交通心腎法對(duì)老齡雌性大鼠性激素水平的影響

辛明蔚 劉雁峰 駱斌 武穎 江媚 孫天琳 蘇恒香

隨著社會(huì)進(jìn)步、生活水平提高，人口老齡化越來(lái)越嚴(yán)重，更年期綜合征的發(fā)病率呈逐年上升趨勢(shì)，嚴(yán)重影響了患者的生活質(zhì)量。現(xiàn)代醫(yī)學(xué)一般認(rèn)為卵巢功能衰退、雌激素水平過(guò)度降低是更年期綜合征的發(fā)病機(jī)制。目前西醫(yī)多采用激素替代療法來(lái)防治更年期綜合征，但有一定的副作用和局限性［1-2］。中醫(yī)藥治療本病療效顯著，副作用小，中藥“寧更丹”秉承滋腎養(yǎng)心，交通心腎之法組方，在前期臨床研究中能改善患者五心煩熱、心煩不寧、心悸驚慌等癥狀，有較滿(mǎn)意的臨床療效［3］。本實(shí)驗(yàn)用自然衰老的雌性大鼠為動(dòng)物模型，觀察藥物干預(yù)后大鼠性激素水平的變化，以探討交通心腎法防治更年期綜合征的作用機(jī)理。

1 材料和方法

1.1 試驗(yàn)藥物

實(shí)驗(yàn)用中藥飲片購(gòu)自北京同仁堂股份有限公司。寧更丹為北京中醫(yī)藥大學(xué)東直門(mén)醫(yī)院劉雁峰教授自擬方，組成為:枸杞子15 g、生地黃15 g、丹參15 g、白芍15 g、百合15 g、郁金12 g、合歡皮12 g、蓮子心6 g、鹽知母12 g、生龍骨30 g、生牡蠣30 g。在首都醫(yī)科大學(xué)基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)院中藥實(shí)驗(yàn)室，水煎后濃縮成2.1 g/ml 的藥液，4℃冰箱儲(chǔ)存?zhèn)溆谩Ｎ焖岽贫计? mg/片，拜耳公司生產(chǎn)，批號(hào):257A2。更年安，0.31 g/片，天津中新藥業(yè)樂(lè)仁堂生產(chǎn)，生產(chǎn)批號(hào):D031192。

1.2 動(dòng)物

健康雌性15月齡SD 大鼠，56 只，體重337～490 g，由北京斯貝福實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供。青年鼠:健康雌性3月齡SD 大鼠，14 只，體重228～261 g，由北京維通利華實(shí)驗(yàn)動(dòng)物技術(shù)有限公司提供。

1.3 動(dòng)物模型

健康雌性3月齡SD 大鼠，連續(xù)5 天陰道細(xì)胞學(xué)涂片，選用有動(dòng)情期者，雌性14～15月齡SD 大鼠56 只，常規(guī)飼養(yǎng)l 周，連續(xù)5 天陰道涂片，選用角化細(xì)胞指數(shù)(CI)低于50%者，斷尾取血，放免法測(cè)定血清雌二醇(estradiol，E2)、促卵泡刺激素(follicle stimulating hormone，F(xiàn)SH)、促黃體生成素(luteinizing hormone，LH)。

1.4 動(dòng)物分組

實(shí)驗(yàn)動(dòng)物共分為5 組，每組14 只大鼠，分別為青年鼠(3月齡)，老齡鼠空白組(15月齡)，兩組老鼠連續(xù)每天灌胃蒸餾水3 ml;老齡鼠加中藥寧更丹治療組，連續(xù)每天按20.65 g/kg 灌胃“寧更丹”藥液;老齡鼠加中藥更年安對(duì)照組，連續(xù)每天按0.65 g/kg灌胃更年安藥液;老齡鼠加西藥戊酸雌二醇對(duì)照組，連續(xù)每天按0.12 mg/kg 灌胃戊酸雌二醇藥液;灌胃飼養(yǎng)共28 天。青年鼠14 只，老齡鼠每組14 只，后4 組根據(jù)激素水平測(cè)定值平均分配，使各組分值無(wú)顯著性差異。灌胃飼養(yǎng)過(guò)程中中藥治療組和中藥對(duì)照組分別死亡一只老鼠。

1.5 生化指標(biāo)的檢測(cè)

