利濕口服液的抗皮炎及濕疹作用研究

朱 倩， 付文煥， 王 斌， 鐘明康

（復(fù)旦大學(xué)附屬華山醫(yī)院藥劑科， 上海 200040）

利濕口服液的抗皮炎及濕疹作用研究

朱 倩， 付文煥， 王 斌， 鐘明康

（復(fù)旦大學(xué)附屬華山醫(yī)院藥劑科， 上海 200040）

目的 考察利濕口服液 （苦參、金銀花、陳皮、茯苓皮、車前子、地膚子） 的主要藥效作用。方法 通過對豚鼠磷酸組胺致癢閾的測定、 2，4-二硝基氯苯 （DNCB） 誘發(fā)豚鼠過敏性接觸性皮炎模型及接觸性濕疹豚鼠模型的試驗(yàn)，觀察利濕口服液高、中、低劑量與中藥對照藥膚癢顆粒和西藥對照藥二鹽酸西替利嗪片的藥效。結(jié)果 利濕口服液高、 中劑量能顯著提高磷酸組胺致癢閾 （P＜0.01）， 對 DNCB誘發(fā)豚鼠過敏性接觸性皮炎有顯著的抑制作用 （P＜0.05、 P＜0.01）， 對豚鼠慢性接觸性濕疹有顯著的防治作用 （P＜0.01）， 利濕口服液高劑量減少表皮朗格漢斯細(xì)胞和炎性細(xì)胞的作用與膚癢顆粒比較有顯著差異 （P＜0.05， P＜0.01）。 結(jié)論 利濕口服液具有止癢、 防治接觸性濕疹、接觸性皮炎的作用。

利濕口服液；藥效學(xué)；濕疹；皮炎

利濕口服液 （ 批準(zhǔn)文號為 SYZ-ZF-056-2004）為我院中藥自制制劑，是我院皮膚科專家根據(jù)中醫(yī)辯證論治、臨床經(jīng)驗(yàn)用藥組方而成。本方由苦參、金銀花、陳皮、茯苓皮、車前子、地膚子六味中藥組成。具有清熱利濕、消腫止癢的功效。主治皮炎、 濕疹、 瘙癢癥等。該制劑臨床使用已超過20年，療效顯著， 副作用小。 本研究參考 《中藥新藥研究指南 （藥理學(xué)）》 中的中藥藥效學(xué)研究實(shí)驗(yàn)，根據(jù)其主治功能，對其進(jìn)行抗皮炎、濕疹及瘙癢癥的藥效學(xué)研究，為臨床用藥提供理論依據(jù)。

1 材料

1.1 藥物 利濕口服液 （3 g生藥/mL， 本院制劑室提供， 批號為 050108）； 膚癢顆粒 （6 g/袋， 四川迪康科技藥業(yè)股份有限公司成都迪康制藥公司產(chǎn)品，批號為041205）；二鹽酸西替利嗪片 ［（仙特明）， 10 mg/片， 比利時(shí)聯(lián)合化工企業(yè)集團(tuán)醫(yī)藥部（瑞士）， 批號為 03630A］。

1.2 試劑 磷酸組胺 （中國科學(xué)院上海生物化學(xué)研究所產(chǎn)品， 批號為 961114）； 2，4-二硝基氯苯（DNCB） （上海試劑一廠， 批號為 890901）；硫化鈉 （AR.海南匯縣宣治化工廠， 批號為 020322）；丙酮 （AR.上海振興化 工 一 廠 產(chǎn) 品， 批 號：0210511）； Wachstein-Meisel鎂激活酶法染色作 用液 ［三磷酸腺苷二鈉鹽 10 mg，0.2 mol/L Tris緩沖液 （ pH 7.2） 10 mL， 2% 硝 酸 鉛 1.5 mL和1.2%無水硫酸鎂2.5 mL， 加雙蒸水至 25 mL］。

