頸痛舒貼片對大鼠神經根性疼痛的影響

師 彬， 王 平， 司淑媛

（1.中國中醫科學院望京醫院， 北京 100102； 2.山東省醫學科學院附屬醫院， 山東 濟南 250003；3.山東省中醫藥研究院， 山東 濟南 250014； 4.濟南市槐蔭人民醫院， 山東 濟南 250014）

頸痛舒貼片對大鼠神經根性疼痛的影響

師 彬1，2， 王 平3， 司淑媛4

（1.中國中醫科學院望京醫院， 北京 100102； 2.山東省醫學科學院附屬醫院， 山東 濟南 250003；3.山東省中醫藥研究院， 山東 濟南 250014； 4.濟南市槐蔭人民醫院， 山東 濟南 250014）

目的 研究頸痛舒貼片對大鼠神經根性頸椎病疼痛反應的影響。方法 制作動靜力結合頸椎病大鼠模型，術后給頸痛舒貼片，觀察大鼠自主活動狀況和壓足痛閾值，測定血清谷氨酸，以及頸神經根病理組織學觀察。結果 頸痛舒貼片明顯促進模型大鼠行為學改變的恢復，提高模型大鼠壓足痛閾值，降低血清谷氨酸水平，改善神經根病變程度。結論 頸痛舒貼片能夠有效治療大鼠神經根性疼痛。

頸痛舒貼片；神經根型頸椎病；疼痛

隨著生活節奏的加快和人口老齡化的到來，頸椎病已成為一種常見病，其中神經根型屬于最常見、 危害性最大的一種［1］。 神經根型頸椎病 （ Cervical spondylotic ridiculopathy） 是頸椎間盤退行性病變，為繼發性椎間關節退行性病變所致頸脊神經根受累而發生的一種臨床綜合癥候群，受神經根支配區域會出現刀割樣疼痛或過電樣竄麻［2］， 患者疼痛難忍，嚴重影響了生活質量。

中藥外敷是一種由外向內標本兼治的治療方法， 具有幾千年的悠久歷史［3］， 遵從 “內病外治”的原則［4］。 頸 痛 舒 貼 片 （ 淫 羊 藿、 黃 芪、 赤 芍、紅花、當歸等）是在臨床驗方的基礎上，采用國內領先的透皮吸收技術制成的治療神經根型頸椎病的有效制劑。本實驗采用大鼠神經根型頸椎病動物模型，研究頸痛舒貼片對大鼠神經根性疼痛的影響，為開發新型創新藥物奠定基礎。

1 材料

1.1 材料

1.1.1 受試藥物 頸痛舒貼片由山東省中醫藥研究院制劑室提供， 批號 20120427， 每日一貼。 頸痛舒貼片由淫羊藿、黃芪、赤芍、紅花、當歸等組成。制備方法：①水提部分：淫羊藿、赤芍、黃芪等加 12 倍量水， 回流提取 2 次， 每次 1.5 h， 濾過，合并濾液并濃縮，并與提油后水煎濃縮液合并后醇沉； 三七粉碎過 10 目篩，以 10 倍量 70%乙醇提取 3 次， 每次 1.5 h。 合并濾液， 回收乙醇，濃縮成稠膏。②提取揮發油部分：乳香、當歸等加4倍量水，提取揮發油。揮發油及提油后的水液另器保存，藥渣水煎2次，濾過，合并濾液成濃縮液，并與水提部分藥材水煎濃縮液合并后醇沉成稠膏。③龍血竭、冰片分別研細后與混合稠膏混勻。將稠膏加入甘油、 氮酮、 THY-01 丙烯酸酯乳液固定在壓敏膠上，制備成頸痛舒貼片。

1.1.2 對照藥物 萬通筋骨貼由通化萬通藥業股份有限公司出品， 批號 111021， 每日 1 貼。

1.1.3 受試藥物與劑量設置 70 kg人日用藥量為一貼 （大小為 35 cm2）， 按體表面積折算， 確定大鼠 高、 中、 低 劑 量 分 別 為 12.6、 6.30、3.15 cm2/kg， 每日一貼， 相當于70 kg人日給藥量的 4、 2、 1 倍， 每天給藥一次， 連續 15 d。

1.1.4 受試動物 Wistar大鼠，雌雄各半， 體質量180 ～220 g， 購自山東省實驗動物中心， 實驗動物生產許可證號： SCXK （魯） 2009-0001。 置于不銹鋼鼠籠內飼養， 自由攝食飲水， 室溫控制在23～25℃， 通風良好。

