丹參酮ⅡA固體脂質納米粒的制備及質量評價*

瞿繼蘭，劉志東，郭秀君，龐曉晨，韓真真

（1．天津中醫藥大學，現代中藥發現與制劑技術教育部工程研究中心，天津 300193；2．天津中醫藥大學，天津市現代中藥重點實驗室，天津 300193）

丹參酮ⅡA固體脂質納米粒的制備及質量評價*

瞿繼蘭，劉志東，郭秀君，龐曉晨，韓真真

（1．天津中醫藥大學，現代中藥發現與制劑技術教育部工程研究中心，天津 300193；2．天津中醫藥大學，天津市現代中藥重點實驗室，天津 300193）

[目的]以山崳酸甘油酯和單硬脂酸甘油酯為載體材料制備丹參酮IIA固體脂質納米粒(TA-SLN)并評價其質量。[方法]采用乳化固化法制備TA-SLN，以包封率為指標，通過單因素考察法對處方進行優化，激光粒徑測定儀測定其粒徑、電位，并用差示掃描量熱儀（DSC）表征其性質。[結果]制備的TA-SLN平均粒徑為(110±4)nm，Zeta電位為-34.4 mV，包封率為79.08%。DSC表明其理化性質穩定可靠。[結論]采用乳化固化法制備的TA-SLN粒徑和包封率較適宜,理化性質穩定,為開發其新制劑奠定了實驗基礎。

丹參酮ⅡA；固體脂質納米粒；質量評價

丹參為唇形科植物丹參（SalviamiltiorrhizaBunge）的干燥根及根莖，丹參酮ⅡA（TA）為丹參的主要有效成分之一[1]，具有改善心腦血管疾病，抗炎，保肝，且對多種腫瘤細胞具有殺傷、誘導分化、凋亡和抑制侵襲作用[2-6]。因TA為小分子脂溶性成分,半衰期短，普通制劑口服生物利用度低，直接影響其臨床療效。而作為新型載藥系統的固體脂質納米粒,可提高藥物的生物利用度，增加被包裹藥物的穩定性，且具有良好的靶向作用[1，7]。而山崳酸甘油酯及單硬脂酸甘油脂均為在體內可降解，生物相容性好，毒性低的脂質載體，故為提高TA的生物利用度[8-11]，本實驗采用乳化固化法制備了丹參酮ⅡA固體脂質納米粒（TA-SLN），并對其粒徑，電位，包封率進行了測定，并用差示掃描量熱法（DSC）表征其性質。

1 儀器與試藥

1.1 儀器 TK-20A型透皮擴散試驗儀﹙上海鍇凱科技貿易有限公司﹚；激光粒徑測定儀（馬爾文，英國）；AX205電子天平（Mettler Toledo，瑞士）；Milli－Q超純水系統（Millipore，美國）；XS20S型電子天平（十萬分之一，Mettler-Toledo，瑞士）。

1.2 試藥 丹參酮IIA（南京澤朗醫藥，≥98%）；卵磷脂（Lipoid，美國）；單硬脂酸甘油酯（天津市北方天醫化學試劑廠）；Myrj52（南京威爾化工有限公司）；山崳酸甘油酯ATO888（Gattefosse，法國）；超濾離心管（Millipore，美國）；三氯甲烷，乙醇，甲醇（天津康科德科技有限公司）；三氯甲烷，乙醇均為分析純，甲醇為色譜純；

2 方法與結果

2.1 丹參酮IIA固體脂質納米粒制備工藝 稱取Myrj52 600 mg，加入超純水10 mL，水浴75℃使溶解作為水相。另稱取TA 1 mg、卵磷脂200 mg、單硬脂酸甘油酯70 mg及山崳酸甘油酯30 mg溶于5 mL無水乙醇，加熱使溶解構成有機相。將有機相緩慢注入600 r/min攪拌的水相中，繼續攪拌至有機溶劑揮發完全至5 mL。經微孔濾膜過濾后，即得TASLN[10，12-13]。

2.2 粒徑及Zeta電位測定 取適量最優處方制備的TA-SLN，用水稀釋10倍，分別測定粒徑和Zeta電位。粒徑為（110±4）nm，Zeta電位為-34.4 mV，見圖1。

2.3 包封率及載藥量的測定

2.3.1 色譜條件 色譜柱：DIKMA ODS C1（8200 mm× 4．6 mm，5 μm）；流動相：甲醇-水（90∶10）；檢測波長：269 nm；流速：1 mL/min；柱溫：30℃；進樣量：20 μL。

2.3.2 標準曲線的制備 精密稱取TA適量，甲醇依次精密稀釋得到濃度為4.36，8.72，12.5，43.6，204 μg/mL的系列對照品溶液。進樣20 μL分析，以峰面積Y=97.434X+ 117.87，r2=0.999 4。結果表明TA在4.36~204 μg/mL范圍內線性關系良好。

