(hào):TO-2123，上海尚域環(huán)境儀器有限公司)；DHG102型電熱干燥箱(山東濰坊醫(yī)療器械廠)；

水浴鍋(型號(hào):H.H.S 21-4B，上海醫(yī)療器械五廠)；離心沉淀機(jī)(型號(hào)LXJ-Ⅱ，上海醫(yī)用分析儀器廠)；TU-1810紫外可見(jiàn)分光光度計(jì)(北京普析通用儀器有限責(zé)任公司)。

2 方法及結(jié)果

2.1 金蓮花藥渣發(fā)酵及總黃酮提取

2.1.1 金蓮花藥渣發(fā)酵[3-4]酵母菌活化增值：稱取7g安琪干酵母置于錐形瓶中，同時(shí)加入100mL蒸餾水、4g蛋白胨和4g葡萄糖，置37℃恒溫箱中培養(yǎng)24h。藥渣發(fā)酵：稱取30g干燥金蓮花藥渣粉末，置上述活化增值酵母菌液中，再加入30mL蒸餾水、4g蛋白胨和4g葡萄糖，置37℃恒溫箱中繼續(xù)培養(yǎng)48h，70℃烤箱干燥即得金蓮花藥渣發(fā)酵物。

2.1.2 發(fā)酵物中總黃酮提取[5-6]稱取10g干燥的金蓮花藥渣發(fā)酵物2份，分別以10倍量的70%乙醇和水為溶劑，70℃水浴提取2次，每次2h，離心除去不溶性雜質(zhì)，合并提取液，將提取液置蒸發(fā)皿中，70℃水浴濃縮至浸膏狀，即得金蓮花藥渣發(fā)酵物的乙醇提取物(EELRT)和水提物(AELRT)，未發(fā)酵金蓮花藥渣和金蓮花原藥材的提取方法同上，即得金蓮花藥渣乙醇提取物(EERT)和水提物(AERT)以及金蓮花原藥材乙醇提取物(EET)和水提物(AET)。

2.2 UV法測(cè)定提取物中總黃酮含量[7-8]

2.2.1 對(duì)照品溶液制備 精密稱定10mg蘆丁對(duì)照品于50mL容量瓶中，加30%乙醇使溶解并定容至刻度，搖勻，即得。

2.2.2 供試品溶液制備 精密稱定EET、AET、EERT、AERT、EELRT、AELRT各30mg于50mL容量瓶中，加30%乙醇使溶解并定容至刻度，搖勻即得。

2.2.3 測(cè)定波長(zhǎng)選擇 精密量取一定量“2.2.1”項(xiàng)下的對(duì)照品溶液和“2.2.2”項(xiàng)下的供試品溶液，以30%乙醇為空白對(duì)照，在200～400nm波長(zhǎng)范圍內(nèi)測(cè)定總黃酮的紫外吸收光譜，結(jié)果顯示對(duì)照品和供試品在355nm波長(zhǎng)附近均有最大吸收，故確定測(cè)定波長(zhǎng)為355nm。見(jiàn)圖1。

圖1 對(duì)照品(a)和EET(b)吸收光譜

2.2.4 線性關(guān)系考察 精密量取“2.2.1”項(xiàng)下對(duì)照品溶液1.0、2.0、3.0、4.0、5.0、6.0mL，分別置25mL量瓶中，加30%乙醇定容至刻度，以30%乙醇為空白對(duì)照，用紫外分光光度計(jì)在355nm波長(zhǎng)處測(cè)定吸收度, 以吸光度為縱坐標(biāo)，質(zhì)量濃度為橫坐標(biāo)，計(jì)算得回歸方程為Y=21.164 3X+0.020 7(R2=0.999 2)，線性范圍為0.008～0.048mg/mL。

2.2.5 精密度考察 精密量取“2.2.1”項(xiàng)下對(duì)照品溶液1mL，置25mL容量瓶中，共5份，用30%乙醇定容，測(cè)定其吸光度，其RSD為1.7%，表明該方法精密度較好。

2.2.6 重復(fù)性考察 精密量取“2.2.2”項(xiàng)下的同一供試液1mL，置25mL容量瓶中，共5份，用30%乙醇定容，測(cè)定其吸光度，其RSD為1.2%，表明該方法重復(fù)性較好。

2.2.7 穩(wěn)定性考察 精密量取“2.2.2”項(xiàng)下的同一供試液1mL，置于25mL容量瓶中，用30%乙醇定容，分別在0.5、1、2、4、8h測(cè)定其吸光度，其RSD為0.6%，表明該樣品在8h時(shí)內(nèi)穩(wěn)定性較好。

2.2.8 加樣回收率試驗(yàn) 移取已知總黃酮含量的樣品溶液3mL，共9份，分別置25mL容量瓶中，再按低、中、高系列濃度分別加入“2.2.1”項(xiàng)下對(duì)照品溶液1mL、1.5mL、2.0mL，每種濃度各3份，用30%乙醇定容，測(cè)定其吸光度，計(jì)算加樣回收率。結(jié)果見(jiàn)表1。