1.1.5 儀器與試劑 SANCO 318MC型酶標儀，上海三科儀器有限公司生產； YLS-3E電子壓痛儀， 由山東省醫學科學院設備站生產； UV-265FW 紫外-可見光光度計由 Corporation Kyoto Japan 提供。 谷氨酸檢測試劑盒，南京建成生物工程研究所生產。

2 神經根型頸椎病動物模型的制備［5-6］

取 Wistar品系大鼠， 雌雄各半， 分為動靜力結合頸椎病動物模型組和假手術組，大鼠背部脫毛后備用。首先將模型組大鼠用戊巴比妥鈉麻醉，用眼科剪刀和小鑷子逐層分離棘突兩側的肌肉，暴露棘突，用手術鉗分離六，七兩側橫突以上椎板，暴露脊髓，暴露神經，逐步分離出頸七神經根，將浸漬過福爾馬林的定量濾紙片貼到頸七神經根下。逐層縫合，消毒手術周圍的皮膚。假手術組按上述方法進行，暴露出右側頸七神經根后不貼濾紙片。

將造模后的大鼠分為模型組、頸痛舒貼片組和對照藥物組。 將大鼠背部剃毛， 面積約為4 cm× 4 cm， 每天各組大鼠貼敷不同受試物， 按下列方法給藥：①假手術組，假手術組大鼠給予空白膏藥劑， 共15 d。 ②模型組， 模型大鼠給予空白膏藥劑， 共15 d。③頸痛舒貼片組， 動靜力結合頸椎病模型大鼠分別給予頸痛舒貼片，按照高、中、低劑量給于 12.60、 6.30、 3.15 cm2/kg的標準貼敷藥膏， 每天給藥 1 次， 連續 15 d。 ④對照藥物組 （萬通筋骨貼組），動靜力結合頸椎病模型大鼠給予萬通筋骨貼，按照6.30 cm2/kg的標準貼敷藥膏， 每天給藥一次， 連續15 d。給藥后檢測大鼠的行為學改變和壓足痛閾值［7］改變情況。 測定完畢后， 處死大鼠，取血清，測定谷氨酸。

3 試驗結果

3.1 行為學變化［6]模型組動物于手術后次日均表現為右上肢緊貼胸前，不敢觸地，腳趾緊縮，肘、腕關節不能活動。給藥7 d后，頸痛舒貼各劑量組大鼠均可肘關節可觸地爬行，模型組及萬通筋骨貼組大鼠仍然表現為上肢緊貼胸前，不敢觸地。治療 10 d后，頸痛舒貼高劑量組8只大鼠可用腕關節觸地爬行，中劑量組6只大鼠可用腕關節觸地爬行，低劑量組5只大鼠可用腕關節觸地爬行；萬通筋骨貼組3只可用肘關節觸地爬行，模型組1只動物可用肘關節觸地爬行。 治療 15 d后，頸痛舒貼各劑量組大鼠均可用腕關節觸地爬行，萬通筋骨貼組6只動物可用腕關節觸地，模型組3只大鼠肘關節可觸地爬行，顯示頸痛舒貼可以有效改善模型動物行為學方面的變化。

3.2 痛閾值變化 給藥 15 d 時用壓尾儀壓迫大鼠右前掌中央部位，以大鼠掙扎、嘶叫時的壓力作為該大鼠的痛閾值。 實驗結果見表1。

表1 頸痛舒貼片對頸椎病動物模型的治療作用 （，n=10）Tab.1 Treatment of Jingtongshu Patch on rats model of cervical spondylosis（， n=10）

表1 頸痛舒貼片對頸椎病動物模型的治療作用 （，n=10）Tab.1 Treatment of Jingtongshu Patch on rats model of cervical spondylosis（， n=10）

注： 與模型對照組比較，###P＜0.001

組別 劑量/（ cm2·kg-1）痛閾值/g提高率/%模型組 — 3.0 ±0.7—假手術組 — 8.2 ±1.0 173.3頸痛舒貼高劑量組 12.60 5.6 ±0.9### 86.7頸痛舒貼中劑量組 6.30 5.2 ±1.3### 73.3頸痛舒貼低劑量組 3.15 5.3 ±0.9### 76.7萬通筋骨貼組 6.30 5.0 ±0.9###66.7

表 1 可見， 痛閾值呈模型組-萬通筋骨貼組-頸痛舒貼組-假手術組依次遞增趨勢。 統計學處理表明，與模型對照組相比，頸痛舒貼各劑量組痛閾值有極其顯著性差異 （P＜0.001）， 提高率優于萬通筋骨貼組。

