山西礦區(qū)復(fù)墾土壤中解磷細(xì)菌的篩選及鑒定

陳 倩， 劉善江*， 白 楊， 李亞星， 郜春花， 張 強， 李建華

(1 北京市農(nóng)林科學(xué)院植物營養(yǎng)與資源研究所， 北京 100097；2 山西省農(nóng)業(yè)科學(xué)院農(nóng)業(yè)環(huán)境與資源研究所，山西 太原 030006)

山西煤炭資源極其豐富，占全國已探明煤炭儲量的1/3[1]，但在為全國經(jīng)濟發(fā)展做出了巨大貢獻的同時，其農(nóng)業(yè)生態(tài)環(huán)境也遭到了嚴(yán)重的破壞[2]，礦區(qū)復(fù)墾土壤貧瘠，養(yǎng)分含量低，微生物數(shù)量少，活性低[3]，而有益微生物可通過多方面的作用加速復(fù)墾進程，促進植物的生長發(fā)育[4]。磷是植物生長必需的營養(yǎng)元素之一，其重要性僅次于氮，約占植物干重的0.2%[5]，是參與能量代謝、 核酸與細(xì)胞合成、 部分酶調(diào)控的主要成分[6]，在生態(tài)系統(tǒng)中起著不可替代的作用。一般土壤中含磷量平均約為0.05%，但其中只有0.1%的磷能被植物所利用[7]。山西省耕地土壤嚴(yán)重缺磷，其速效磷含量低于5 mg/kg的耕地占總耕地面積的56.17%[8]。施入土壤的磷肥大部分會形成難溶性磷酸鹽，很難被植物直接吸收利用，且化學(xué)磷肥的生產(chǎn)也會造成空氣及水體污染[9]。解磷細(xì)菌是指能夠?qū)⒂袡C磷和難溶性無機磷轉(zhuǎn)化為可溶性無機磷的細(xì)菌。解磷細(xì)菌施入土壤后會降低土壤的pH值[10]，可以在植物根際形成供磷微區(qū)，從而改善植物磷素的供應(yīng)，加強其它有益微生物的活動，促進植物對鉀、 鈣、 鎂、 鐵、 鋅等營養(yǎng)元素的吸收[11]。因此，篩選高效磷細(xì)菌從而研制生物菌劑，有利于加快山西礦區(qū)復(fù)墾土壤生態(tài)恢復(fù)步伐，減少環(huán)境污染，提高作物產(chǎn)量。

1 材料與方法

1.1 樣品與菌株

原始土樣采自山西省長治、 孝義、 洪洞等地的復(fù)墾區(qū)土壤，主要取自生長期紅薯、 玉米、 豆角、 苜蓿等作物根際以及撂荒地(連續(xù)幾年不種作物自然恢復(fù)的土地)。對照菌株為巨大芽孢桿菌BacillusmegateriumAs1.223，由中國科學(xué)院微生物保藏中心提供，是解磷微生物肥料生產(chǎn)的常用菌種。

1.2 培養(yǎng)基

1.3 解磷菌的分離及篩選

1.3.2 復(fù)篩 通過液體發(fā)酵試驗[12]，以磷酸鈣為磷源物質(zhì)，以巨大芽孢桿菌(Bacillusmegaterium)As1.223為對照菌株，以不接種的培養(yǎng)基為空白對照，將磷細(xì)菌接種到無機磷液體培養(yǎng)基的三角瓶中，設(shè)置3個重復(fù)，置搖床上(150 r/min)保溫30℃振蕩培養(yǎng)5 d。下?lián)u床后高速離心(5000 r/min)30 min，將上清液傾出待測。用酸度計測定上清液的pH值，采用電感耦合等離子體發(fā)射光譜法測定有效磷含量，按下式計算它們的解磷率：