1.3 動(dòng)物 白色豚鼠， 體質(zhì)量 250 ～300 g， 購于上海松江實(shí)驗(yàn)動(dòng)物場， 動(dòng)物許可證號為 SCXK（滬） 2002-0012。

2 方法

2.1 對磷酸組胺致豚鼠足瘙癢閾的影響［1-3］取白色豚鼠72 只， 分 3 批進(jìn)行， 間隔 6 d 和 9 d， 每批用鼠24只， 雌雄各半。 按體質(zhì)量隨機(jī)分為 6組：空白對照組 （生理鹽水）； 中藥陽性對照組 （膚癢顆粒， 3.5 g/kg）； 西藥陽性對照組 （二鹽酸西替利嗪片， 2 g/kg）； 利濕口服液高劑量組 （9 g生藥/kg）、 中 劑 量 組 （4.5 g生 藥/kg）、 低 劑 量 組（2.25 g生藥/kg）。 按上述各組給藥， 每日 1 次，灌胃容積均為每 100 g體質(zhì)量 1 m L， 連續(xù)給藥10 d。 于第 10 天給藥后 30 min， 在豚鼠右后肢足背擦傷處，依次按表1的劑量滴加磷酸組胺，每只0.05 mL， 直至出現(xiàn)豚鼠舔右后足時(shí)所給予的磷酸組胺總量為致癢閾，記錄此總量。

表1 磷酸組胺致癢濃度與致癢總量Tab.1 Concentration of histam ine diPhosPhat-induced tickle and the total of histam ine diPhosPhat

2.2 抗 過敏性接觸性皮炎試驗(yàn)［4-5］取 白 色 豚 鼠72 只， 在豚鼠背部脫毛區(qū)涂抹 1% 的 2，4-二硝基氯苯 （DNCB）， 每只0.2 mL， 隔日重復(fù)致敏一次。致敏第 14 天， 脫毛區(qū)仔細(xì)剃毛后，再涂以 0.1%的 DNCB 200 μL進(jìn)行激發(fā)，可見豚鼠背部涂藥部位皮膚出現(xiàn)紅腫，類似皮炎癥狀。致敏后1周，分兩批進(jìn)行實(shí)驗(yàn)，每批 36 只。 按體質(zhì)量隨機(jī)分為 6組： 空白對照組 （生理鹽水）；中藥陽性對照組（膚癢顆粒， 2.8 g/kg）； 西藥陽性對照組 （二鹽酸西替利嗪片， 1.56 g/kg）；利濕口服液高劑量組（7.2 g生藥/kg）、 中劑量組 （3.6 g生藥/kg）、 低劑量組 （1.8 g生藥/kg）。 按上述分組灌胃給藥，每日一次， 連續(xù)給藥 14 d。 灌胃容積均為每 100 g體質(zhì)量1 mL。 在末次給藥后2 h脫臼處死豚鼠， 用內(nèi)徑16 mm的打孔器取下同一部位的皮損皮膚，用游標(biāo)卡尺測量皮膚厚度，同時(shí)稱取皮片質(zhì)量。

2.3 對接觸性濕疹模型的防治作用［6-8］取白色豚鼠 72 只， 分為兩批，每批36 只。 在豚鼠背部脫毛區(qū)涂抹5%的 DNCB 25 μL致敏， 第 3 日重復(fù)致敏一次。 致敏 2 周后，在豚鼠右耳內(nèi)側(cè)涂抹 0.1%的DNCB 100 μL進(jìn)行激發(fā)， 每周 1 次， 連續(xù)激發(fā) 4周。第3次激發(fā)當(dāng)日，按體質(zhì)量隨機(jī)分為6組：空盲法對 1 個(gè)400 倍視野內(nèi)朗格漢斯細(xì)胞進(jìn)行記數(shù)。

2.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 試驗(yàn)結(jié)果皆采用 Statview軟件分析， 結(jié)果用 （） 表示， 對有關(guān)數(shù)據(jù)用方差分析、 LSD法檢驗(yàn)， 顯著性水平取0.05。

