Survivin、HPV16—E7蛋白、VEGF在宮頸鱗癌及癌前病變中的表達及臨床意義

湯艷

[摘要] 目的 探討Survivin、HPV16-E7蛋白、血管內皮生長因子（VEGF）在宮頸鱗癌及宮頸上皮內瘤樣病變組織中的表達及在宮頸癌發生、發展中的作用。方法 采用免疫組化SP法檢測50例宮頸鱗癌、90例宮頸上皮內瘤變（其中CINⅠ、CINⅡ、CINⅢ各為30例）中Survivin、HPV16-E7蛋白及VEGF的表達，另取正常宮頸者20例為對照組。結果Survivin、HPV16-E7蛋白及VEGF在宮頸鱗癌及宮頸上皮內瘤變（CINⅡ、CINⅢ）中的表達均隨宮頸病變而呈遞增趨勢（P<0.05）；Survivin的高表達與分化程度、臨床分期及淋巴結轉移有關（P<0.05）；VEGF的高表達與分化程度、臨床分期及淋巴結轉移有關（P<0.05）；HPV16-E7蛋白的高表達與分化程度、臨床分期及淋巴結轉移無關（P>0.05）。Survivin與HPV16-E7蛋白和VEGF的表達間存在正相關（r=0.417， P<0.01；r=0.378， P<0.01）。結論Survivin、HPV16-E7蛋白及VEGF與宮頸癌的發生、發展密切相關。

[關鍵詞] 宮頸鱗癌；宮頸上皮內瘤變；Survivin；HPV16-E7；VEGF

[中圖分類號] R737.33 [文獻標識碼] B [文章編號] 1673-9701（2014）08-0101-03

宮頸癌是婦科最常見的惡性腫瘤之一，其發生率和病死率在女性惡性腫瘤中居第二位[1]。腫瘤的發生、演變、惡化是多基因、多因素、多階段的過程，其浸潤和轉移是患者死亡的主要原因。研究表明，宮頸癌的發生、發展是由于致癌因子通過不同機制致使原癌基因激活、抑癌基因失活、細胞增殖及凋亡失調所致[2]。而高危型人乳頭瘤病毒（HPV）的感染在宮頸癌的發生中發揮著重要作用[3]。Survivin是一種凋亡抑制基因，該基因表達的Survivin蛋白是迄今為止發現的分子量最小也是抗凋亡作用最強的凋亡抑制蛋白（inhibition apoptosis protein，IAP）。血管內皮生長因子（VEGF）是目前發現的最重要的促血管生長因子，具有促進血管內皮細胞分化、增生、遷移和浸潤的作用。本研究應用免疫組化SP法檢測Survivin、HPV16-E7蛋白、VEGF 在宮頸鱗癌（squamors cell carcinoma of cervical，SCC）及癌前病變組織中的表達，探討三者在宮頸癌發生、發展中的作用及相互關系。

1 材料與方法

1.1 材料

收集本院2002～2012年手術切除的140例患者石蠟包埋標本，常規取材，所有標本均經病理證實，且確診前未接受任何治療?；颊吣挲g22～56歲，中位年齡41歲。CINⅠ、CINⅡ、CINⅢ各30例。宮頸鱗癌50例：按 FIGO分期（2009年）：Ⅰb期20例、Ⅱa期30例）；按組織分化程度： 高分化22例， 中分化 12例， 低分化 16例；按有無淋巴結轉移：淋巴結轉移陽性者19例，淋巴結轉移陰性者31例。另取同期因子宮肌瘤、子宮腺肌瘤行全子宮切除術并且術后病理證實為正常宮頸者20例作為對照組。

1.2 方法

采用SP法進行免疫組化染色。濃縮型兔抗人Survivin多克隆抗體為Neomarker公司產品，鼠抗人HPV16 -E7單克隆抗體為美國 Santa Cruz公司產品，鼠抗人VEGF單克隆抗體、SP試劑盒等均購自福州邁新生物技術開發有限公司。所有標本經10 %多聚甲醛固定，梯度酒精脫水，常規石蠟包埋，制成4 μm厚的連續切片，根據試劑要求進行抗原熱修復處理后，采用SP法進行免疫組化染色，免疫標記操作及程序見試劑說明書。取已知有該蛋白表達的切片為陽性對照，以PBS代替一抗作陰性對照。

1.3 結果判定

以細胞質內出現棕黃色著色為Survivin 和VEGF 陽性標記。高倍鏡下選取 10 個/ HPE， 每個視野計數 100 個細胞， 以每例陽性細胞數26%～50%為+， 51%～75%為+ +，≥76%為+ + +。以細胞質或細胞核呈棕黃色著色為HPV16- E7陽性標記，連續觀察 10個高倍視野，以陽性細胞數 > 10%為陽性[4]。

1.4 統計學方法

采用SPSS13.0統計軟件進行統計分析，Survivin、HPV16- E7蛋白和VEGF的表達與臨床病理參數間的關系采用χ2檢驗，Spearman相關分析Survivin與HPV16- E7蛋白及Survivin與VEGF的相關性。以P<0.05為差異有統計學意義。