X(%)=PV×10-3/W×103×100

式中：P—培養(yǎng)液有效磷含量(mg/L)；X—解磷率(%)；V—培養(yǎng)液體積(mL)；W—發(fā)酵液中加入的磷酸鈣質(zhì)量(g)。

1.3.3 解磷礦粉和卵磷脂能力的測定 分別以磷礦粉和卵磷脂為磷源，測定復(fù)篩選出菌株的解磷率，方法同1.3.2。

1.3.4 磷酸酶活性的測定 取以卵磷脂為磷源培養(yǎng)5 d后的上清液，采用堿性及酸性磷酸酶試劑盒進行測定，試劑盒購自南京建成生物工程研究所，方法按試劑盒說明書進行。將100 mL發(fā)酵液在37℃下與基質(zhì)作用15 min產(chǎn)生1 mg的酚定義為1個金氏單位(U)。

1.4 菌株生長試驗

1.4.1 溫度適應(yīng)性 分別在4℃、 20℃、 28℃、 37℃、 60℃培養(yǎng)、 觀察、 記錄菌株的溫度適應(yīng)性，采用營養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基，每個處理3次重復(fù)。

1.4.2 耐鹽性 調(diào)整營養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基的NaCl濃度分別為2%、 5%、 7%、 10%，每個處理3次重復(fù)，培養(yǎng)、 觀察、 記錄菌株耐鹽性。

1.4.3 耐酸堿性 調(diào)整營養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基酸度分別為pH 3、 pH 4、 pH 5、 pH 6、 pH 7、 pH 8、 pH 9、 pH 10、 pH 11、 pH 12，每個處理3次重復(fù)，培養(yǎng)、 觀察、 記錄菌株耐酸堿性。

1.5 菌種鑒定

1.5.1 菌落及菌體形態(tài)觀察 將篩選出的菌株接種于營養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基上，30℃培養(yǎng)48 h，觀察菌落形狀和顏色等特征，挑取菌體進行革蘭氏染色，并將樣品送至北京農(nóng)業(yè)生物技術(shù)研究中心，采用掃描電鏡觀察細(xì)胞形態(tài)與大小。

1.5.2 16S rDNA序列測定與系統(tǒng)發(fā)育分析 16S rDNA基因擴增、 測序測定與系統(tǒng)學(xué)分析參考文獻[16]，引物為27f：5′-AGAGTTTGATCCTGGCTCAG-3′、 1492r：5′-TACGGTTACCTTGTTACGACTT-3′。基因在線比對采用EzTaxon數(shù)據(jù)庫，系統(tǒng)學(xué)進化分析采用Mega4.0軟件系統(tǒng)，鄰近法構(gòu)建系統(tǒng)發(fā)育樹，Bootstrap值為1000。

1.5.3 脂肪酸組成分析 使用美國MIDI公司的Sherolock全自動細(xì)菌鑒定系統(tǒng)對菌株進行脂肪酸組成分析，菌株活化采用TSB培養(yǎng)基，由北京農(nóng)業(yè)生物技術(shù)研究中心完成。

2 結(jié)果與分析

2.1 解磷菌篩選結(jié)果

2.1.1 初篩 利用無機磷及有機磷平板培養(yǎng)基，從不同的樣品中篩選出19株解磷微生物。將得到的菌株再進行平板篩選，其中13株在以磷酸鈣為磷源的無機磷培養(yǎng)基上形成透明圈，10株在有機磷培養(yǎng)基上形成透明圈，表明這些菌株可分泌一些物質(zhì)，使菌落周圍的磷酸鈣或卵磷脂溶解，即這些菌株具有降解無機磷和有機磷的能力。D/d≥1.5的有7株(圖1)，這7株菌均具有溶解無機磷和有機磷的能力。在無機磷培養(yǎng)基上，編號為Y14的D/d值最大，達到3.28，而其他菌株的D/d值均小于1.90；在有機磷培養(yǎng)基上，D/d值最大的為Y11，其次為Y15和Y14，有機磷培養(yǎng)基的D/d值相差不大，均小于1.70。總體而言，菌株Y14在無機磷和有機磷培養(yǎng)基上的透明圈均較大(圖2)，初步判斷為最佳解磷菌。

