土鱉蟲藥材質量標準的提高

水彩紅 曹 紅

（中國人民解放軍總后勤部衛生部藥品儀器檢驗所，北京 100071）

土鱉蟲藥材質量標準的提高

水彩紅 曹 紅

（中國人民解放軍總后勤部衛生部藥品儀器檢驗所，北京 100071）

目的對土鱉蟲藥材的質量標準進行方法提高。方法采用薄層色譜法對土鱉蟲中所含四種主要的氨基酸精氨酸、甘氨酸、纈氨酸、苯丙氨酸進行定性鑒別；采用高效液相色譜法測定該藥材中尿囊素的含量，色譜柱為Agilent ZORBAX NH2（150 mm×4.6 mm；5μm）；流動相：乙腈-水（96∶4）；檢測波長：205 nm；柱溫：40 ℃；結果薄層色譜法可鑒別出該藥材中的精氨酸、甘氨酸、纈氨酸、苯丙氨酸，薄層色譜斑點清晰。尿囊素在0.01402～0.4206 μm范圍內，進樣量與峰面積線性關系良好（r＝0.9999）；樣品的平均加樣回收率為：99.76%，RSD為1.02%，（n=6）。結論此方法簡便、準確、重復性好，能有效控制土鱉蟲藥材的質量。

土鱉蟲；TLC；HPLC；氨基酸；尿囊素

土鱉蟲是傳統的活血化瘀及治療外傷的中藥。始載于《神農本草經》，具有破瘀血、續筋接骨的功效，主要用于治療筋骨折傷、血瘀經閉等病癥。據文獻報道，土鱉蟲中所含的蛋白質、氨基酸是活血化瘀的有效成分；尿囊素具有鎮靜作用，且外用能促進皮膚潰瘍面和傷口愈合及生肌作用[1，2]。本文通過薄層色譜法，對土鱉蟲中的主要氨基酸進行定性鑒別；采用高效液相色譜法對土鱉蟲中的尿囊素進行含量測定，以提高藥材質量。

1 儀器與試藥

1.1 儀器

METTLER XS 205DU電子天平；Agilent-1200高效液相色譜儀；KQ-300E型超聲波清洗器。

1.2 對照品與試藥

對照品：精氨酸對照品（批號110872-201207）、甘氨酸對照品（批號110735-200102）、纈氨酸對照品（批號110874-201207）、苯丙氨酸對照品（批號111615-200301）、尿囊素對照品。試藥：土鱉蟲藥材，北京綠野藥業有限公司（批號：10072506、10072507），藥店自購土鱉蟲藥材1批（產地河北，批號10061201）硅膠G薄層板：青島海洋化工。乙腈為色譜純；水為重蒸水；其他試劑均為分析純。

2 薄層色譜鑒別

2.1 對照品溶液的制備

取精氨酸、甘氨酸、纈氨酸、苯丙氨酸對照品，加甲醇制成每1 mL各含0.5 mg的混合溶液，作為對照品溶液。

2.2 供試品溶液的制備

取1 g本品粉末，加50 mL50%的甲醇，超聲處理30 min，濾過，濾液蒸干，殘渣加1 mL甲醇使溶解，作為供試品溶液。

2.3 展開劑與顯色條件

吸取供試品溶液和對照品溶液各5 μL，分別點于同一硅膠G薄層板上。以正丁醇-冰醋酸-水（3∶1∶1）為展開劑，展開，取出，晾干，噴以茚三酮試液，在105 ℃加熱直至出現清晰的斑點。

2.4 結果

供試品色譜中，在與對照品色譜相應的位置上，顯相同顏色的斑點，見圖1。

3 含量測定

3.1 色譜分析條件

色譜柱Agilent ZORBAX NH2（150 mm×4.6 mm；5 μm）；流動相為乙腈-水（96∶4）；檢測波長為205 nm；流速為1.0 mL/min；柱溫40 ℃。

圖1 薄層色譜

3.2 供試品溶液的制備

精密稱取0.3 g土鱉蟲藥材粉末，置具塞錐形瓶中，精密稱定，加入濃度為30%的甲醇25 mL，做30 min超聲處理，自然冷卻后重新稱重，減失的重量用30%的甲醇補足，搖勻，過濾，取續濾液即可。