2 結果

2.1 Survivin、HPV16- E7蛋白和VEGF在宮頸組織中的表達

Survivin、HPV16-E7蛋白及VEGF在對照組、CINⅠ組、CINⅡ組、CINⅢ組、宮頸鱗癌中的表達均隨宮頸病變加重而呈遞增趨勢。Survivin在CINⅡ組與CINⅠ組、CINⅢ組與CINⅡ組相比差異有統計學意義（χ2=4.320，P<0.05； χ2=4.444，P<0.05）、HPV16-E7蛋白CINⅡ組與CINⅠ組、CINⅢ組與CINⅡ組相比差異有統計學意義（χ2=5.079，P<0.05； χ2=4.344，P<0.05）；VEGF在CINⅡ組與CINⅠ組、CINⅢ組與CINⅡ組比較差異有統計學意義（χ2=4.812，P<0.05； χ2=4.286， P<0.05）；Survivin、HPV16-E7蛋白及VEGF在SCC組與CINⅢ組比較差異均有統計學意義（χ2=4.391，P<0.05； χ2=3.988，P<0.05； χ2=4.688，P<0.05），見表1。

2.2宮頸鱗癌中Survivin、HPV16- E7蛋白和VEGF的表達與臨床病理參數的關系endprint

HPV16- E7蛋白表達與臨床分期、病理分級及淋巴結轉移均無關（P>0.05）。Survivin的表達在中低分化者中陽性率高于高分化者（χ2=6.158，P<0.05）；Ⅱa期的陽性表達率高于Ⅰb期（χ2=4.678，P<0.05）；淋巴結轉移陽性的表達率高于淋巴結轉移陰性者（χ2=5.898，P<0.05）。VEGF的表達在中低分化者中陽性率高于高分化者（χ2=5.082，P<0.05）；Ⅱa期的陽性表達率高于Ⅰb期（χ2=6.527，P<0.05）；淋巴結轉移陽性的表達率高于淋巴結轉移陰性者（χ2=6.727，P<0.01），見表2。

2.3 各組中Survivin的表達與HPV16-E7蛋白、VEGF表達的關系

本組資料中，在CINⅡ、CINⅢ及宮頸鱗癌組中Survivin與HPV16- E7蛋白的陽性表達間存在正相關（r=0.417，χ2=19.125，P<0.01）；Survivin與VEGF的陽性表達間存在正相關（r=0.378， χ2=15.707，P<0.01），見表3。

3 討論

在宮頸非典型增生向宮頸癌演變過程中，病毒整合是一重要機制。病毒的整合導致了病毒基因表達失調、宿主基因不穩定，甚至導致了細胞癌基因的激活，決定了細胞的惡性生物學行為[5]。大量流行病學和生物學資料顯示，高危型HPV感染是誘發宮頸癌的重要原因。HPV的致病機制相當復雜，目前認為主要是由于HPV的E6和E7癌蛋白分別與其宿主細胞的p53和pRB蛋白結合，從而導致了p53和pRB蛋白降解和滅活，進而使上皮細胞退出分化程序，持續增生而導致腫瘤發生[6]。而HPV16與宮頸鱗癌關系最為密切[7]。本研究表明，在宮頸鱗癌中HPV陽性率明顯高于CIN和正常宮頸組，CINⅡ組及CINⅢ組亦高于對照組，其與宮頸癌臨床分期、病理分級、淋巴結轉移無關。表明HPV感染是宮頸癌發生發展的重要原因之一。因此，預防HPV感染對防止宮頸癌的發生具有重要意義。

Survivin 基因是近年來分離的凋亡抑制蛋白IPA基因家族的新成員。Survivin 的作用靶點位于凋亡途徑的下游匯集點，通過死亡受體途徑和線粒體途徑，最終作用于Caspase-3和Caspase-7起到抗凋亡作用[8]。Survivin基因只在胚胎中表達，在成人已分化組織中不表達或低表達，但在人體內的幾乎所有惡性腫瘤中都有明顯表達[9]。本實驗表明，Survivin在正常宮頸中低表達，在宮頸癌及其癌前病變中的表達隨病情進展有逐漸增高趨勢。CINⅡ組、CINⅢ組、SCC組與對照組相比均有統計學意義（P<0.05）。而CINⅡ組與對照組比較差異有統計學意義（P<0.05），提示在宮頸癌病變過程中的早期已有凋亡調節的參與。此結果與張璇等[10]的研究結果一致。

腫瘤血管生成在腫瘤組織的生長、轉移中起著重要作用。VEGF是腫瘤血管生成過程中特異性最強的促血管生長因子，其在很多人類的腫瘤細胞中存在高水平的表達，且在一定程度上促進腫瘤細胞生長[11]。其與多種腫瘤的生長、轉移及預后密切相關。本研究顯示，從正常宮頸到CIN，再到宮頸癌，VEGF表達水平呈進行性升高，該結果與Dai[12]等結果相符。

本研究還發現，Survivin的表達和HPV16-E7蛋白的表達呈正相關（r=0417，P<0.05）。這與王江莉等[13]的研究一致。由此推測，HPV16可能直接或間接調節了Survivin蛋白的表達及細胞分布，兩者對宮頸癌的發生可能起著協同作用。近年來研究證實內皮細胞中表達的VEGF能誘導和促進 Survivin 的高表達，而 Survivin 的表達上調又是內皮細胞在血管生成過程中維持生存活力的必要條件[14，15]。本實驗結果亦表明，宮頸癌及癌前組織中，Survivin的表達與VEGF的表達呈正相關（r=0.378，P<0.05）。Survivin表達上調進而促進了腫瘤血管生成和浸潤轉移，二者在促進宮頸癌的發生發展中發揮著協同作用。

綜上所述，宮頸癌中Survivin、HPV16-E7蛋白、VEGF基因表達上調，其表達與宮頸癌發生、發展密切相關。對三者進行檢測，或許成為對宮頸癌患者的預后判定的重要指標[16]。

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