圖1 解磷菌的D/d值Fig. 1 D/d value of the isolated strains

圖2 菌株Y14的透明圈Fig. 2 The bacteria’s transparent turn of Y14

圖3 解磷菌對磷酸鈣的解磷率Fig. 3 Ca3(PO4)2 decomposition rates of the isolated strains

2.2 解磷菌的解磷能力

圖4 解磷菌對磷礦粉的解磷率Fig. 4 Rock phosphate decomposition rates of the isolated strains

圖5 解磷菌對卵磷脂的解磷率Fig. 5 Lecithin decomposition rates of the isolated strains

圖6 解磷菌磷酸酶活性Fig. 6 Phosphatase activity of the isolated strains

綜上所述，降解卵磷脂效果最好的菌株為Y14，其次是Y11和Y34。

卵磷脂是磷脂化合物的一種，可被微生物分泌的磷酸酶分解為甘油、 脂肪酸、 磷酸和膽堿。從圖6可以看出，4株菌的酸性磷酸酶和堿性磷酸酶活性均高于不接菌的空白對照。4株菌的酸性磷酸酶活性均高于巨大芽孢桿菌As1.223，且與空白對照差異顯著，酸性磷酸酶活性最高的菌株為Y14，達到28.4U/L；堿性磷酸酶活性除菌株H22外，其他3株菌均高于As1.223，菌株Y11、 Y14和Y34與空白對照相比差異達到了顯著水平，菌株Y14的堿性磷酸酶活性為50.2 U/L，是4株菌中堿性磷酸酶活性最高的菌株，與As1.223差異顯著。結(jié)合解磷率與磷酸酶活性的數(shù)據(jù)來看，菌株Y14的解磷率最高，其磷酸酶活性也最高，其次為Y11和Y34，解磷率和磷酸酶活性最低的菌株為H22，可以看出解磷率與磷酸酶活性具有一定的正相關(guān)關(guān)系，初步說明解磷細(xì)菌分泌胞外磷酸酶是其解有機磷的一個重要原因。

2.3 菌株生長試驗

表1 解磷菌生長試驗

2.4 菌種鑒定結(jié)果

2.4.2 16S rDNA基因序列分析 4株解磷菌的16S rDNA基因大小約1.5 kb，測序后，通過Contig Express軟件拼接成全序列，采用EzTaxon數(shù)據(jù)庫進行16S rDNA基因在線比對，并挑選數(shù)據(jù)庫高同源性菌株作為參比菌進行16S rDNA系統(tǒng)學(xué)分析，圖8與圖9顯示了它們的系統(tǒng)進化關(guān)系。比對結(jié)果顯示菌株H22、 Y11、 Y34與假單胞菌屬(Pseudomonassp.)有高度同源性，其中H22與PseudomonasvancouverensisATCC 700688T(AJ011507)[17]序列相似性最高，達到了99.36%，H22在系統(tǒng)發(fā)育樹中也與ATCC 700688T聚在一起；Y11的最大相似菌株為PseudomonasmandeliiCIP 105273T(AF058286)[18]，其序列相似性為99.14%，系統(tǒng)發(fā)育樹中也與CIP 105273T聚在一起；Y34與菌株P(guān)seudomonasmandeliiCIP 105273T(AF058286)和PseudomonasfrederiksbergensisJAJ28T(AJ249382)[14]同源性最高，均達到了99.49%，而其在系統(tǒng)發(fā)育樹中與Y11及CIP 105273T形成一個類群。菌株Y14與泛菌屬(Pantoeasp.)中的Pantoeacalida1400/07T(GQ367478)[19]有99.79%的同源性，1400/07T是Y14在EzTaxon數(shù)據(jù)庫中的最大相似菌株，在系統(tǒng)發(fā)育樹中聚在一起。

圖7 掃描電鏡下解磷菌的菌體形態(tài)(×10000)Fig. 7 Morphology of the isolated strains by scanning electron microscope(×10000)

