BCL6共抑制因子樣蛋白1在老年非小細胞肺癌患者組織中表達及其對遠期預后的影響

朱曉菡 田 杰

(鄭州鐵路職業技術學院，河南 鄭州 451460)

非小細胞肺癌(NSCLC)是常見的惡性腫瘤之一，占肺癌總數的80%～85%〔1〕。流行病學顯示，約75%的NSCLC老年患者發現時已處于中晚期，5年生存率很低〔2〕。上皮鈣黏素屬于鈣黏素家族，可介導同型細胞黏附。研究表明〔3〕，上皮鈣黏素表達的異常可能導致腫瘤細胞上皮表型缺失。BCL6共抑制因子樣蛋白(BCORL)1是一種轉錄共抑制因子。BCORL1可以與C-末端結合蛋白協同或者結合啟動子區域特定位點抑制上皮鈣黏素基因轉錄〔4〕。本研究探討BCORL1在NSCLC組織中表達及其對老年患者遠期預后的影響。

1 資料與方法

1.1一般資料 79例手術后NSCLC癌組織標本及其癌旁組織標本，收集時間2010年1月至2014年3月。年齡60～76歲，平均(66.4±5.5)歲，分化程度：高分化13例、中分化24例、低分化42例。

1.2納入、排除標準 納入標準：①實驗標本均來源于手術切除標本，術后實施病理學檢測確診為肺癌；②手術治療前無免疫治療、放射治療及化療史；③年齡<79歲；④本研究獲得醫學倫理委員會的批準。排除標準：①轉移性肺癌；②放化療治療史；③臨床資料缺失。

1.3檢測方法 采用免疫組化SP法檢測經過石蠟包埋的組織切片中BCORL1蛋白表達，將臨床上收集的術后NSCLC癌組織及其癌旁組織標本，二甲苯脫蠟、梯度乙醇水化處理，使用10 mmol/L 檸檬酸鹽緩沖液(pH6.5)中孵育20 min，溫度為98℃進行抗原修復。冷卻至室溫后，使用3%H2O2封閉內源性過氧化物酶，3%牛血清蛋白封閉1 h，將1∶100稀釋的兔抗人BCORL1多克隆抗體加入(武漢艾美捷科技有限公司)，4℃過夜。沖洗后滴加生物素標記的驢抗兔IgG工作液(武漢艾美捷科技有限公司)，室溫孵育1 h，滴加辣根過氧化物酶標記的鏈霉卵白素工作液，37℃孵育1 h。二氨基聯苯胺(DAB)顯色處理3～10 min，終止反應,雙蒸水充分洗滌。蘇木素復染1 min，脫色后顯微鏡下觀察。

1.4結果判斷 免疫染色后結果判定：BCORL1蛋白主要定位在細胞質中，陽性染色的細胞質中可見黃色、褐色的顆粒，①根據細胞質染色程度進行計分，無色0分、淡黃色1分、棕黃色2分、深褐色3分；②在一個視野內根據陽性染色細胞所占比例進行計分：≤10%(1分)、 11%～50%(2分)、 51%～75%(3分)、如果>75%(4分)，取染色程度積分與染色陽性的細胞比例積分進行乘積計算，總分<3分(陰性)、總分≥3分(陽性)。總分<3分則判斷為“-”；為3～5分則判斷為“+”；為6～9分則判斷為“”；>9分則判斷為“”。

1.5統計學方法 采用SPSS16.0統計軟件進行χ2檢驗和多因素分析。

2 結 果

2.1兩類組織標本BCORL1蛋白表達率比較 癌組織中BCORL1蛋白陽性表達率(70.89%，+18例、31例、7例)明顯高于癌旁組織(25.32%，+19例、1例、0例；χ2=32.858，P<0.001)。

2.2癌組織標本中BCORL1蛋白陽性表達率與老年患者臨床病理特征的關系 BCORL1蛋白陽性表達與NSCLC老年患者的年齡、性別、病灶直徑、病理學類型無關(P>0.05)；與TNM分期、分化程度、淋巴結轉移具有相關性(P<0.05)；見表1。

2.3隨訪情況及多因素分析 12～36個月隨訪觀察，BCORL1蛋白陽性表達者3年生存率〔21.42%(14/56)〕顯著低于陰性表達者〔47.83%(11/23)；χ2=5.505，P=0.019〕。采用Cox比例風險回歸模型進行分析，結果顯示分化程度減低、淋巴結轉移、BCORL1蛋白陽性表達是NSCLC老年患者不良預后的獨立危險因素(P<0.05)；見表2。

表1 癌組織標本中BCORL1蛋白陽性表達率與老年患者臨床病理特征的關系〔n(%)〕

表2 Cox多因素分析結果

3 討 論

肺癌根據病理學類型大體分為NSCLC和小細胞肺癌(SCLC)，兩者分別約占肺癌發病總數的80%和20%〔5〕。臨床上，由于NSCLC確診時多數老年患者已發展為晚期或局部晚期，不適合手術切除，此時需進行全身的化療和放療。

轉移是腫瘤惡化的主要原因，腫瘤轉移是一個多種基因結構和功能異常參與的多步驟復雜過程〔6〕。上皮鈣黏素屬于鈣黏素家族，主要分布于非神經上皮組織。上皮鈣黏素可介導同型細胞黏附，參與胚胎發育及正常組織中上皮細胞層形成和維持〔7〕。Cui等〔8〕研究表明，上皮鈣黏素表達異常可能是腫瘤細胞上皮侵襲、轉移潛能增加的原因。Liu等〔9〕研究顯示，上皮鈣黏素還能抑制腫瘤細胞產生基質金屬蛋白酶，從而抑制腫瘤細胞中各種蛋白降解。上皮鈣黏素在腫瘤發生、發展過程中可能具有多方面作用。Eberlein等〔10〕研究發現，在NSCLC中，上皮鈣黏素啟動子甲基化狀態與其基因表達調控相關。

腫瘤發展過程涉及多種基因功能的概念，上游基因可能是下游基因改變的原因。BCORL1是近年來受到關注的一種轉錄共抑制因子，具有抑制上皮鈣黏素基因轉錄的作用。BCORL1通過結合啟動子區域特定位點抑制 E-cadherin基因轉錄，另外，BCORL1也可以與 C端結合蛋白(CtBP)協同作用〔11〕。研究顯示，BCORL1在正常組織中呈現低表達或表達缺失，僅僅在睪丸和前列腺組織中呈現高表達〔12〕。BCORL1在胃癌組織中具有較高表達，且與腫瘤惡化程度呈負相關〔13〕。此外，在肝細胞癌中BCORL1表達水平明顯高于癌旁組織〔14，15〕。免疫組化法具有精確定位和定性的特點，常用于腫瘤學的檢測。本研究提示BCORL1蛋白在肺癌的發生、發展中可能起重要作用。初步推測BCORL1在肺癌中可能是一個癌基因，能通過轉錄抑制上皮鈣黏素發揮促癌功能，但具體功能及精確的分子機制有待研究。本研究說明BCORL1與分化程度、淋巴結是否轉移協同影響NSCLC患者預后，BCORL1可能作為NSCLC 預后判斷的分子指標，并可能成為其治療的潛在靶點。