補骨脂、肉豆蔻炮制前后在 “二神丸” 中對脾腎陽虛泄瀉小鼠的止瀉研究

潘 新， 胡昌江， 耿媛媛， 趙 玲， 吳珊珊

（成都中醫藥大學藥學院，四川 成都 611137）

補骨脂、肉豆蔻炮制前后在 “二神丸” 中對脾腎陽虛泄瀉小鼠的止瀉研究

潘 新， 胡昌江*， 耿媛媛， 趙 玲， 吳珊珊

（成都中醫藥大學藥學院，四川 成都 611137）

目的 探討補骨脂、 肉豆蔻生品與炮制品分別配方組成的古方 “二神丸” 對 “脾腎陽虛泄瀉” 小鼠止瀉作用的差異， 以闡明炮制對方劑療效影響。 方法 設立空白組、 陽性藥物組、 “二神丸” Ⅰ （補骨脂生品 +肉豆蔻生品）、“二神丸” Ⅱ （補骨脂生品 +肉豆蔻煨制品）、 “二神丸” Ⅲ （補骨脂鹽炙品 +肉豆蔻生品）、 “二神丸” Ⅳ （補骨脂鹽炙品 +肉豆蔻煨制品） 共6組， 觀察對番瀉葉所致小鼠急性腹瀉以及氫化可的松和大黃造成的 “脾腎陽虛泄瀉”模型小鼠泄瀉的影響。 結果 “二神丸” Ⅲ、 Ⅳ組的小腸推進率與空白組相比有顯著性差異 （P＜0.05）； “二神丸”Ⅳ組的首次泄瀉時間、 稀便率、 稀便級和腹瀉指數與空白組比較， 均有極顯著性差異 （P＜0.01）。 結論 “二神丸”Ⅳ組的止瀉作用優于其他組合，即鹽炙補骨脂和煨炙肉豆蔻組方的 “二神丸” 止瀉作用增強。

“二神丸”； 脾腎陽虛泄瀉； 炮制品； 止瀉作用

辨證施治、復方入藥、飲片炮制是中醫用藥的三大特色。本實驗將補骨脂、肉豆蔻炮制前后分別組成的復方“二神丸” 進行研究， 充分體現復方入藥、飲片炮制的中醫用藥特色，緊密結合中醫臨床用藥的實際，突出其研究實用性。

“二神丸” 出自宋·許叔微的《普濟本事方》， 以補骨脂和肉豆蔻組成，具有溫腎暖脾，澀腸止瀉之功效，是臨床治療五更泄瀉的基礎方，而脾腎陽虛是引起五更泄瀉的主要病機［1］。 補骨脂具有溫腎助陽、 固精縮尿、 溫脾止瀉的作用［2］， 在 “二神丸” 中補骨脂需鹽炙， 以增強溫腎暖脾止瀉作用［3］（在前期研究中已證明這一點）； 肉豆蔻溫中行氣， 澀腸止瀉之效［4］， 原方中肉豆蔻用生品， 但現代有研究表明單味生肉豆蔻有滑腸之弊，通過煨制后，可免于滑腸， 并增強固腸止瀉作用［5-6］， 也有研究認為， 肉豆蔻生品即有顯著的止瀉作用而炮制不能增強肉豆蔻止瀉作用，故不用炮制［7］。 《中囯藥典》 2010 年版一部 “四神丸” 中肉豆蔻用煨制品 （ “四神丸” 是 “二神丸” 基礎上加吳茱萸、 五味子而成， 主治范圍十分接近）。 在古方應用上使用炮制品有所區別，復方 “二神丸” 中肉豆蔻是否需要煨制，亦缺乏炮制機理闡述。因此，通過本實驗的研究，將解決補骨脂、 肉豆蔻在 “二神丸” 中炮制入藥理由， 為指導臨床合理用藥，提高方劑療效具有重要的實際意義。

1 實驗材料

1.1 藥物 補骨脂生品， 購于成都市藥材市場， 經成都中醫藥大學藥學院生藥教研室盧先明教授鑒定，為豆科植物補骨脂 Psoralea coryli folia L.的干燥成熟果實。

補骨脂鹽炙品：取補骨脂藥材，加入藥材量一半的2%食鹽水， 室溫悶潤 24 h， 于 150 ℃炒制 10min 后置托盤中于30℃鼓風烘箱中烘干。

肉豆蔻生品：購于成都市藥材市場，經成都中醫藥大學藥學院生藥教研室盧先明教授鑒定為肉豆蔻科植物肉豆蔻 Myristica fragrans Houtt.的干燥種仁。

肉豆蔻煨炙品： 取肉豆蔻生品與麥麩 （100 g∶40 g）同置鍋內， 文火加熱， 溫度控制在 130 ～150 ℃， 翻炒20 min， 至麥麩呈焦黃色， 肉豆蔻呈棕褐色 （據文獻報道，肉豆蔻麩炒止瀉效果優于面裹煨、紙裹煨、滑石粉煨，故直接用麩煨制［5］）。