2.4.3 脂肪酸組分分析 根據(jù)MIDI微生物鑒定系統(tǒng)分析結(jié)果，菌株Y11和Y34的細(xì)胞脂肪酸組成特征峰值大于1%的有C12 ∶0、 C16 ∶0、 C18 ∶1ω7c、 C10 ∶03-OH、 C12 ∶02-OH、 C12 ∶13-OH、 C12 ∶03-OH、 第三特征峰和C17 ∶0cyclo，與其16S rDNA相似菌株JF3835T和JAJ28T相一致。參比菌株JF3835T和JAJ28T的主要特征峰有C16 ∶0和第三特征峰，菌株Y34的細(xì)胞脂肪酸成分也集中在這兩個特征峰上，分別占全細(xì)胞組分的22.1%和38.4%，菌株Y11的主要特征峰包括C16 ∶0和第三特征峰，分別為14.4%和14.8%。菌株H22的細(xì)胞脂肪酸主要成分是C16 ∶0、 C18 ∶1ω7c和第三特征峰，分別占脂肪酸總量的24.8%、 11.7%和37.5%，與ATCC 700688T和RW10T的主要特征峰相一致。菌株Y14與其16S rDNA相似菌株LMG 26277T和LMG 2603T細(xì)胞的脂肪酸組成(>1%)分布相一致，其中Y14細(xì)胞脂肪酸組成主要特征峰有C16 ∶0和C17 ∶0cyclo，分別占總量的32.5%和28.6%，參比菌株LMG 26277T的脂肪酸組成主要特征峰包括C16 ∶0，LMG 2603T的主要特征峰包括C16 ∶0和C17 ∶0cyclo(表2)。作為脂類和脂多糖的主要成分，脂肪酸主要分布在細(xì)胞膜上，不同的屬、 種，甚至不同的菌株之間其脂肪酸碳鏈的長度、 雙鍵的位置、 取代基團等都存在差異，據(jù)此原理進行的脂肪酸分析不僅可以進行大量菌株的比較分析，而且可以提供菌株的有關(guān)描述特征，廣泛應(yīng)用于細(xì)菌的分類鑒定中[20]。

圖9 菌株Y14最大相似性種系統(tǒng)發(fā)育樹Fig. 9 Phylogenetic tree of max similar species representing the strain Y14

表2 解磷菌及近緣種脂肪酸的組成比較(%，>1%)

根據(jù)菌株的形態(tài)特征、 16S rDNA基因比對結(jié)果和細(xì)胞脂肪酸組分分析結(jié)果，參照《Bergey's Manual of Systematic Bacteriology》[25]和《常見細(xì)菌系統(tǒng)鑒定手冊》[26]，菌株H22、 Y11和Y34被初步鑒定為假單胞菌Pseudomonassp.，菌株Y14被初步鑒定為泛菌Pantoeasp.。

3 討論

一般認(rèn)為，磷細(xì)菌對有機磷的分解是通過分泌胞外酶而實現(xiàn)的。其中對磷素代謝起重要作用的是磷酸酶，其分酸性和堿性兩種，產(chǎn)生酸性磷酸酶的生物有微生物、 原生動物和植物等，產(chǎn)生堿性磷酸酶的生物有微生物、 藻類、 蚯蚓等[32]，磷酸酯酶對溶解無機難溶磷酸鹽也有一定的效果。在以卵磷脂為磷源的液體發(fā)酵試驗中磷酸酶活性與解磷率基本成正相關(guān)關(guān)系，這與他人研究結(jié)果相一致[33]，培養(yǎng)液中有效磷含量最高的菌株為Y14，其磷酸酶活性也最高，堿性磷酸酶活性達到了50.2 U/L，高于鐘傳青等[32]報道的786 μmol/(L·h)(18.5 U/L)以及游銀偉等[33]報道的20.0 U/L。

4 結(jié)論

參考文獻:

[1] 白中科. 山西礦區(qū)土地復(fù)墾科學(xué)研究與試驗示范十八年回顧[J]. 山西農(nóng)業(yè)大學(xué)學(xué)報, 2004, 24(4)：313-317.

Bai Z K. Scientific researches and experimentation of mined land reclamation of Shanxi during 1986-1994[J]. Journal of Shanxi Agricultural University, 2004, 24(4)：313-317.

[2] 李建華, 郜春花, 盧朝東. 山西省礦區(qū)土地復(fù)墾的初步探討[J]. 山西農(nóng)業(yè)科學(xué), 2008, 36(3)：69-72.

Li J H, Gao C H, Lu C D. Preliminary approach to mining land reclamation in Shanxi[J]. Journal of Shanxi Agricultural Sciences, 2008, 36(3)：69-72.

