頭孢西丁紙片擴散法檢測耐甲氧西林葡萄球菌的評價

黃秀榮

（廣西河池市人民醫院檢驗科，廣西 河池 547000）

頭孢西丁紙片擴散法檢測耐甲氧西林葡萄球菌的評價

黃秀榮

（廣西河池市人民醫院檢驗科，廣西 河池 547000）

目的探討研究頭孢西丁（FOX K-B）法對耐甲氧西林葡萄球菌（MRS）的檢測價值。方法選取132株葡萄球菌，分別通過苯唑西林（OXA）瓊脂平板篩選試驗法、FOX K-B法以及OXA K-B法對MRS加以檢測，將OXA瓊脂平板篩選法的檢測結果作為標準，對比分析FOX與OXA K-B法的敏感性與特異性。結果本組132株葡萄球菌中，74株金黃色葡萄球菌通過OXA瓊脂平板篩選檢測確定為耐甲氧西林金黃色葡萄球菌（MRSA）為30株；58株葡萄球菌屬于凝固酶陰性，其中48株檢測確定為耐甲氧西林凝固酶陰性葡萄球菌（MRCNS）。參考以上標準，FOX K-B法對MRSA檢測的特異性、敏感性均達到100%，但OXA K-B法檢測的特異性為90.91%（40/44），敏感性為93.33%（28/30）。FOX K-B法對MRCNS檢測的特異性、敏感性均達到100%，但OXA K-B法檢測的特異性為40.0%（4/10），敏感性為95.83%（46/48）。結論FOX K-B發檢測MRS的敏感性與特異性極高，具有極高的應用價值。

FOX K-B法；檢測；耐甲氧西林葡萄球菌；評價

耐甲氧西林金黃色葡萄球菌（MRSA）是全球范圍內醫院感染中的一種重要病原菌，并且已經擴散成社區性感染[1]。在部分慢性疾病患者、吸毒人群中尤其流行，其感染率逐年增長。其中，MRCNS感染的發生概率最高。以上兩種葡萄球菌對臨床抗菌藥物的耐藥性十分良好。所以，實驗室研究務必要確定一種可靠方法，可以準確篩選及確認。現我院針對臨床分離出來的132株葡萄球菌，分別應用FOX與OXA K-B法加以檢測，并將結果同OXA瓊脂平板篩選法予以對比分析，總結如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料

采集我院臨床分離出來的132株葡萄球菌分別源于臨床膿液/創面分泌物、前列腺液、尿液、血液以及痰液等各項送檢標本。其中，74株為金黃色葡萄球菌，58株為凝固酶陰性葡萄球菌。

1.2 實驗試劑

OXA紙片：每片1 μg；FOX紙片：每片30 μg；來自英國Oxoid公司。水解酪蛋白（即為M-H）瓊脂選自杭州天和微生物試劑有限公司；OXA瓊脂平板選自北京朋利馳科技有限公司。

1.3 方法

OXA瓊脂平板篩選法、FOX K-B法以及OXA K-B法都參考NCCLS制定的標注實施操作。OXA瓊脂平板篩選法檢測結果評定標準[2]：如金黃色葡萄球菌，應置于35 ℃環境中孵育24 h，并可以透光觀察，在平板上所有細菌的生長均可評判為MRSA。如凝固酶陰性葡萄球菌應該在孵育48 h以后對其透光觀察，并且平板上所有細菌生長均可評判為MRCNS。

1.4 評判標準

FOX K-B法[3]：①對MRSA檢測的評判標準。R≤19 mm，S≥20 mm。②對MRCNS檢測的評判標準。R≤24 mm，S≥25 mm。OXA K-B法：①對MRSA檢測的評判標準。R≤10 mm，S≥13 mm。在11～12 mm時，判斷為中介。②對MRCNS檢測的評判標準。R≤17 mm，S≥18 mm。質控菌株選為金黃色葡萄球菌（即為ATCC26112）。

2 結 果

2.1 對金黃色葡萄球菌的檢測結果

本組132株菌中，74株屬于金黃色葡萄球菌，通過OXA瓊脂平板篩選法檢測發現MRSA有30株，比率為40.54%（30/74）；MSSA有44株，比率為59.46%（44/74）。見表1。將OXA瓊脂平板篩選法檢測結果作為評定標準，可知FOX K-B法檢測的特異性與敏感性均達100%。但OXA K-B法檢測的特異性為90.91%（40/44），敏感性為93.33%（28/30）。

表1 苯唑西林與頭孢西丁紙片擴散法對金黃色葡萄球菌檢測結果分析表[n（%）]

2.2 3種方法對凝固酶陰性葡萄球檢測結果

本組132株菌中，檢測出58株菌凝固酶陰性葡萄球菌，通過OXA瓊脂平板篩選法檢測發現MRCNS有48株，比率為82.76%（48/58），MSCNS有10株，比率為17.24%（10/58）。見表2。將OXA瓊脂平板篩選法檢測結果作為評定標準，可知FOX K-B法檢測的特異性與敏感性均達100%。但OXA K-B法檢測的特異性為40.0%（4/10），敏感性為95.83%（46/48）。