3.3 與神經傳導密切相關的血清谷氨酸水平［8]大鼠 取 血 后，用 3 000 r/min 離 心 機 低 溫 離 心10 min， 分離血清， 采用南京建成生物工程研究所提供測試盒測定谷氨酸水平［9］。 取上清加入測定管，同時設空白管和標準管 （加入谷氨酸標準液），上述各管依次加入試劑盒中的試劑二、試劑三、 試劑四和雙蒸水混勻， 340 nm處測定各管的OD值， 得到A1值。 各管加入試劑盒中試劑五， 混勻， 37 ℃水浴 40 min 后， 于 340 nm處測定各管OD值，得到 A2值。 將 OD值與對照品的標準曲線比對，得到樣品谷氨酸水平。對實驗數據進行組間t檢驗， 結果見表2。

表2 頸痛舒貼片對頸椎病動物模型谷氨酸水平的影響（， n=10）Tab.2 Effect of Jingtongshu Patch on glutam ic acid to animalmodels（， n=10）

表2 頸痛舒貼片對頸椎病動物模型谷氨酸水平的影響（， n=10）Tab.2 Effect of Jingtongshu Patch on glutam ic acid to animalmodels（， n=10）

注： 與模型對照組比較，#P＜0.05

組別 劑量 /（ cm2·kg-1） 谷氨酸 /（ μmol·g-1）模型對照組 —795.1 ±69.9假手術組 — 668.8 ±41.8頸痛舒貼高劑量組 12.60 716.4 ±56.0#頸痛舒貼中劑量組 6.30 731.7 ±37.8#頸痛舒貼低劑量組 3.15 769.2 ±56.8萬通筋骨貼組6.30 741.2 ±55.7

表2 可見， 谷氨酸水平呈假手術組-頸痛舒貼高劑量組-頸痛舒貼中劑量組-萬通筋骨貼組-頸痛舒貼低劑量組-模型對照組依次遞增趨勢。 統計學處理表明，與模型對照組相比，頸痛舒貼高劑量和中劑量組痛閾值有顯著性差異 （P＜0.05）。

3.4 神經組織病理切片觀察結果 光學顯微鏡下觀察正常對照組大鼠的頸神經切片，可見頸神經神經纖維細胞排列整齊、規則，神經細胞無變性、壞死情況。模型對照組大鼠的頸神經纖維結構松散，排列紊亂，部分神經細胞變性壞死、溶解、消失，有炎癥細胞浸潤，顯示出明顯的炎癥反應；頸痛舒貼片組大鼠的病理切片與模型對照組相比，病變程度較輕，個別大鼠頸神經有輕度充血、水腫、輕度炎癥細胞浸潤。萬通筋骨貼組頸神經血管擴張減輕，有輕度充血、炎癥細胞浸潤。光學顯微鏡下觀察模型的主要病理特征是頸神經根的炎癥反應。由于各組病變程度不同，采用半定量的方法，對炎細胞浸潤程度進行分級。分級標準為：0級，炎細胞偶見或無；Ⅰ級，炎細胞散在；Ⅱ級，炎細胞浸潤呈灶簇狀。對炎癥細胞浸潤情況進行統計，結果見表 3、 圖1。

表3 頸痛舒貼片對頸椎病動物模型的組織學影響 （，n=10）Tab.3 Effect of Jingtongshu Patch on histology to anim al models of cervical spondylosis（， n=10）

表3 頸痛舒貼片對頸椎病動物模型的組織學影響 （，n=10）Tab.3 Effect of Jingtongshu Patch on histology to anim al models of cervical spondylosis（， n=10）

注： 與模型對照組比較，#P＜0.05，##P＜0.01

組別 動物數/只 劑量/（ cm2·kg-1）炎癥細胞浸潤程度0級 Ⅰ級 Ⅱ級模型對照組 10 —0 1 9假手術組 10 — 8 2 0頸痛舒貼高劑量組 10 12.60 4 6 0##頸痛舒貼中劑量組 10 6.30 2 6 2#頸痛舒貼低劑量組 10 3.15 1 6 3#萬通筋骨貼組 10 6.30 1 5 4#

圖1 頸痛舒貼片組織學病理照片Fig.1 H istological pathology images of Jingtongshu Patch

4 討論

祖國醫學認為神經根型頸椎病屬 “痹癥” 范疇， 《素問·痹論》中指出 “風、 寒、 濕三氣雜至合而為痹”，多因肝腎虧虛， 氣血不足，風寒濕邪乘虛客于血脈，以致氣血閉阻，氣機不暢，不通則痛， 筋失所養， 而成此癥［10］。 素體虛弱、 肝腎虧虛、精虧不能濡養筋骨是引起神經根型頸椎病的主要原因，臨床上多見 “肝腎虧虛、氣血不足型”神經根型頸椎病患者［11］。 西醫認為， 神經根型頸椎病主要是由頸椎骨質增生、頸椎間盤退行性病變、椎間隙變窄、特別是患椎鉤突關節處骨贅深入椎間孔，壓迫或刺激脊神經根，出現嚴重的疼痛現象［12］。 治療藥物分為西藥和中藥。 西藥尚無專屬藥物，多采用止痛劑、非甾體類消炎藥、甾體類消炎藥等藥物。但由于副作用較多，胃腸道副反應明顯，限制了藥物的長期應用。尋找成本低，毒副作用小的治療神經根型頸椎病的藥物，是一個迫切需要解決的課題。