[3] 錢奎梅, 王麗萍, 李江. 礦區(qū)復(fù)墾土壤的微生物活性變化[J]. 生態(tài)與農(nóng)村環(huán)境學(xué)報, 2011, 27(6)：59-63.

Qian K M, Wang L P, Li J. Variation of microbial activity in reclaimed soil in mining area[J]. Journal of Ecology and Rural Environment, 2011, 27(6)：59-63.

[4] 杜慧平, 劉利軍, 閆雙堆. 微生物對礦山復(fù)墾地土壤基質(zhì)的改良作用[J]. 山西農(nóng)業(yè)科學(xué), 2011, 39(1)：43-46.

Du H P, Liu L J, Yan S D. Improvement action of microorganism on the reclamation soil in mining area[J]. Journal of Shanxi Agricultural Sciences, 2011, 39(1)：43-46.

[5] Schachtman D P, Reid R J, Ayling S M. Phosphate uptake by plants from soil to cell[J]. Plant Physiology, 1998, 116(2)：447-453.

[6] Rodríguez H, Fraga R. Phosphate solubilizing bacteria and their role in plant growth promotion[J]. Biotechnology Advances, 1999, 17(4)：319-339.

[7] Zhu F L, Qu L Y, Hong X G, Sun X Q. Isolation and characterization of a phosphate-solubilizing halophilic bacteriumKushneriasp. YCWA18 from Daqiao Saltern on the Coast of Yellow Sea of China[J]. Evidence-Based Complementary and Alternative Medicine, 2011.

[8] 盧朝東, 郜春花, 王崗, 等.B2和B67菌株篩選及應(yīng)用效果研究[J]. 中國土壤與肥料, 2007, (5)：56-59.

Lu C D, Gao C H, Wang Getal. Selection of B2 and B67 bacteria and their application[J]. Soil and Fertilizer Sciences in China, 2007, (5)：56-59.

[9] Vassilev N, Vassileva M. Biotechnological solubilization of rock phosphate on media containing agro-industrial wastes[J]. Applied Microbiology and Biotechnology, 2003, 61(5-6)：435-440.

[10] Abd-Alla M H. Phosphatases and the utilization of organic phosphorus byRhizobiumleguminosarumbiovarviceae[J]. Letters in Applied Microbiology, 1994, 18(5)：294-296.

[11] 王亞藝, 李松齡, 蔡曉劍, 郝玉蘭. 青海解磷菌菌株的分離篩選[J]. 河北農(nóng)業(yè)科學(xué), 2012, 16(2)：62-64.

Wang Y Y, Li S L, Cai X J, Hao Y L. Isolation and screening of phosphorus solubilizing bacterial strains in Qinghai province[J]. Journal of Hebei Agricultural Sciences, 2012, 16(2)：62-64.

[12] NY412-2000. 磷細(xì)菌肥料[S].

NY412-2000. Phosphate bacteria fertilizer[S].

[13] 沈萍, 范秀容, 李廣武. 微生物學(xué)實驗(第三版)[M]. 北京：高等教育出版社, 1999.

Shen P, Fan X R, Li G W. Microbiology experiment (3rdedition)[M]. Beijing：High Education Press, 1999.

[14] Andersen S M, Johnsen K, Sφrensen Jetal.Pseudomonasfrederiksbergensissp. nov., isolated from soil at a coal gasification site[J]. International Journal of Systematic and Evolutionary Microbiology, 2000, 50(6)：1957-1964.

[15] 李振高, 駱永明, 滕應(yīng). 土壤與環(huán)境微生物研究法[M]. 北京：科學(xué)出版社, 2008. 107-108.

Li Z G, Luo Y M, Teng Y. The methods for studying soil and environmental microbiology[M]. Beijing：Science Press, 2008. 107-108.

[16] 孫建光, 張燕春, 徐晶, 胡海燕. 高效固氮芽孢桿菌選育及其生物學(xué)特性研究[J]. 中國農(nóng)業(yè)科學(xué), 2009, 42(6)：2043-2051.

Sun J G, Zhang Y C, Xu J, Hu H Y. Isolation and biological characteristic investigation on efficient nitrogen-fixing bacilli[J]. Scientia Agricultura Sinica, 2009, 42(6)：2043-2051.