2.3.3 回收率試驗 按處方比例制備空白固體脂質納米粒，各取500μL，精密加入204、43.6、4.36μg/mL的TA對照品溶液適量，用甲醇定容。過濾，分別取續濾液20 μL進樣，根據測得的藥物量和加入的藥物量來計算回收率。結果平均回收率為（98．4±2．3）%（n＝3）。

圖1 TA-SLN粒徑（左）及zeta電位（右）分布圖Fig.1 Size(left)and zeta potential(right)distribution of TA-SLN

2.3.4 精密度試驗 取質量濃度為204，43.6，4.36 μg/mL的TA甲醇溶液，分別于1 d內測定5次，計算日內精密度；每天測定1次，連續測定5 d，計算日間精密度。結果日內RSD為0.29%，日間RSD為0.86%。2.3.5 載藥量和包封率測定 運用離心超濾法分離納米粒和游離藥物。取TA-SLN 0.2 mL，甲醇10倍破乳，超聲30 min，4 000 rpm離心20 min，取上清，過0.45 μm濾膜，HPLC法測定TA的含量，即為總藥物含量W總。取TA-SLN0.5mL，超純水稀釋至2.5mL，置于超濾離心管內（30 K），4 000 min離心20 min后取下層溶液，HPLC測定TA含量，即為游離藥物含量W游，包封率（EE%）=（1－W游/W總）×100%，載藥量（LC%）＝W包封的納米粒/W脂質材料×100%。式中W游：納米粒中游離藥物的質量；W總：納米粒中總藥物的質量；W包封的納米粒：包在納米粒中的TA質量；W脂質材料：脂質材料質量。此方法能很好的分離納米粒和游離藥物，且簡單易行，重現性好，故采用超濾法測定TASLN的包封率。

2.4 處方篩選 以包封率、粒徑及穩定性為綜合考察指標，對脂質材料、表面活性劑的種類和用量及制備工藝進行篩選，最終確定以山崳酸甘油酯和單硬脂酸甘油酯為脂質材料，以Myrj52和卵磷脂復配作為表面活性劑（水相中Myrj52和有機相中卵磷脂的比例為3∶1），有機相和水相的體積比為1∶2，乳化溫度為（75±2）℃，轉速為600 r/min。在此條件下制備的TA-SLN粒徑較小且包封率和穩定性高。

2.5 重復性試驗 按最優處方制備3批TA-SLN包封率分別為77%、79%、82%，表明重復性較好。

2.6 TA-SLN的理化性質分析 DSC分析取TA及凍干的空白納米粒，TA-SLN及TA與空白固體脂質納米粒物理混合物（2∶1）5.6 mg，以10℃/min的速度從0℃到300℃程序升溫，結果見圖2。

圖2 差示掃描量熱儀（DSC）圖譜Fig.2 DSC spectrum

本文采用乳化固化法，以山崳酸甘油酯和單硬脂酸甘油酯為載體材料制備的TA-SLN平均粒徑為（110±4）nm，Zeta電位為－34.4 mV，包封率為79.08%。DSC表明其理化性質穩定可靠，為開發其新制劑提供了實驗依據。

3 討論

在處方篩選過程中，單獨用山崳酸甘油酯作為脂質材料發現藥物的穩定性差，2 d后藥物沉淀，之后通過查閱文獻[14]以及摸索條件，最終確定以山崳酸甘油酯和單硬脂酸甘油酯共同為載體材料制備的固體脂質納米粒穩定性以及粒徑，電位，包封率均較好，故選用山崳酸甘油酯和單硬脂酸甘油酯為脂質載體。

在優化處方過程中，剛開始暫定Myrj52的量為200 mg，卵磷脂的量為90 mg，可是發現制劑渾濁，且攪拌時間較長，粒徑大于250nm，單因素考察Myrj52和卵磷脂的量，兩者的量均不能減少，只能增加，待Myrj52的量為600 mg，卵磷脂的量為200 mg時，固體脂質納米粒的包封率和粒徑較適宜，故選此為較優處方。

在DSC評價藥物及載藥的固體脂質納米粒的結晶度時[11]，TA以43.73 J/g的能量在220℃出現尖銳的吸熱峰，相對應于TA的熔點，表明其為結晶態；空白納米粒與納米粒出現鈍峰，未出現尖銳的吸熱峰，可能是由于藥物被包裹，藥物的形態發生變化，由結晶態變成了無定形態，失去其結晶態，而在物理混合物中又出現了TA尖銳的吸熱峰，只不過以更低的能量26.12 J/g轉化為低熔點204℃，這可能是由于純物質與空白SLN相混合所引起的作用，特別是混合的凍干保護劑之間的作用，這導致了TA結晶部分以較低的熔化焓轉換成它的無定形形式和多種無定形的混合物。

[1]楊雪鷗，王小云，開國銀，等.丹參酮IIA抗腫瘤作用及其新劑型的研究進展[J].中成藥，2011,33(8)：1389-1391.

