環氧合酶—2和核因子—κB在膿毒癥大鼠肝損傷中的表達

李斌+劉麗平+郭鴻+等

蘭州大學第一醫院重癥醫學科，甘肅蘭州 730000

[摘要] 目的 探討環氧合酶2（COX-2）和核因子-κB（NF-κB）在膿毒癥大鼠的肝組織炎性反應中的表達及其相互關系。 方法 隨機選擇54只200～220 g成年Wistar大鼠分為3組，假手術A組（實驗開始前2 h腹腔內注射生理鹽水，麻醉后行開腹手術，不做模型誘導，n = 6）；膿毒癥模型B組[實驗開始前2 h腹腔內注射生理鹽水，麻醉后盲腸結扎穿孔（cecal ligation and puncture，CLP）建立腹腔感染模型，n = 24]；NS398干預C組（CLP建立腹腔感染模型，實驗開始前2 h腹腔內注射NS398 10 mg/kg，n = 24）。以CLP法建立動物模型，逆轉錄聚合酶鏈反應（RT-PCR）法檢測COX-2 mRNA在肝臟組織的表達，免疫組織化學法（Elisa）測定NF-κB在肝細胞中表達，并檢測肝臟功能，如谷丙轉氨酶（ALT）、谷草轉氨酶（AST）和肝臟大體標本及病理變化。 結果 ①COX-2 mRNA 在A組呈低表達（1040.82±2.77），各時點C組較B組明顯降低。②肝細胞中NF-κB在A組表達較低[3 h：（0.60±0.54），6 h：（0.60±0.54），12 h：（0.60±0.54），24 h：（0.60±0.54）]，膿毒癥后其表達明顯增高[3 h：（2.60±0.55），6 h：（7.20±1.09），12 h：（12.20±0.32），24 h：（6.40±0.73）]；在同一時點比較，B組低于C組[3 h：（1.60±1.89），6 h：（6.60±0.79），12 h：（9.20±2.68），24 h：（4.80±1.60）]（P < 0.05）。③Pearson相關分析，COX-2 mRNA與NF-κB呈直線正相關（r=0.685，P = 0.042）。④膿毒癥后肝臟轉氨酶明顯增高[ALT：3 h：（174.00±18.73）U/L，6 h：（204.67±23.59）U/L，12 h：（311.00±44.53）U/L，24 h：（506.67±24.79）U/L；AST：3 h：（619.67±145.81）U/L，6 h：（594.00±34.59）U/L，12 h：（1027.66±136.21）U/L，24 h：（1518.33±139.38）U/L]，NS-398干預后降低[ALT：3 h：（105.33±18.01）U/L，6 h：（157.00±32.36）U/L，12 h：（101.00±16.52）U/L，24 h：（93.33±10.41）U/L；AST：3 h：（217.00±26.21）U/L，6 h：（461.33±22.01）U/L，12 h：（322.00±72.33）U/L，24 h：（268.00±98.57）U/L]，C組與B組差異有統計學意義（P < 0.05），提示經干預肝臟病理損傷減輕。 結論 COX-2在膿毒癥后引起的肝損傷中占有重要地位，NS-398通過特異性抑制COX-2來抑制肝細胞中NF-κB的表達，從而減輕肝細胞損傷。

[關鍵詞] 膿毒癥；COX-2；NS398；肝損傷；NF-κB

[中圖分類號] R631.3 [文獻標識碼] A [文章編號] 1673-7210（2014）03（b）-0014-05

Express of cyclooxygenase-2 and NF-κB for hepatocellular injury in rats with sepsis

LI Bin LIU Liping GUO Hong LI Xun

Intensive Care Units， the First Hospital of Lanzhou University， Gansu Province， Lanzhou 730000， China

[Abstract] Objective To study the expression of cyclooxygenase 2 and NF-κB on hepatic inflammatory reaction of rats with sepsis and their interrelation. Methods 54 Wistar rats （200-220 g） were randomly divided into 3 groups. A： sham group （with saline injected into intraperitoneal 2 h before the experiment， and operation after anesthesia， no-maked model induced， n = 6）； B： sepsis model group （with saline injected into intraperitoneal 2 h before the experiment， and to make sepsis model after anesthesia by using CLP， n = 24）； C： NS-398 intervention group （ to make sepsis model by using CLP， NS398 10 mg/kg injected into intraperitoneal 2 h before the experiment， n = 24）. Animal model was established with cecum ligation perforation （CLP） method. RT-PCR were used to determine COX-2 mRNA expression in liver tissue， NF-κB of hepatocyte was detected by immunohistochemical method. At the same time， ALT， AST and liver pathological changes were detected. Results ①The expression of COX-2 mRNA were lower in group A （1040.82±2.77）， higher in group B than C at the same time. ②The expression of NF-κB were lower in hepatocyte in group A [3 h： （0.60±0.54）， 6 h： （0.60±0.54）， 12 h： （0.60±0.54）， 24 h： （0.60±0.54）]， but higher after CLP [3 h： （2.60±0.55）， 6 h： （7.20±1.09）， 12 h： （12.20±0.32）， 24 h： （6.40±0.73）]， but were higher in group B than in group C [3 h： （1.60±1.89）， 6 h： （6.60±0.79）， 12 h： （9.20±2.68）， 24 h： （4.80±1.60）] at the same time （P < 0.05）. According to Pearson correlation analysis， it was positive correlation between cyclooxygenase-2 mRNA and NF-κB （r = 0.685， P = 0.042）. ③Serum ALT and AST were significantly increased in B [ALT： 3 h： （174.00±18.73）U/L， 6 h： （204.67±23.59）U/L， 12 h： （311.00±44.53）U/L， 24 h： （506.67±24.79）U/L； AST： 3 h： （619.67±145.81）U/L， 6 h： （594.00±34.59）U/L， 12 h： （1027.66±136.21）U/L， 24 h： （1518.33±139.38）U/L] than group C [ALT： 3 h： （105.33±18.01）U/L， 6 h： （157.00±32.36）U/L， 12 h： （101.00±16.52）U/L， 24 h： （93.33±10.41）U/L； AST： 3 h： （217.00±26.21）U/L， 6 h： （461.33±22.01）U/L， 12 h： （322.00±72.33）U/L， 24 h： （268.00±98.57）U/L]， but significantly decreased in group C than group B （P < 0.05）. Those prompted Hepatic pathologic injury extenuate after intervention. Conclusion COX-2 plays an important role in hepatic injury by sepsis， NS-398 can peculiarly inhibit the expression of NF-κB by inhibiting COX-2， thus relieves injury of hepatocyte.

[Key words] Sepsis； Cyclooxygenase-2； NS398； Hepatic injury； NF-κB

膿毒癥（sepsis）是ICU最為常見的疾病，常常繼發于嚴重創傷、燒傷、休克、大手術后，而膿毒性休克、多器官功能障礙綜合征（MODS）等是其進一步發展而來的，已成為當今外科ICU首要死亡原因[1-2]，而肝臟是最常受累的器官之一。核因子-κB（NF-κB）是炎癥和免疫應答中的關鍵因素，能夠在基因水平調控一些致炎癥細胞因子和誘生型酶，如環氧合酶2（cyclooxygenase-2，COX-2）、一氧化氮合酶（iNOS）等的表達[1-3]。……