“二神丸” Ⅰ： 補骨脂生品 +肉豆蔻生品 （20 g∶10 g）。

“二神丸” Ⅱ： 補骨脂鹽炙品 +肉豆蔻生品 （20 g∶10 g）。

“二神丸” Ⅲ： 補骨脂生品 +肉豆蔻煨炙品 （20 g∶10 g）。

“二神丸” Ⅳ： 補骨脂鹽炙品+肉豆蔻煨炙品 （20 g∶10 g）。

將四種組合的 “二神丸” 先用 75%乙醇回流提取， 藥渣再加水煎煮， 合并藥液， 濃縮， 配制成 0.5 g/mL藥液備用。

易蒙停藥液 （西安楊森制藥有限公司，產品批號110901627）： 從膠囊中取出一定量藥粉， 加蒸餾水配制成0.04mg/mL的藥液。

參苓白術丸 （山東方健制藥有限公司，產品批號20120515） 混懸液： 取一定量藥丸， 加蒸餾水均勻混合配制成 0.5 g/mL的混懸液。

番瀉葉水煎液 （藥材購于成都市藥材市場）： 加水煮沸約 10 min 后用二層紗布過濾， 濾液減壓濃縮成 0.3 g/mL的藥液。

大黃混懸液 （藥材購于成都市藥材市場）： 取一定量細粉制成 0.25 g/mL混懸藥液。

氫化可的松注射液 （天津藥業集團新鄭股份有限公司， 產品批號 1103052）， NaCl注射液 （四川科倫藥業股份有限公司， 產品批號 M12011117）。

1.2 儀器 小鼠灌胃器、 1 mL一次性無菌注射器、 自制小鼠代謝籠 （實用新型專利， 專利號： CN201146735）、 濾紙、 計時手表， 電子天平 （ 德國 Sartorius公司） 。

1.3 動物 昆明種健康小鼠 （普通級）， 體質量 18 ～22 g，雄性， 成都達碩生物科技有限公司提供， 合格證號 SCXK（川） 2013-24。

1.4 試驗場所 成都中醫藥大學中藥炮制實驗室 （國家中醫藥管理局三級實驗室）； 成都中醫藥大學藥學院中藥藥理實驗動物觀察室， 許可證號： 川實動管使第15號。

2 方法

2.1 造模及給藥 在中醫藥現代研究中， 建立合適的動物模型非常重要，經過多年的研究探索，已經出現了較多的脾陽虛和腎陽虛的造模方法，但是對脾陽虛與腎陽虛同時發病，即脾腎陽虛證的造模方法報道較少。本實驗在課題組前期對腎陽虛和脾陽 虛小鼠 模型研究基 礎 上［8-10］， 并參照 《醫藥實驗動物模型——制作與應用》、 《中藥藥理研究方法學 （ 第二版） 》 等 藥理學研究 工具書［11-13］， 確定了造模方法，即氫化可的松及大黃復合造模致小鼠 “脾腎陽虛泄瀉”模型。

取健康雄性小鼠20只， 隨機分為2組， 空白組與模型組， 每組各10只。 適應性飼養3 d后， 均無異常表現即納入實驗，用苦味酸標記，稱定質量。空白組每天注射等體積的 NaCl注射液， 模型組動物每天按 0.1 m L/10 g體質量臀部皮下注射氫化可的松注射液， 連續7 d， 從第 8天開始， 模型組停止注射氫化可的松， 用大黃灌胃至第 14天。記錄動物從第1天至第15天的體質量、 飲食飲水量， 外觀和行為狀況。

2.1.1 一般外觀行為狀況 造模組動物出現活動減少、 反應遲鈍、弓背蜷縮、 體毛枯疏等情況，在造模2～3天后相繼出現軟稀便， 第4～6天出現溏泄， 且部分小白鼠有不同程度的脫肛、腹部腫脹的情況。空白組動物則無異常表現。

2.1.2 體質量及飲食飲水變化狀況 觀察第 1 ～15 天空白組與模型組小鼠的平均體質量變化與平均每只小鼠每日的攝食及攝水的情況， 結果見表1 ～2。

由表1 ～2 可觀察到在第1 ～15 天， 空白組小鼠的體質量每日都有所增長且增長幅度較大，而模型組小鼠在第1～7天時有略微增重，從第8天開始體質量急劇下降；空白組小鼠的飲食量也是每日有所增加，模型組在造模的1～6 d 飲食量基本保持在平穩狀態， 7 ～10 d飲食量有所減少，第10天后基本保持穩定； 空白組和模型組的飲水量變化趨勢基本相同，但模型組的飲水量始終低于空白組。

表1 氫化可的松及大黃致 “脾腎陽虛泄瀉” 小鼠體質量變化情況

表2 氫化可的松及大黃致 “脾腎陽虛泄瀉” 小鼠飲食飲水量變化情況

2.1.3 小結 本實驗中， 模型組小鼠通過注射氫化可的松和大黃灌胃后相繼出現的溏泄脫肛，腹部腫脹，體質量減輕等癥狀與中醫理論中的 “ 脾腎陽虛泄瀉” 相符［14-15］， 因此認為此種方法得到的 “脾腎陽虛泄瀉” 模型造模成功。

