復方中藥對雛雞冷應激的保護效應

陳海娟 孫 心 周靚靚 李 靜

（哈藥集團生物疫苗有限公司，黑龍江哈爾濱 150069）

復方中藥對雛雞冷應激的保護效應

陳海娟 孫 心 周靚靚 李 靜

（哈藥集團生物疫苗有限公司，黑龍江哈爾濱 150069）

本實驗以附子、當歸、黃芪、五味子等中藥，按照祖國中醫學傳統理論，配成復方中藥，研究其對冷應激雛雞的保護效應。試驗選取150只1日齡雛雞。預試7d后分成空白組（正常溫度對照組）、冷應激對照組、中藥組（低溫環境下飼喂含1% 復方中藥的日糧）。每組50只。試驗周期為35d。各組雛雞分別于7d、14d、21d、28d 和35d 隨機抽取10只，稱重后采血、宰殺，分離血清。取心臟、肝臟、脾臟、腎臟、睪丸、法氏囊、胸腺稱重。用分光光度計檢測血液內乳酸脫氫酶、堿性磷酸酶、谷胱甘肽過氧化物酶、總抗氧化能力、肌酐、尿酸和尿素氮的含量或者活性，并測定各組雛雞血清中三碘甲腺原氨酸（triiodothyronine，T3）、甲狀腺素（thyroxine，T4）含量。結果表明，冷應激對照組雛雞從飼養第21d 開始體重較空白組和中藥組生長緩慢，與空白組和中藥組比較差異極顯著（p＜0.01）；中藥組雛雞，在生長21d之內，體重增長較空白組比較差異性不顯著（p＞0.05），從第28d 開始，體重增長較空白組差異性顯著（p＜0.05）。中藥組雛雞體重明顯高于空白組和冷應激對照組。冷應激對照組雛雞的臟器指數，以免疫器官為主明顯受到損傷，中藥組雛雞在21d之內臟器指數維持正常水平，較冷應激對照組無差異（p ＞ 0.05）。28 d后免疫器官的臟器指數明顯高于空白組，且高于冷應激對照組。與空白組和冷應激對照組比較統計學差異顯著或極顯著（p ＜ 0.05或p ＜ 0.01）。中藥組的乳酸脫氫酶、堿性磷酸酶、谷胱甘肽過氧化物酶活性水平較空白組降低（P＜ 0.05或P ＜ 0.01），總抗氧化能力下降，統計學分析差異顯著或極顯著（p ＜ 0.05或p ＜ 0.01），肌酐和尿酸含量較空白組升高，統計學分析差異顯著或極顯著（p ＜ 0.05或p＜ 0.01）。從14d開始至28d，冷應激對照組雛雞的T3，T4含量升高，與空白對照組統計學比較差異顯著或極顯著（p ＜ 0.05或P ＜ 0.01）。中藥組雛雞的T3，T4含量未見明顯變化，與空白對照組比較差異不顯著（p ＞ 0.05）。與冷應激對照組比較差異顯著或極顯著（p ＜0.05或P ＜ 0.01）。

復方中藥；雛雞；冷應激；保護效應

1 試驗材料

1.1 實驗動物

1日齡海蘭白雄性健康雛雞150只（黑龍江省哈爾濱市某雞場提供）

1.2 飼料及藥品

復方中藥內主要包含附子、當歸、黃芪、五味子等粉劑，均購買于藥材大市場。中藥組飼喂日糧在哈爾濱東大牧業有限公司用小型混合機混合。

2 試驗方法

2.1 實驗分組及管理

選取體重無顯著差異的1日齡海蘭白雄性雛雞150只，雛雞適應7d后，隨機分為冷應激中藥組、冷應激對照組、空白對照組，每組50只。試驗組飼喂日糧+1%復方中藥；空白對照組和冷應激對照組飼喂正常日糧。冷應激中藥組和冷應激對照組雛雞飼養環境控制在15℃左右室內飼養，而空白對照組按常規標準飼養，溫度控制在正常飼養溫度。各組雞自由采食、飲水。

2.2 樣品采集與處理

每組雞群分別于7d、14d、21d、28d、35d，隨機選取10 只雞，先稱重并記錄，然后進行靜脈采血10ml。血液靜止10min后，以3000r/min離心，分離血清，-20℃冰箱保存用于生化指標、抗氧化性能及T3、T4含量的測定。最后采集心、肝、腎、脾、法氏囊、胸腺、睪丸用于臟器指數的分析。