3 結(jié)果

3.1 對磷酸組胺致豚鼠足瘙癢閾的影響 與空白對照組比較，陽性對照組及利濕口服液高、中劑量組對提高磷酸組胺致癢閾的作用非常顯著 （P＜0.01）； 與劑量有一定的量效關(guān)系。膚癢顆粒的止癢效果相當(dāng)于利濕口服液的中劑量組。結(jié)果見表2。白對照組 （生理鹽水）； 中藥陽性對照組 （膚癢顆粒， 2.52 g/kg）； 西藥陽性對照組 （二鹽酸西替利嗪片， 1.4 g/kg）； 利濕口服液高劑量組 （6.6 g生藥/kg）、 中劑量組 （3.3 g生藥/kg）、 低劑量組（1.65 g生藥/kg）給藥。 連續(xù)給藥 24 d 后脫臼處死豚鼠，取下右耳，用直徑6 mm打孔器在相同部位取下1耳片，稱定質(zhì)量，用千分卡尺單盲法測定耳片厚度；每耳片測厚度后，拔盡毛發(fā)，進(jìn)行組織脫水、 包埋、 切片， 用 Wachstein-Meisel鎂激活酶法對朗格漢斯細(xì)胞染色。于顯微鏡下觀察，單盲法對 1 個(gè)400 倍視野內(nèi)朗格漢斯細(xì)胞進(jìn)行記數(shù)； 另取右耳組織1 塊 （相同部位）， 石蠟包埋， 切片， 蘇木精-伊紅染色，光鏡下逐一觀察組織學(xué)改變， 單

表2 利濕口服液對磷酸組胺致癢閾的影響 （）Tab.2 Effect of Lishi Oral Liquid on histam ine diPhos-Phate-induced threshold of tick le（）

表2 利濕口服液對磷酸組胺致癢閾的影響 （）Tab.2 Effect of Lishi Oral Liquid on histam ine diPhos-Phate-induced threshold of tick le（）

注： 與空白對照組比，*P＜0.05，**P＜0.01； 與利濕口服液高劑量組比，ΔΔP＜0.01

組 別 劑量 動(dòng)物/只 致癢閾/μg空白對照組 11 132.3 ±71.1膚癢顆粒組 3.5 g/kg 11 404.1 ±281.5**二鹽酸西替利嗪片組 2 mg/kg 11 545.9 ±283.1**利濕口服液高劑量組 9.0 g/kg 12 562.9 ±266.3**利濕口服液中劑量組 4.5 g/kg 10 403.0 ±188.6**利濕口服液低劑量組 2.25 g/kg 12 227.1 ±120.1ΔΔ

3.2 對抗過敏性接觸性皮炎模型的影響 與空白對照組比較，高、中劑量組與兩個(gè)陽性對照組皮膚厚度和皮膚質(zhì)量相差均有非常顯著差異 （P＜0.01， P＜0.05）， 對 DNCB誘發(fā)豚鼠過敏性接觸性皮炎有一定的防治作用。結(jié)果見表3。

3.3 對接觸性濕疹模型的影響 由表 4 可見， 與空白對照組比較，陽性對照組及利濕口服液各劑量組對接觸性濕疹模型的耳腫脹度和耳片質(zhì)量均有顯著性差異 （P＜0.01， P＜0.05）； 高、 中劑量組與低劑量比較有顯著差異 （P＜0.01）。 由表 5 和圖 1可見，與空白對照組比較，利濕口服液三個(gè)劑量組均能顯著減少表皮朗格漢斯細(xì)胞數(shù) （P＜0.01， P＜ 0.05）， 且對其形態(tài)亦有影響； 高劑量組減少朗格漢斯細(xì)胞數(shù)的作用顯著大于膚癢顆粒組 （P＜0.01）。