[17] Mohn W W, Wilson A E, Bicho P, Moore E R. Physiological and phylogenetic diversity of bacteria growing on resin acids[J]. Systematic and Applied Microbiology, 1999, 22(1)：68-78.

[18] Verhille S, Baida N, Dabboussi Fetal. Taxonomic study of bacteria isolated from natural mineral waters：proposal ofPseudomonasjesseniisp. nov. andPseudomonasmandeliisp. nov[J]. Systematic and Applied Microbiology, 1999, 22(1)：45-58.

[19] Popp A, Cleenwerck I, Iversen Cetal.Pantoeagaviniaesp. nov. andPantoeacalidasp. nov., isolated from infant formula and an infant formula production environment[J]. International Journal of Systematic and Evolutionary Microbiology, 2010, 60(12)：2786-2792.

[20] 黃翠麗, 王敏, 成曉杰, 等. 一株產(chǎn)共軛亞油酸瘤胃細(xì)菌StreptococcusinfantariusRB111的篩選與鑒定[J]. 微生物學(xué)通報, 2011, 38(1)：78-84.

Huang C L, Wang M, Cheng X Jetal. Screening and identification of aStreptococcusinfantariusRB111 that produces conjugated linoleic acid[J]. Microbiology China, 2011, 38(1)：78-84.

[21] Burr S E, Gobeli S, Kuhnert Petal.Pseudomonaschlororaphissubsp.pisciumsubsp. nov., isolated from freshwater fish[J]. International Journal of Systematic and Evolutionary Microbiology, 2010, 60(12)：2753-2757.

[22] Cámara B, Str?mpl C, Verbarg Setal.Pseudomonasreinekeisp. nov.,Pseudomonasmooreisp. nov. andPseudomonasmohniisp. nov., novel species capable of degrading chlorosalicylates or isopimaric acid[J]. International Journal of Systematic and Evolutionary Microbiology, 2007, 57(5)：923-931.

[23] Brady C L, Cleenwerck I, van der Westhuizen Letal.Pantoearodasiisp. nov.,Pantoearwandensissp. nov. andPantoeawallisiisp. nov., isolated fromEucalyptus[J]. International Journal of Systematic and Evolutionary Microbiology, 2012, 62(7)：1457-1464.

[24] Gavini F, Mergaert J, Beji Aetal. Transfer ofEnterobacteragglomerans(Beijerinck 1888) Ewing and Fife 1972 toPantoeagen. nov. asPantoeaagglomeranscomb. nov. and description ofPantoeadispersasp. nov.[J]. International Journal of Systematic and Evolutionary Microbiology, 1989, 39(3)：337-345.

[25] Holt J G. Bergey’s manual of systematic bacteriology (1stedition)[M]. Baltimore：Williams & Wilkins, 1984-1989.

[26] 東秀珠. 常見細(xì)菌系統(tǒng)鑒定手冊[M]. 北京：科學(xué)出版社, 2001.

Dong X Z. Manual of systematic determinative bacteriology[M]. Beijing：Science Press, 2001.

[27] 朱培淼, 楊興明, 徐陽春, 等. 高效解磷細(xì)菌的篩選及其對玉米苗期生長的促進作用[J]. 應(yīng)用生態(tài)學(xué)報, 2007, 18(1)：107-112.

Zhu P M, Yang X M, Xu Y Cetal. High effective phosphate-solubilizing bacteria：Their isolation and promoting effect on corn seedling growth[J]. Chinese Journal of Applied Ecology, 2007, 18(1)：107-112.

[28] 賀夢醒, 高毅, 胡正雪, 等. 解磷菌株B25的篩選、 鑒定及其解磷能力[J]. 應(yīng)用生態(tài)學(xué)報, 2012, 23(1)：235-239.

He M X, Gao Y, Hu Z Xetal. Screening, identification, and phosphate-solubilizing capability of phosphate-solubilizing bacterial strain B25[J]. Chinese Journal of Applied Ecology, 2012, 23(1)：235-239.