3.3 專屬性試驗

分別精密吸取對照品溶液、供試品溶液與空白溶劑各5 μL，注入液相色譜儀，記錄色譜圖。結果空白溶劑在與尿囊素對照品相同保留時間處，無明顯色譜峰，對測定無干擾。

3.4 樣品溶液穩定性試驗

將待測樣品溶液，分別在0、2、5、8、12 h測定，結果表明，樣品溶液在12 h內基本穩定，尿囊素峰面積RSD為1.33%。

3.5 精密度試驗（重復性試驗）

取同一批次（10072506）的土鱉蟲藥材，提取方法相同，按上述色譜條件，重復測定樣品6次，結果土鱉蟲藥材中尿囊素的平均含量為：1.033 mg/g，RSD=1.28%（n=6）。表明此法重復性良好。

3.6 線性關系的考察

精密量取尿囊素對照品溶液（0.2804 mg/mL）0.1、0.2、0.5、1.0、2.0、3.0 mL，至10 mL量瓶中，加30%甲醇稀釋至刻度，配制成不同濃度的對照品溶液，依次注入高效液相色譜儀，記錄峰面積，以進樣量（μg）為橫坐標（X），峰面積為縱坐標（Y），繪制標準曲線，回歸方程為：Y=5.36 X–0.5581，相關系數r=0.9999（n=6）。結果表明尿囊素在0.01402～0.4206 μm范圍內呈良好的線性關系。

3.7 準確度試驗（加樣回收率試驗）

精密稱取已知含量的土鱉蟲藥材（批號：10072506，尿囊素含量為：1.033 mg/g）的樣品0.15 g（共測定6份），分別精確加入尿囊素對照品適量，按“3.3”項下方法制備供試品溶液，測定其含量，并計算回收率，尿囊素的回收率為99.76%，RSD為1.02%。結果表明本測定方法的回收率良好。

3.8 樣品測定

按上述方法，對收集到的土鱉蟲藥材進行尿囊素的含量測定，結果為：藥店自購：批號為10061201，測定的尿囊素為0.983 mg/g。北京綠野藥業有限公司：批號為10072506，測定的尿囊素為1.033 mg/ g，批號為10072507，測定的尿囊素為1.005mg/g。

4 討 論

4.1 《中國藥典》2010年版一部中土鱉蟲藥材僅有對照藥材的薄層色譜鑒別，本文建立了土鱉蟲藥材中氨基酸的薄層色譜鑒別，同時采用高效液相色譜法對土鱉蟲中的尿囊素進行含量測定，以更好的控制藥材質量。

4.2 展開系統的選擇

曾選用正丁醇-乙醇-冰醋酸-水（4∶1∶1∶2）、正丁醇-冰醋酸-水（5∶1∶5）、正丁醇-冰醋酸-水（3∶1∶1）等溶液為展開劑。經試驗，本文選用的展開系統各斑點分離效果好，顯色清晰，方法重現性較好，能確證土鱉蟲藥材中氨基酸的特征。

4.3 檢測波長的選擇

對尿囊素在200～400 nm波長范圍內進行光譜掃描，吸收值最大值在205 nm處，靈敏度最高，故選擇其為測定波長。

4.4 含量測定項下供試品溶液提取溶媒的選擇：分別選取甲醇濃度為30%、50%及70%作為提取溶媒進行比較，結果顯示提取較完全的是30%甲醇。

4.5 供試品溶液提取方法的選擇：我們仔細考察了超聲和加熱回流的時間，實驗結果表明：超聲處理30 min尿囊素提取效率較高，且操作簡便。

[1] 國家藥典委員會.中華人民共和國藥典(一部)[S].北京:中國醫藥科技出版社,2010.

[2] 景晶,曹紅.HPLC法測定土鱉蟲中尿嘧啶和尿囊素的含量[J].藥學實踐雜志,2010,28(2):134-136.