3 討 論

苯唑西林瓊脂平板法指通過耐甲氧西林葡萄球菌均能夠在高滲平板上繼續生長的特性對其加以篩選及鑒定，可作為NCCLS推薦的檢測MRS標準篩選方法。據以往資料表明將PCR檢測meca基因作為金標準，OXA瓊脂平板法檢測特異性、靈敏性均是100%。所以，本次實驗把OXA瓊脂平板法設定為參考標準方法。OXA K-B是檢測MRS的一種傳統方法，但是對于高產β-內酰胺酶菌株能夠減緩OXA發生水解，從而產生耐假藥[4-5]。但是如果mecA基因表達水平很低時，可能出現假敏感。OXA屬于第二代頭酶烯類的一種抗生素，對β-內酰胺酶具有高度的穩定性[6]。同時對葡萄球菌PBP4具有很高的親和性，并且FOX存在時，將促進mecA基因表達合成PBP2a，將mecA基因中的低表達菌株能夠被檢測出來，但是OXA不具備該特點。以往NCCLS添加了應用FOX K-B法對MRS進行檢測。本次研究對132株葡萄球菌予以MRS檢測，將OXA瓊脂平板法檢測結果作為金標準，用來評價FOX K-B法與傳統OXA K-B法檢測的效率。實驗結果表明FOX K-B法和OXA瓊脂平板法檢測結果相互一致，但其敏感性、特異性都是100%。而OXA K-B法對MRSA檢測的效率和FOX瓊脂平板法比較相近，其檢測的特異性90.91%（40/44），敏感性為93.33%（28/30）。對于MRSN檢測來說，OXA K-B法的敏感性為95.83%（46/48），同OXA瓊脂平板法相近似，但是其特異性僅為40.0%（4/10）。顯著性小于OXA瓊脂平板法。由此說明對MRSCN的檢測，OXA K-B法所檢測出來的假耐藥較高。在本組132株葡萄球菌中，OXA K-B法檢測出10株假耐藥、4株假敏感。在對其進一步采取頭孢硝噻酚實驗時顯示10株假耐藥均屬于高產β-內酰胺酶菌株，也許與FOX對其穩定性不夠，容易導致其假耐藥，或是中介有相關性。因為FOX對β-內酰胺酶具有高度的穩定性，因此隨其造成的影響甚微，其結果比較明確，容易判斷。此外4株假敏感是否屬于mecA低表達還需要進一步證實。實驗期間可見，在鹽平板上24 h以后，對金黃色葡萄球菌沒有菌落產生的部分菌株，在放置48 h以后又出現菌落生長。但是對凝固酶陰性葡萄球菌，在24、48、72 h以后發現均存在部分差異，因此應用鹽平板法對MRS進行篩選時，應該嚴格根據規定孵育時間進行判讀結果。FOX K-B法容易保存，對MRS檢測的效率遠遠高于OXA K-B法，且可作為MRS檢測時更適合的介質。但是在實際報告時，應報告OXA耐藥，而不是FOX耐藥。總之，FOX K-B法檢測MRS的敏感性與特異性極高，具有極高的應用價值。

表2 苯唑西林與頭孢西丁紙片擴散法對凝固酶陰性葡萄球菌檢測結果表[n（%）]

[1] 喻華,劉小琦,劉華,等.頭孢西丁紙片擴散法檢測耐甲氧西林葡萄球菌的臨床應用評價[J].國際檢驗醫學雜志,2006,27(12): 1085-1087.

[2] 胡付品,吳湜,葉信予,等,.頭孢西丁紙片擴散法檢測耐甲氧西林葡萄球菌[J].中國感染與化療雜志,2005,5(2):86-88.

[3] 任福榮,程永娥,孫浩仙,等.頭孢西丁紙片擴散法檢測耐甲氧西林葡萄球菌的評價[J].工企醫刊,2006,19(3):46.

[4] 宋焰桃,徐元宏.頭孢西丁紙片評價耐甲氧西林葡萄球菌的探討[J].臨床輸血與檢驗,2008,10(2):103-106.

[5] 何云燕,夏云,龐麗.應用頭孢西丁紙片擴散法檢測耐甲氧西林葡萄球菌[J].重慶醫學,2007(1):55-56+59.

[6] 王大方,倪語星.頭孢西丁紙片擴散法檢測耐甲氧西林金黃色葡萄球菌[J].檢驗醫學,2004,19(6):487-489.

Evaluation of Cefoxitin Disk Diffusion Method to Detect Methicillin-Resistant Staphylococcus

HUANG Xiu-rong
(Department of Laboratory, Hechi People's Hospital, Hechi 547000, China)

ObjectiveTo explore the cefoxitin disc diffusion method for methicillin-resistant staphylococcus(MRS)test value.MethodChoose 132 strains of staphylococcus, respectively by benzene azole Westwood AGAR plate screening test method, cefoxitin disc diffusion method and benzene azole Westwood detection of MRS disc diffusion method, the benzene azole Westwood method of AGAR plate screening test results as the standard, analysis of cefoxitin and benzene azole Westwood disc diffusion method, sensitivity and specificity.Results132 strains of staphylococcus aureus, 74 strains of staphylococcus aureus benzene thiazole Westwood of AGAR plate screening tests identified as methicillin-resistant staphylococcus aureus(MRSA)is 30 strains; 58 grape bacteria strains belong to coagulase negative, of which 48 strains testing identified as methicillin-resistant coagulase negative staphylococcus(MRCNS). Refer to the above standard, cefoxitin disc diffusion method for MRSA detection specificity and sensitivity of 100%, but the benzene azole Westwood disc diffusion method to detect the specificity was 90.91% (40/44), the sensitivity was 93.33%(28/30). The cefoxitin disc diffusion method for MRCNS detection specificity and sensitivity of 100%, but the benzene azole Westwood disc diffusion method to detect the specificity of 40.0%(4/10), the sensitivity was 95.83%(46/48).ConclusionCefoxitin disc diffusion high detection sensitivity and specificity of MRS, have high application value.

The cefoxitin disc diffusion method; Detection; Methicillin-resistant staphylococcus aureus; Evaluation

R446

B

1671-8194（2014）09-0022-02