實(shí)驗(yàn)前斷尾取血，實(shí)驗(yàn)結(jié)束后斷頭取血，放射免疫法測(cè)定血清E2、FSH、LH。

1.6 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理

實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)用SPSS l7.0 統(tǒng)計(jì)軟件包處理，樣品測(cè)定數(shù)據(jù)以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差(±s)表示。以單因素方差進(jìn)行分析，LSD 比較兩組間的情況，所有檢驗(yàn)結(jié)果以P＜0.05 作為評(píng)定差異有顯著性的標(biāo)準(zhǔn)。

2 結(jié)果

由表1可知，與空白組比較，寧更丹治療組E2結(jié)果明顯升高，且有顯著性差異(P＜0.05)，且與戊酸雌二醇組結(jié)果類(lèi)似。更年安對(duì)照組E2 結(jié)果略有升高，但與空白組相比無(wú)顯著性差異。

與空白組比較，寧更丹治療組、戊酸雌二醇組、更年安對(duì)照組FSH 結(jié)果均有降低，且有顯著性差異(P＜0.05)，但是戊酸雌二醇組下降更明顯。寧更丹治療組和更年安對(duì)照組之間FSH 結(jié)果無(wú)顯著性差異。

五組間LH 結(jié)果無(wú)差異。

表1 用藥前后各組E2、FSH、LH 比較

3 討論

3.1 模型的選擇及評(píng)價(jià)

目前，部分實(shí)驗(yàn)研究采用去勢(shì)大鼠模型，通過(guò)切除動(dòng)物卵巢，人為制造一個(gè)雌激素突然降低的環(huán)境來(lái)模擬人類(lèi)更年期發(fā)生過(guò)程，但孫靜汾等［4］采用15月齡大鼠與去勢(shì)模型相比，兩模型陰道脫落細(xì)胞涂片及血清性激素水平均有圍絕經(jīng)期改變，證明本模型可以達(dá)到去勢(shì)模型同樣的造模效果，所以本模型的建立是成功的，但去勢(shì)模型鼠沒(méi)有自然衰老過(guò)程，其他各個(gè)系統(tǒng)均為青年，與圍絕經(jīng)期機(jī)體老化有一定差距;另外，去勢(shì)模型鼠卵巢的徹底切除與圍絕經(jīng)期鼠卵巢功能的衰竭有著本質(zhì)的不同，本模型比去勢(shì)模型更接近事實(shí)本身，用此模型研究圍絕經(jīng)期綜合征更具有說(shuō)服力。

3.2 交通心腎法治療更年期綜合征

中醫(yī)藥治療更年期綜合征有著獨(dú)特的療效和特色，任婕等［5］分析了2006年10月至2007年6月在全國(guó)7 家三級(jí)甲等醫(yī)院就診的1584例病例(其中圍絕經(jīng)期802例，絕經(jīng)后期782例)后認(rèn)為心腎不交證是更年期綜合征的常見(jiàn)證型之一，該病之病機(jī)與心腎相關(guān)。腎在下焦屬水，以上升為順;心在上焦屬火，以下降為和。心中之陽(yáng)下降至腎，能溫養(yǎng)腎陽(yáng);腎中之陰上升至心，則能涵養(yǎng)心陰。在正常情況下，心火和腎水就是互相升降、協(xié)調(diào)，彼此交通，保持動(dòng)態(tài)平衡。如腎陰虧虛，腎水不足，不能上濟(jì)于心，心火獨(dú)亢，心腎失濟(jì)，陰陽(yáng)失衡則發(fā)為更年期綜合征。因此治療上應(yīng)著重滋腎寧心，“寧更丹”方中丹參、百合清心除煩，養(yǎng)血安神;合歡皮、郁金疏肝解郁，清心安神;生龍骨、生牡蠣潛陽(yáng)補(bǔ)陰，重鎮(zhèn)安神;枸杞子、生地黃滋補(bǔ)肝腎之陰，白芍平抑肝陽(yáng)，養(yǎng)血斂陰，蓮子心，《本經(jīng)逢原》述其“得水之精英，補(bǔ)中養(yǎng)神，益氣清心，固精止瀉，除崩帶赤白濁，能使心腎交而成既濟(jì)之妙”，《本草蒙筌》謂其:“味甘、澀，氣平、寒。無(wú)毒。利益十二經(jīng)脈血?dú)猓簿干舷戮嗷鹦啊！彼员痉接闷浣煌ㄐ哪I，滋腎寧心安神。諸藥合用能使腎水充，心神寧，故前期臨床研究顯示能有效緩解潮熱汗出、急躁易怒、頭痛頭暈、失眠多夢(mèng)諸癥，臨床療效頗佳［3］。