表1 加樣回收率試驗(yàn)結(jié)果

2.2.9 提取物中總黃酮含量測(cè)定 精密量取“2.2.2”項(xiàng)下的供試液各3mL，置于25mL容量瓶中，用30%乙醇定容，測(cè)定其吸光度，依回歸方程計(jì)算提取物中總黃酮的含量，結(jié)果見(jiàn)表2。

表2 提取物中總黃酮含量測(cè)定結(jié)果

3 討論

本實(shí)驗(yàn)采用金蓮花藥渣為原材料，首次研究了分別以水和70%乙醇為溶劑提取金蓮花藥渣及其發(fā)酵物中總黃酮，并與相同提取工藝下金蓮花原藥材中總黃酮含量進(jìn)行比較，結(jié)果表明，金蓮花藥渣乙醇提取物中總黃酮含量為9.27%，金蓮花原藥材乙醇提取物的總黃酮含量13.93%，雖然藥渣中總黃酮含量低于原藥材，但只減少了1/3，說(shuō)明藥渣中還有2/3的總黃酮沒(méi)有被提取出來(lái)；以水為溶劑提取金蓮花藥渣總黃酮含量較低。目前多數(shù)藥廠主要以水為溶劑提取金蓮花中藥用成分，故金蓮花藥渣中仍殘存較高含量的黃酮成分，由此說(shuō)明金蓮花藥渣仍具有較高的利用價(jià)值。

本實(shí)驗(yàn)利用中藥發(fā)酵技術(shù)[9]將金蓮花藥渣進(jìn)行了發(fā)酵，結(jié)果表明，發(fā)酵后的藥渣中總黃酮含量明顯低于未發(fā)酵的藥渣，黃酮成分含量降低的原因可能是藥渣中部分黃酮類(lèi)成分經(jīng)過(guò)酵母菌代謝產(chǎn)生了新物質(zhì)[9]，具體是什么物質(zhì)有待進(jìn)一步研究。

[1] 葛曉艷.淺析金蓮花的藥用研究概況[J].黑龍江醫(yī)藥,2012,25(3):444-445.

[2] 劉婉瑩,傅立新,任立楠.金蓮花的藥理活性研究[J].中國(guó)醫(yī)藥指南,2013,11(21):454-455.

[3] 桑秀妹,高華君,敖楊,等.金蓮花藥渣發(fā)酵物葡萄糖含量測(cè)定及影響因素[J].河北聯(lián)合大學(xué)學(xué)報(bào)：醫(yī)學(xué)版,2013,15(6):803-804.

[4] 王珊,桑秀妹,高華君,等.金蓮花藥渣發(fā)酵物對(duì)小鼠應(yīng)激能力的影響[J].河北聯(lián)合大學(xué)學(xué)報(bào)：醫(yī)學(xué)版,2013,15(6):800-801.

[5] 孔慶蘭,韓志強(qiáng),李薇,等.金蓮花提取工藝研究[J].遼寧中醫(yī)藥大學(xué)學(xué)報(bào),2013,15(6):43-44.

[6] 薩楚拉圖,莎木嘎,趙智宏,等.芙蓉花中總黃酮的提取工藝研究[J].內(nèi)蒙古農(nóng)業(yè)大學(xué)學(xué)報(bào),2012,33(5-6):306-308.

[7] 蘇連杰,張衛(wèi)平,趙波,等.不同采收期金蓮花莖葉中總黃酮和葒草苷的動(dòng)態(tài)變化研究[J].中草藥,2012,43(10):2058-2061.

[8] 嚴(yán)力群,丁萬(wàn)隆,朱殿龍.壩上地區(qū)金蓮花及其莖葉總黃酮的測(cè)定[J].世界科學(xué)技術(shù)——中醫(yī)藥現(xiàn)代化,2009,11(3):407-409.

[9] 盧君蓉,王世宇,盛菲亞,等.中藥發(fā)酵研究概況[J].中藥與臨床,2012,3(4):47-49.

(責(zé)任編輯：宋勇剛)

2014-04-05

教育部大學(xué)生創(chuàng)新創(chuàng)業(yè)訓(xùn)練計(jì)劃項(xiàng)目(201210081007)；唐山市“十二五”科技重點(diǎn)項(xiàng)目(10130203-3)；河北聯(lián)合大學(xué)大學(xué)生創(chuàng)新實(shí)驗(yàn)計(jì)劃項(xiàng)目(X2013062)

錢(qián)莊(1991-)，男，河北聯(lián)合大學(xué)在讀生，研究方向?yàn)橹兴幩幚韺W(xué)。

韓淑英(1959-)，女，河北聯(lián)合大學(xué)教授，碩士生導(dǎo)師，研究方向?yàn)橹兴幏乐涡难芗膊　-mail:shuyinghan59@126.com。

R284.2

A

1673-2197(2014)15-0022-02