表3 利濕口服液對過敏性接觸性皮炎的影響 （）Tab.3 Effect of Lishi Oral Liquid on contact eczema in guinea Pigs（）

表3 利濕口服液對過敏性接觸性皮炎的影響 （）Tab.3 Effect of Lishi Oral Liquid on contact eczema in guinea Pigs（）

注：與空白對照組比較，*P＜0.05，**P＜0.01；與利濕口服液高劑量組比較，ΔP＜0.05，ΔΔP＜0.01

組 別 劑量 動(dòng)物數(shù)/只 皮膚厚度/mm 皮膚質(zhì)量/mg空白對照組 11 2.51 ±0.36 472.19 ±30.35膚癢顆粒組 2.8 g/kg 11 1.75 ±0.22** 375.92 ±76.86**二鹽酸西替利嗪片組 1.56 mg/kg 11 1.91 ±0.18** 387.56 ±43.29**利濕口服液高劑量組 7.2 g/kg 12 1.74 ±0.23** 383.56 ±50.98**利濕口服液中劑量組 3.6 g/kg 10 2.00 ±0.12** 433.12 ±40.45*Δ利濕口服液低劑量組 1.8 g/kg 10 2.44 ±0.29ΔΔ 453.80 ±42.50ΔΔ

表4 利濕口服液對濕疹模型耳片厚度和質(zhì)量的影響 （）Tab.4 Effect of Lishi Oral Liquid on the weight and thickness of themodel of contact eczema （）

表4 利濕口服液對濕疹模型耳片厚度和質(zhì)量的影響 （）Tab.4 Effect of Lishi Oral Liquid on the weight and thickness of themodel of contact eczema （）

注： 與空白對照組比較，*P＜0.05，**P＜0.01； 與利濕口服液高劑量組比較，ΔΔP＜0.01

組 別 劑量 動(dòng)物數(shù)/只 耳片厚度/mm 耳片質(zhì)量/mg空白對照組 12 1.55 ±0.13 50.88 ±6.40膚癢顆粒組 2.52 g/kg 11 1.13 ±0.11** 36.85 ±6.44**二鹽酸西替利嗪片組 1.4mg/kg 12 1.14 ±0.13** 37.20 ±6.69**利濕口服液高劑量組 6.6 g/kg 12 1.11 ±0.11** 36.78 ±5.07**利濕口服液中劑量組 3.3 g/kg 11 1.18 ±0.14** 39.06 ±5.59**利濕口服液低劑量組 1.65 g/kg 11 1.40 ±0.10**ΔΔ 45.40 ±4.83*ΔΔ

表5 利濕口服液對接觸性濕疹模型表皮中朗格漢斯細(xì)胞計(jì)數(shù)及形態(tài)的影響 （）Tab.5 Effect of Lishi Oral Liquid on the count and morPhology of the Langerhans cells in themodel of contact eczema （）

表5 利濕口服液對接觸性濕疹模型表皮中朗格漢斯細(xì)胞計(jì)數(shù)及形態(tài)的影響 （）Tab.5 Effect of Lishi Oral Liquid on the count and morPhology of the Langerhans cells in themodel of contact eczema （）

注： 與空白對照組比較，*P＜0.05，**P＜0.01； 與利濕口服液高劑量組比較，ΔΔP＜0.01

組 別 劑量 動(dòng)物數(shù)/只 朗格漢斯細(xì)胞計(jì)數(shù) 朗格漢斯細(xì)胞形態(tài)空白對照組 10 81.20 ±14.71 多層，有樹突分枝膚癢顆粒組 2.52 g/kg 10 64.60 ±17.02**ΔΔ二鹽酸西替利嗪片組 1.4 mg/kg 10 36.00 ±8.76** 單層，較少利濕口服液高劑量組 6.6g/kg 10 37.10 ±11.10** 單層，較少利濕口服液中劑量組 3.3 g/kg 11 62.09 ±9.48**ΔΔ利濕口服液低劑量組 1.65 g/kg 11 69.09 ±10.20*Δ