中醫根據神經根型頸椎病的發病機理，采用辨證施治法治療此病取得了顯著的療效，使中醫藥在治療此病方面逐漸發揮出明顯優勢，特別是中藥的經皮吸收制劑獲得廣泛應用。經皮給藥系統（Transdermal drug delivery system，TDDS） 系指經皮膚敷貼方式給藥，藥物透過皮膚吸收進入血液循環并達到有效血藥濃度，從而實現治療疾病的目的［13］。 它可以避免肝臟的首過效應； 穩定持久的維持血藥濃度，減少對胃腸道給藥刺激作用；用藥方便，適用于溶解度小，難以被機體吸收的藥物。頸痛舒貼片是課題組優選處方、精心研制的一種新型的巴布膏劑，具有制劑穩定，載藥量大，對皮膚無致敏性優點［14］。 臨床上具有補肝腎、 活血通絡止痛的功效，用于治療神經根型頸椎病引起的頸項僵硬、肩酸背痛、手足麻木等癥狀，效果顯著。處方中君藥淫羊藿補腎陽，強筋骨，祛風濕；臣藥赤芍清熱涼血，散瘀止痛；其他藥物中黃芪補氣固表，桂枝溫經通脈，紅花可通行血脈。諸藥配伍，使得肝腎得以滋補，筋骨得以強健，寒濕得以清除，氣機調達，諸癥皆除，臨床治療 “肝腎虧虛型”神經根頸椎病具有很好的療效。

以上實驗結果表明，頸痛舒貼片可以明顯提高神經根頸椎病大鼠模型的壓足痛閾值。神經根頸椎病發生后，谷氨酸水平增高，引起谷氨酸受體活性發生異常，進而導致神經細胞的損傷，頸痛舒貼能夠降神經根型頸椎病動物模型谷氨酸水平，從而保護頸神經功能，減輕疼痛發生。改善神經根病變程度，有效改善模型動物行為學方面的變化，具有消除炎癥、消腫止痛，促進頸神經功能恢復的作用［15］， 符合中醫理論對于 “ 肝腎虧虛型” 頸椎病的辨證分 析［16-17］， 為 進一 步 開 發治 療 神 經根 型 頸椎病的中藥新藥奠定基礎。

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Effect of Jingtongshu Patch on rat’s radiculopathy pain

SHIBin1，2， WANG Ping3， SIShu-yuan4
（1.Wangjing Hospital of China Academy of ChineseMedicine Sciences， Beijing 100102， Chiana； 2.Hospital Affiliated to Shandong Academy of Medical Sciences， Jinan 250003， China； 3.Shandong Academy of Chinese Medicine， Jinan 250014， China； 4.The People’ s Hospital of Huaiyin， Jinan 250014， China）

AIM To study effects of Jingtongshu Patch on cervical spondylotic ridiculopathy pain response in rats.M ETHODS The static-dynamic couplingmodel of rats with cervical spondylosis was established.Jingtongshu Patch was given to rats， their pathological and histological observation of cervical nerve rootwere performed. Rats autonomic activity status and the therapeutic effecton nerve root inflammation were recorded， and the change of glutamic acid was recorded， because itwas relevant to nerve conduction.RESULTS Jingtongshu Patch significantly enhanced the rat’ s behavior recovery， improved the models’ foot pain threshold， reduced serum glutamic acid content， and improved the degree of nerve root lesions.CONCLUSION Jingtongshu Patch can treat the nerve root pain in rats.

Jingtongshu Patch； cervical spondylotic ridiculopthy； pain

R285.5

： A

： 1001-1528（2014）05-0913-04

10.3969/j.issn.1001-1528.2014.05.006

2013-04-20

山東省科技攻關計劃 （2010GSF10278）； 山東省自主創新重大專項 （012ZHZX1C0405）； 濟南市科技明星計劃 （2012）

師 彬 （1969—）， 男， 博士， 主任醫師， 博士生導師。 研究方向： 脊源性疾病的藥物及手法治療。 Tel： 13173056999，Email： sdyky-shibin@163.com