表3 兩組治療前后肺功指標比較

沐舒坦主要活性成分是鹽酸氨溴索，能作用于分泌細胞，使漿液分泌增加加強纖毛的擺動，促進痰液排出；降低痰黏稠度、稀釋痰液，使其易于咳出，降低肺泡表面張力，促進肺表面活性物質的合成和分泌，從而促進肺成熟[4]，促進纖毛運動，使受損的纖毛運動加強，進而維護上呼吸道的自凈機制[5]；沐舒坦能刺激肺泡n型細胞合成和分泌肺泡表面活性物質，防止肺泡委陷和肺不張，協助無纖毛區痰液的運送，還可清除氧自由基進而防止肺損傷[6]。當表面活性物質達到一定濃度時還有抗炎作用；抑制炎性介質的釋放；對肺有高度親和力、吸收快，在肺組織中濃度高。沐舒坦作為化痰止咳的輔助藥已廣泛用于臨床，本組結果亦說明沐舒坦具有稀釋痰液、促進黏液排除作用及溶解分泌物的特性，對治療呼吸道感染療效確切[7]。

普米克令舒是新合成的腎上腺糖皮質激素，成分為布地奈德，對氣道的解痙作用是氫化可的松的600倍，是地塞米松的20倍。布地奈德的抗炎強度是二丙酸倍氯米松的2倍，且與之相比具有較少的全身作用；皮質激素的吸入療法由于用量少，藥物不需經血液循環而直接作用于靶器官，因此療效好而不良反應少。布地奈德混懸液（普米克令舒）是目前唯一可霧化給藥的吸入型皮質激素，吸入后部分被吸收至全身，但首次即有85% ～90%的藥物經肝臟降解，所形成的代謝產物活性極低，因此安全可靠。普米克令舒是新合成的腎上腺皮質激素，具有抑制細胞生長因子和趨化因子釋放作用從而使血液中嗜堿粒細胞、嗜酸粒細胞、單核細胞和淋巴細胞，尤其是黏膜上的肥大細胞顯著減少，對中性粒細胞和巨噬細胞趨化因子有明顯抑制作用，從而減少中性粒細胞、巨噬細胞向炎癥部位游走和聚集，可直接收縮血管，從而降低血管通透性和黏膜水腫，阻止變態反應遞質的釋放和降低各種變態反應遞質的活性，能有效清除呼吸道炎癥。高壓空氣泵是以產生的壓縮空氣為動力，噴出的霧化顆粒直徑＜5 pm，可以使藥物最有效地沉積在呼吸道，不需用力吸氣即可達到療效，因而采用了醫用壓縮霧化機這一氣泵驅動裝置，進行被動吸入治療。通氣道高反應性及肺功能損害，主要表現為小氣道阻力增加、阻塞性氣功能障礙。在呼吸功能測定中多項指標，其中FEV1（L）、FEV1/FVC（%）、FEV1/預計值（%）是反映肺功能的最主要指標，治療組經霧化吸人沐舒坦后，氣道阻塞減輕，FEV1（L）、FEV1/FVC（%）、FEV1/預計值（%）明顯升高，氧分壓與二氧化碳分壓也得到明顯改善，與對照組單純霧化吸入相比，改善更明顯，此結果可解釋為急性期治療組顯效率明顯高于對照組，在喘憋、肺部哮鳴音、咳嗽癥狀改善方面優于對照組。故采用鹽酸氨溴索與普米克令舒壓縮霧化吸入治療支氣管炎，諸如肺部哮鳴音、喘憋、咳嗽改善方面較好。臨床療效也有統計學意義（P＜0.05），可以縮短支氣管炎的病程。在肺功能方面有明顯改善。同時氧分壓與二氧化碳分壓也得到明顯改善，此結果可解釋治療組顯效率明顯高于對照組。胸部手術后患者并發肺部感染較為常見，多因術后置胸腔閉式引流，胸部手術創傷使胸廓活動受限，術口疼痛使患者不能有效的排痰等因素引起。尤其是心肺功能不全的老年患者、長期吸煙者和慢性支氣管炎患者的發生率更高。

本試驗結果表明，鹽酸氨溴索、普米克令舒的聯合應用，在老年肺炎患者霧化吸入時有協同作用，可降低氣道阻力，改善肺通氣功能，增加其抗炎活性，臨床效果顯著，且糖皮質激素的吸入其不良反應遠低于全身激素治療，在給藥途徑簡捷的同時，提高了患者的依從性，是老年肺炎治療值得推薦的方法。

參考文獻

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[6] 姜建強.沐舒坦霧化吸人治療毛細支氣管肺炎的療效觀察[J].實用臨床醫學,2006,7(11):144-145.

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R282.74

B

1671-8194（2014）11-0069-02