[2] 羅彩蓮.丹參的藥理作用與臨床應用[J].中國當代醫藥，2012,19 (12):11-12.

[3] 張偉偉，陸 茵.丹參抗腫瘤活性成分研究新進展[J].中國中藥雜志，2010,35(3):389-392.

[4]王羽倫，李 康，侯連兵,等.丹參酮ⅡA的臨床應用與配伍禁忌[J].醫藥導報，2011,30(12):1657-1659.

[5] 張 欣,張蒲蓉,陳 潔,等.丹參酮ⅡA對乳腺癌抑制作用的體內實驗研究[J].四川大學學報（醫學版），2010,41(1)：62-67.

[6]張萌濤，錢亦華，唐安琪.丹參酮ⅡA藥理作用的研究進展[J].醫學綜述，2010，16(17)：2661-2664.

[7]姚 佳.固體脂質納米粒技術及其應用[J].臨床合理用藥,2012,5 (11):149-150.

[8]安 蕓，苗 方，尹祥敏，等.丹參酮ⅡA固體脂質納米粒的制備[J].醫學理論與實踐，2009，22(7)：869-870.

[9]杜志永，劉建平，朱家壁，等.丹參酮IIA固體脂質納米粒的制備及大鼠在體腸吸收研究[J].中國藥學雜志，2004，39(8)：611-613.

[10]李佳瑋，趙海南，郭秀君，等.鹽酸小檗堿眼用固體脂質納米粒的研究[J].天津中醫藥大學學報,2012,31(3)：157-159.

[11]Li SW,Guo XJ,Zhidong Liu ZD,et al.Preparation and evaluation of charged solid lipid nanoparticles of tetrandrine for ocular drug delivery system:pharmacokinetics,cytotoxicity and cellular uptake studies[J].Drug Development and Industrial Pharmacy,DOI:2013,79 (5):58.

[12]饒衛兵，郝存江，魏 麗，等.薄膜-超聲分散法制備川芎嗪固體脂質納米粒[J].天津中醫藥，2009,26(6):503-505.

[13]王婧雯,湯海峰,沈 敏，等.齊墩果酸固體脂質納米粒的制備與質量評價[J].第四軍醫大學學報,2007,28(5):472-474.

[14]張先洲,陳曉清,潘細貴，等.青藤堿固體脂質納米粒的制備[J].中國醫院藥學雜志，2008,28(24)：2081-2084.

Preparation and quality evaluation of tanshinonesⅡA solid lipid nanoparticles

QU Ji-lan,LIU Zhi-dong,GUO Xiu-jun,PANG Xiao-chen,HAN Zhen-zhen
（1.Tianjin University of Traditional Chinese Medicine,Engineering Research Center of Modern Chinese Medicine Discovery and Preparation Technique,Ministry of Education,Tianjin,300193,China;2.Tianjin University of Traditional Chinese Medicine,Tianjin Modern Chinese Medicine Key Laboratory,Tianjin 300193,China）

[Objective]To prepare tanshinonesⅡA-loaded solid lipid nanoparticles with docosanoic acid glyceride and glyceryl monostearate as its lipid matrix and investigate its quality.[Methods]TanshinonesⅡA-loaded solid lipid nanoparticles were prepared by emulsion evaporation-solidification.With encapsulation efficiency as index,through the single factor the formulation was optimized,using laser particle size analyzer its particle size was measured,Using potential and use DSC its properties was characterized.[Results]The obtained solid lipid nanoparticles had an average size of(110±4)nm,zeta potential was-38.5 mV and the entrapment efficiency was 79.08%.DSC showed that its physical and chemical properties were stable and reliable.[Conclusion]The solid lipid nanoparticles prepared by the emulsion evaporation-solidification have an appropriate size,the encapsulation efficiency and stable physical and chemical properties have provided an experimental foundation for the development of the new formulation.

TanshinonesⅡA;solid lipid nanoparticles;quality evaluation

R285.5

A

1672-1519（2014）09-0564-03

2014-04-30）

（本文編輯：高 杉，張震之）

10.11656/j.issn.1672-1519.2014.09.16

教育部新世紀優秀人才支持計劃（NCET-12-1068）。作者簡介：瞿繼蘭（1988-），女，碩士研究生，主要從事緩控釋制劑及靶向制劑的研究

劉志東，E-mail:lonerliuzd@163.com。