3.3 植物雌激素的作用

植物中一類(lèi)具有雌激素樣或抗雌激素作用的活性成分被稱(chēng)為植物雌激素(phytoestrogen，PE)，其雜環(huán)多酚類(lèi)結(jié)構(gòu)類(lèi)似于內(nèi)源性雌激素，能夠與哺乳動(dòng)物或人的雌激素受體(estrogen receptor，ER)結(jié)合，起到微弱的雌激素樣或抗雌激素樣活性效應(yīng)［6］。本方中枸杞子可通過(guò)調(diào)控雌激素的代謝，使雌激素經(jīng)C-2 羥基化與C-16α 羥基化作用分別代謝生成2-羥雌酮與16α-羥雌酮，通過(guò)調(diào)節(jié)2-羥雌酮與16α-羥雌酮的比例而發(fā)揮藥理效應(yīng)［7］;丹參主要活性成分為黃酮類(lèi)、萜類(lèi)和甾醇等，主要有效成分丹參酮可以使幼齡雌鼠子宮質(zhì)量明顯增加，成年雌鼠服用丹參酮后陰道細(xì)胞學(xué)檢查呈現(xiàn)動(dòng)情期變化［8］。Fan 等［9］研究表明，丹參酮IIA 通過(guò)ER 亞基(ERα或ERβ)的介導(dǎo)，使得海拉細(xì)胞中雌激素應(yīng)答元件(estrogen response element，ERE)的熒光素酶活性增加，呈現(xiàn)出一定的雌激素樣活性。但是由于植物中化學(xué)成分比較復(fù)雜，發(fā)揮雌激素樣作用的活性物質(zhì)也不止一種，故中藥中的有效成分相互之間存在協(xié)同性和多靶向性［6］，故本方是否主要通過(guò)這兩味藥發(fā)揮類(lèi)雌激素樣的作用尚需進(jìn)一步研究。

3.4 交通心腎法對(duì)模型大鼠性激素的調(diào)節(jié)

目前更年期綜合征的發(fā)病機(jī)制尚未完全明了，但是大量的臨床和實(shí)驗(yàn)研究表明，更年期綜合征患者血清E2 水平低于更年期無(wú)癥狀者，而FSH 則明顯高于無(wú)癥狀者，說(shuō)明雌激素降低是更年期綜合征的發(fā)病基礎(chǔ)。因此，觀察E2、FSH 含量的變化，在更年期綜合征的診斷和治療中，有著十分重要的意義。前期臨床研究結(jié)果顯示［3］，更年期患者的血清FSH、LH 水平較治療前下降，E2 水平較治療前升高，由此可見(jiàn)，改善患者的生殖內(nèi)分泌功能可能是“寧更丹”治療更年期綜合征的機(jī)制之一。

更年期婦女由于雌激素不足，對(duì)下丘腦—垂體不能進(jìn)行有效的負(fù)反饋，致使垂體分泌促性腺激素增加。垂體FSH 的釋放受卵巢激素的反饋抑制較LH 敏感，因此FSH 的變化比LH 更明顯。本實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，給予老齡大鼠寧更丹治療后，與空白組比較，中藥治療組雌激素明顯升高，有顯著性差異(P＜0.05)，且與西藥對(duì)照組結(jié)果類(lèi)似。與文獻(xiàn)報(bào)道一致［10］，當(dāng)植物雌激素使用足夠劑量時(shí)，可以產(chǎn)生與體內(nèi)17β-雌二醇相似的效應(yīng)。中藥對(duì)照組結(jié)果略有升高，但無(wú)顯著性差異。與空白組比較，中藥治療組、西藥對(duì)照組、中藥對(duì)照組FSH 均有降低，且有顯著性差異(P＜0.05)，但是西藥對(duì)照組下降更明顯，與中藥治療組和中藥對(duì)照組相比有顯著性差異(P＜0.05)，而中藥治療組和中藥對(duì)照組之間無(wú)顯著性差異。老齡空白組FSH 水平較實(shí)驗(yàn)前升高，可能與其飼養(yǎng)過(guò)程中進(jìn)一步衰老有關(guān)。可以看出交通心腎中藥治療后可以升高老齡大鼠的E2 水平，降低FSH 水平，從而延緩老齡大鼠更年期的進(jìn)程，與本課題組前期臨床研究結(jié)果一致［3］，為交通心腎法治療更年期綜合征提供了實(shí)驗(yàn)依據(jù)，同時(shí)也發(fā)現(xiàn)中藥更年安對(duì)照組在降低FSH 水平方面也有明顯效果，但是對(duì)E2 水平升高作用不明顯。

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