圖1 利濕口服液對接觸性濕疹模型表皮中朗格漢斯細(xì)胞的影響Fig.1 Effect of Lishi O ral Liquid on the Langerhans cells’ moPhology in themodel of contact eczema

由表6與圖2可見，與空白對照組比較，陽性對照組及利濕口服液組能顯著減少炎性細(xì)胞數(shù)量，抑制炎性反應(yīng)；且高劑量組抑制炎癥強(qiáng)度大于膚癢顆粒組 （P＜0.05）。

表6 利濕口服液對接觸性濕疹模型炎性細(xì)胞計(jì)數(shù)的影響（）Tab.6 Effect of Lishi Oral Liquid on the count of the inflamm atory cells in the model of con tact eczem a（）

表6 利濕口服液對接觸性濕疹模型炎性細(xì)胞計(jì)數(shù)的影響（）Tab.6 Effect of Lishi Oral Liquid on the count of the inflamm atory cells in the model of con tact eczem a（）

注： 與空白對照組比較，**P＜0.01； 與利濕口服液高劑量組比較，ΔΔP＜0.05

組 別 劑量 動(dòng)物數(shù)/只 炎性細(xì)胞計(jì)數(shù)空白對照組 10 358.20 ±68.82膚癢顆粒組 2.52 g/kg 10 272.00 ±48.55**Δ二鹽酸西替利嗪片組 1.4 mg/kg 10 186.50 ±68.88**利濕口服液高劑量組 6.6 g/kg 10 213.50 ±54.21**利濕口服液中劑量組 3.3 g/kg 11 235.00 ±58.14**利濕口服液低劑量組 1.65 g/kg 11 271.09 ±59.20**ΔΔ

4 討論

本實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，利濕口服液具有顯著的止癢、防治接觸性濕疹和接觸性皮炎的作用，可用于主治皮炎、濕疹、瘙癢癥等。

圖2 利濕口服液對接觸性濕疹模型炎性細(xì)胞的影響Fig.2 E ffect of LishiO ral L iquid on the inflammatory cells’ moPhology in themodelof contact eczema

本實(shí)驗(yàn)中，二鹽酸西替利嗪片和膚癢顆粒應(yīng)用于臨床治療濕疹和皮炎，療效良好，抗炎作用強(qiáng)，故分別作為西藥和中藥陽性對照藥物。各試驗(yàn)中，以利濕口服液、膚癢顆粒和二鹽酸西替利嗪片三藥的臨床一日使用總量，按體表面積折算人和動(dòng)物的等效劑量。藥效實(shí)驗(yàn)時(shí)，利濕口服液高劑量組、膚癢顆粒組和二鹽酸西替利嗪片組均使用 2.5 倍的等效劑量。利濕口服液中、低劑量組均取前一劑量的1/2。 試驗(yàn)給藥期間皆記錄受試動(dòng)物體質(zhì)量， 且隨體質(zhì)量變化增加給藥劑量。

本制劑處方中，苦參、金銀 花為 君藥［9］。 其中，苦參具有清熱燥濕的功效，其有效成分苦參堿和氧化苦參堿具有抗炎作用，可降低過敏介質(zhì)的釋放， 具免疫 抑 制 作 用［10-11］。 金 銀 花 具 有 解 毒、 抗炎的作用，其主要成分綠原酸具有調(diào)節(jié)機(jī)體免疫功能、 促進(jìn)白 細(xì) 胞 吞噬 功 能［12-13］。 陳 皮具 有 燥 濕 化痰的功效，主要成分橙皮苷具有抗炎止痛的功能［14-15］。 本制劑組方簡單， 工藝方便， 療效確切，具有良好的開發(fā)和應(yīng)用前景，有望由醫(yī)院制劑申請為中藥新藥。

［1］ 衛(wèi)生部藥政管理局.中藥新藥研究指南 （藥學(xué)·藥理學(xué)·毒理學(xué)） ［S］.1994： 179.