2.2 “二神丸” 對脾腎陽虛泄瀉小鼠腸推進率的影響取小鼠 60 只， 按體質量隨機分為 6 組， 每組 10 只。 除正常組外， 其他各組按 “2.1” 項下方法造模， 造模 14 d 后，按以下方式給藥： 陽性組按 0.2 mL/10 g體質量灌以參苓白術丸混懸液， 給藥組分別按 0.2mL/10 g體質量灌以 4 種組合的 “二神丸” 藥液，空白組灌以同等體積的水， 連續6 d， 第 6 天給藥后禁食不禁水 12 h， 第 7 天以一定量活性炭混勻于藥物中給各組小鼠灌胃， 20 min 后斷頸處死， 剖腹取出從幽門回部至回盲部的全部小腸，剪去腸系膜，將小腸輕輕拉直，平鋪于白紙上，測量并記錄墨汁推進長度，計算墨汁推進百分率。結果見表3。

表3 四種組合 “二神丸” 對 “脾腎陽虛” 模型小鼠小腸推進影響

由表3可見， “二神丸” Ⅲ、 Ⅳ組以及陽性組的小腸推進率與空白組相比有顯著性差異 （P＜0.05）， 說明 “二神丸” Ⅲ、 Ⅳ組對 “脾腎陽虛泄瀉” 小鼠的腹瀉有明顯的改善作用。

2.3 “二神丸” 對番瀉葉所致小鼠急性腹瀉的止瀉作用

取小鼠 60 只， 按體質量隨機分為 6 組， 每組 10 只， 實驗前禁食不禁水 12 h。 空白組灌蒸餾水； 陽性組按 0.2 mL/10 g體質量灌易蒙停藥液； 給藥組分別按 0.2 mL/10 g體質量灌以四種組合的 “二神丸” 藥液； 灌胃后 30 min 各組均灌番瀉葉 0.2 m L/10 g， 隨后將小鼠置墊濾紙的自制小鼠代謝籠中， 觀察小鼠稀便點數， 連續觀察5 h， 各組數據采用 t檢驗進行統計分析。 結果見表 4。

表4 四種組合 “二神丸” 對番瀉葉所致小鼠腹瀉的影響

觀察指標［16］： ①稀便率： 每只動物所排稀便數與總便數之比。②稀便級：表示稀便的程度。以稀便污染濾紙形成污跡面積的大小定級。 分為四級， 標準： 級數 （污染直徑 cm）： 1 （ ＜1）； 2 （1 ～1.9）； 3 （2 ～3）； 4 （ ＞3）。 統計時先逐個統計每一堆稀便的級數，然后將該鼠所有稀便級數相加除以稀便次數得稀便的平均級數。③腹瀉指數：稀便率與稀便級的乘積。

2.4 結果 由表 4 可見， “二神丸” Ⅳ組的首次泄瀉時間、稀便率、稀便級和腹瀉指數與空白組比較，均有極顯著性差異 （P＜0.01）， 說明 “二神丸” Ⅳ組可明顯延長番瀉葉所致急性腹瀉小鼠的首次泄瀉時間，降低稀便率、稀便級和腹瀉指數。

3 討論

“二神丸” 乃治療脾腎虛寒， 五更泄瀉的傳統古方， 文獻資料多為對該方組成藥物補骨脂、肉豆蔻的單味藥物研究，鮮見復方的研究，且少數對復方的研究忽略了其組方中藥物炮制品的臨床藥效，因此本實驗將補骨脂生品、補骨脂鹽炙品、肉豆蔻生品、肉豆蔻煨炙品兩兩組合配方，得到四種組合的 “二神丸”， 以 “脾腎陽虛泄瀉” 和急性腹瀉的動物模型為研究對象，考察小鼠小腸推進率、首次泄瀉時間、稀便級、稀便率以及腹瀉指數為指標，確定止瀉效果最佳的一種 “二神丸” 組合。

通過實驗得到的結果顯示， “二神丸” Ⅲ、 Ⅳ組對“脾腎陽虛泄瀉” 小鼠有明顯的止瀉作用， 且 “二神丸”Ⅳ組可明顯延長番瀉葉所致急性腹瀉小鼠的首次泄瀉時間，降低稀便率、稀便級和腹瀉指數。 綜合考慮，確定了 “二神丸”Ⅳ組的止瀉作用優于其他組合，提示了 “二神丸”中藥物補骨脂和肉豆蔻分別經過鹽炙和煨炙后止瀉作用有所增強，關于該復方中藥物炮制增效的機理還有待下一步研究。

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R285.5

： B

： 1001-1528（2014）05-1059-04

10.3969/j.issn.1001-1528.2014.05.040

2013-04-15

國家自然科學基金面上項目 （81274085）

潘 新 （1988—） ， 女， 博士生， 主要從事中藥學研究。 Tel： 18607196428， E-mail： px520520@126.com

*通信作者： 胡昌江 （1952—） ， 男， 教授， 博士 生導 師， 主要 從事 中藥炮 制學 的教學 和科 研。 Tel： 13980980796 ， E-mail： hhccjj@ hotmail.com