[29] 郝晶, 洪堅平, 劉冰, 張健. 石灰性土壤中高效解磷細(xì)菌菌株的分離、 篩選及組合[J]. 應(yīng)用與環(huán)境生物學(xué)報, 2006,12(3)：404-408.

Hao J, Hong J P, Liu B, Zhang J. Isolation, screening and combination of highly-effective phosphorus solubilizing bacterial strains in calcareous soil[J]. Chinese Journal of Applied and Environmental Biology, 2006, 12(3)：404-408.

[30] Illmer P, Schinner F. Solubilization of inorganic phosphate by microorganisms isolated from forest soils[J]. Soil Biology and Biochemistry, 1992, 24(4)：389-395.

[31] 吉蓉. 土壤解磷微生物及其解磷機制綜述[J]. 甘肅農(nóng)業(yè)科技, 2013, (8)：42-44.

Ji R. Research summary on phosphate dissolution of phosphate solubilizing microorganisms[J]. Gansu Agricultural Science and Technology, 2013, (8)：42-44.

[32] 鐘傳青, 黃為一. P17菌株產(chǎn)生磷酸酶的影響因素及其定域研究[J]. 山東建筑大學(xué)學(xué)報, 2012, 27(1)：32-35.

Zhong C Q, Huang W Y. Studies on the factors and domain influencing the activities of the phosphatase produced by P17 strain[J]. Journal of Shandong Architecture University, 2012, 27(1)：32-35.

[33] 游銀偉, 王梅, 江麗華, 等. 高效解磷菌BacillussubtilisP-1的N離子束誘變育種[J]. 西南農(nóng)業(yè)學(xué)報, 2009, (4)：1020-1022.

You Y W, Wang M, Jiang L Hetal. Mutant breeding of high effective phosphate-solubilizing bacteriaBacillussubtilisP-1 by nitrogen ionic beam[J]. Southwest China Journal of Agricultural Sciences, 2009, (4)：1020-1022.

[34] Sundara Raoand W V B, Sinha M K. Phosphate dissolving microorganisms in the soil and rhizosphere[J]. Indian Journal of Agricultural Sciences, 1963, 33(4)：272-278.

[35] Elliott J M, Mathre D E, Sands D C. Identification and characterization of rhizosphere-competent bacteria of wheat[J]. Applied and Environmental Microbiology, 1987, 53(12)：2793-2799.

[36] De Freitas J R, Banerjee M R, Germida J J. Phosphate-solubillizing rhizobactera enhance the growth and yield but not phosphorus uptake of canola(BrassicanapusL.)[J]. Biology and Fertility of Soils, 1997, 24(4)：358-364.

[37] Molla M A Z, Chowdhury A A. Microbial mineralization of organic phosphate in soil[J]. Plant and Soil, 1984, 78(3)：393-399.

[38] Vazquez P, Holguin G, Puente M Eetal. Phosphate-solubilizing microorganisms associated with the rhizosphere of mangroves in a semiarid coastal lagoon[J]. Biology and Fertility of Soils, 2000, 30(5-6)：460-468.

[39] Altomare C, Norvell W A, Bj?rkman T, Harmand G E. Solubilization of phosphates and micronutrients by the plant-growth-promoting and biocontrol fungusTrichodermaharzianumRifai 1295-22[J]. Applied and Environmental Microbiology, 1999, 65(7)：2926-2933.

[40] Chabot R, Antoun H, Cescas M P. Growth promotion of maize and lettuce by phosphate-solubilizingRhizobiumleguminosarumbiovar.Phaseoli[J]. Plant and Soil, 1996, 184(2)：311-321.

[41] Jha A, Sharma D, Saxena J. Effect of single and dual phosphate-solubilizing bacterial strain inoculations on overall growth of mung bean plants[J]. Archives of Agronomy and Soil Science, 2012, 58(9)：967-981.

[42] Igual J M, Valerde A, Cervantes Eetal. Phosphate-solubilizing bacteria as inoculants for agriculture：Use of updated molecular techniques in their study[J]. Agronomy for Sustainable Development, 2001, 21：561-568.

[43] Illmer P, Schinner F. Solubilization of inorganic calcium phosphates-solubilization mechanisms[J]. Soil Biology and Biochemistry, 1995, 27：257-263.