［2］ 王彥禮，包旭宏，王怡薇，等.青鵬膏劑對豚鼠瘙癢及濕疹模型的影響［J］.中國實(shí)驗(yàn)方劑學(xué)雜志， 2011， 17（14）：233-236.

［3］ 張干元，郭可錦，黎勁梅，等.白英消疹止癢凝膠的藥理作用研究［ J］ .中藥材， 2007， 30（2） ： 211-213.

［4］ 李 霞， 李玲茭， 劉元書， 等.濕疹特靈軟膏主要藥效學(xué)研究［J］.兒科藥學(xué)雜志， 2003， 9（5）： 1.

［5］ 杜鐵良，趙自明， 陳玉興， 等.荊防止癢顆粒對豚鼠亞急性接 觸 性 濕 疹 的 影 響 ［ J］.中 成 藥， 2011， 33 （4）：685-687.

［6］ 張汝芝，金慧玲， 余其斌， 等.普魯卡因?qū)﹄嗍蠼佑|性濕疹模 型 的 影 響 ［ J］. 蚌 埠 醫(yī) 學(xué) 院 學(xué) 報(bào)， 2000， 25（4）： 240.

［7］ 郭在培，岡本佑之，今村貞夫.人及豚鼠和小鼠表皮郎格罕細(xì)胞組織化學(xué)染色理想條件的探討［J］.中華皮膚科雜志， 1993， 26 （3）： 176-177.

［8］ 張三泉，鐘道清， 張錫寶.樹突狀細(xì)胞亞群在特應(yīng)性皮炎發(fā)病機(jī)制中的作用研究進(jìn)展［J］.臨床皮膚科雜志， 2007，36（5）： 336-338.

［ 9 ］ 林偉萍， 韓寶康.利濕合劑治療濕疹的臨床觀察 ［J］.江西中醫(yī)藥， 2008， 31（4）： 62.

［10］ 劉 梅， 劉雪英， 程劍鋒.苦參堿的藥理研究進(jìn)展 ［J］.中國中藥雜志， 2003， 28（9）： 801-803.

［11］ 黃秀梅， 李 波.氧化苦參堿對 TNF-α、 IL-6 和 IL-8 的影響 ［ J］ .中成藥， 2003， 25（11） ： 903-906.

［12］ 趙菊紅.金銀花的藥理學(xué)研究和臨床應(yīng)用 ［ J］.中國醫(yī)藥指南， 2010， 32（8）： 195-196.

［13］ 趙國玲， 劉佳佳， 林 丹， 等.金銀花化學(xué)成分及藥理研究進(jìn)展 ［ J］ .中成藥， 2002， 24（12） ： 973-976.

［14］ 曹銘希.陳皮中橙皮苷的提取及其藥理活性的研究進(jìn)展［J］.中國醫(yī)藥指南， 2012， 10（12）： 452-454.

［15］ 李慶耀， 梁生林.陳 皮的 藥用研 究進(jìn) 展 ［ J］.中成 藥，2008， 30（2）： 246-248.

Inhibition of Lishi Oral Liquid on dermatitis and eczem a

ZHU Qian， FUWen-huan， WANG Bin， ZHONGMing-kang
（Dept.of Pharmacy， Huashan Hospital of Fudan University， Shanghai 200040， China）

LishiOral Liquid； pharmacological； eczema；dermatitis

R285.5

： A

： 1001-1528（2014）01-0040-04

10.3969/j.issn.1001-1528.2014.01.010

2013-03-19

上海市衛(wèi)生局中醫(yī)藥科研基金 （2001XY024）

朱 倩 （1983—）， 女， 碩士生， 主要從事臨床藥學(xué)及藥物質(zhì)量控制研究。 Tel： 13701664974， E-mail： zhuqianhuashan@163.com