2.3 體重檢測

每組分別在7d、14d、21d、28d、35d分別隨機選取10只雞，編號并稱重，記錄體重數據。

2.4 臟器指數檢測

取完整的心、肝、腎、脾、法氏囊、胸腺、睪丸，分別對所取器官稱重，并按下列公式計算上述各個臟器指數。

2.5 雛雞血液生化指標的測定

檢測各組雞血清中乳酸脫氫酶（LDH）、堿性磷酸酶（AKP）、尿酸、尿素氮（BUN）、肌酐活性，按試劑盒說明書操作進行。

2.6 雛雞血液抗氧化性能測定

（1）總抗氧化能力（T-AOC）測定：

充分混勻，放置10 min，波長520nm，1cm 光徑，雙蒸水調零，測定各管吸光度OD值。

單位定義及計算公式：

在37℃ 時，每分鐘每毫升血清使反應體系的吸光度（OD）每增加0.01時，為一個總抗氧化能力單位。

混勻，3500～4000 轉/min，離心10 min，取上清1 ml 作顯色反應。

②顯色反應

（2）雛雞血清GSH-PX活性測定：

血清GSH-PX測定操作方法

①酶促反應：試劑一應用液提前在37℃ 預溫

混勻，室溫靜止15 min后，波長412nm，1cm 光徑比色環，雙蒸水調零，測定各管吸光度OD值。

單位定義及計算公式：血清中GSH活力的計算：

定義：規定每0.1 ml 血清在37℃ 反應5 min，扣除非酶促反應作用，使反應體系中GSH 濃度降低1 μmol/L 為一個每活力單位。

注：*，從酶促反應中看出反應液0.4 ml，加試劑二2 ml，在反應液中6倍稀釋。

2.7 雛雞血清中T3，T4含量的測定

血清中T3，T4的濃度的測定采用放射免疫分析法（RIA），按試劑盒說明書操作，測定儀器采用瑞典LKB-1261I十探頭自動γ計數器。

2.8 數據處理與分析

數據均以平均數±標準差表示，采用Oringin70軟件作圖，采用SPSSL2.0統計軟件中的多重比較Duncan’s法，其中各組間進行統計學分析：a，aa：與同時間冷應激對照組t-檢驗比較時分別p＜ 0.05，p ＜ 0.01；b，bb：與同時間中藥組組間t-檢驗比較時分別p ＜ 0.05，p ＜ 0.01；（p＜0.01表示差異極顯著，p＜0.05表示差異顯著，p＞0.05表示差異不顯著）。

3 結果

3.1 不同組間雛雞體重的變化

由圖3-1可知，冷應激對照組的體重增長從飼養第21d 開始，冷應激對照組雛雞體重較空白組和中藥組生長緩慢，與空白組比較差異性及顯著（p＜0.01），與中藥組比較差異性極顯著（p＜0.01）；中藥組雛雞在生長21d之內，體重增長較空白組比較差異性不顯著（p＞0.05），從第28d 開始，體重增長較空白組差異性顯著（p＜0.05）。中藥組雛雞體重明顯高于空白組和冷應激對照組。

3.2 不同組間雛雞臟器指數的變化

通過比較相同實驗時間，不同組間（空白對照組、冷應激對照組、中藥組）的臟器指數得出，見圖3-2至3-8。雛雞在飼養第7d，第14d各組間相互統計比較，無顯著性差異（p＞0.05）。但從21d開始，冷應激對照組中的免疫器官臟器指數相對空白對照組的免疫器官指數有所降低，其中法氏囊的臟器指數與空白組比較有統計學差異（p＜0.05）；中藥組的免疫器官的臟器指數卻有相應的增加，尤其以法氏囊和胸腺為主，與空白組比較差異顯著（p＜0.05或p＜0.01）。飼喂第28d開始，中藥組的免疫器官，脾臟、法氏囊和胸腺的臟器指數明顯增加，與空白組比較差異顯著或極顯著（p＜0.05或p＜0.01）。而冷應激對照組，在第28d出現了臟器指數明顯的下降，尤以免疫器官為主，與空白組比較差異顯著或極顯著（p＜0.05或p＜0.01）。

圖3 -3 不同組間雛雞肝臟指數在不同時間的變化

3.3 復方中藥對冷應激雛雞血液生化指標的影響

3.3.1 復方中藥對冷應激雛雞血液LDH的影響

表3-1為空白對照組、冷應激對照組和中藥組雛雞的LDH 指標在不同時間段的變化。隨著雛雞的日齡增加和體重增大，機體的LDH 指標逐漸升高，實驗期間在第21d 達到峰值。且中藥組中LDH 最高。各組統計學比較差異不顯著（p ＞ 0.05）。

3.3.2 復方中藥對冷應激雛雞血液AKP的影響

由表3-2可知。冷應激對照組AKP活性下降較空白組明顯。飼喂28d和35d 時，空白組與冷應激對照組比較差異性顯著或極顯著（p ＜ 0.05或p ＜ 0.01）。中藥組雛雞的AKP 活性也隨日齡增長而降低，只有21d 與空白組比較有統計學差異（p ＜ 0.05），其他時間無統計學差異（p ＞ 0.05）；而與冷應激對照組比較，28d和35d AKP活性差異性顯著或極顯著（p ＜ 0.05或p ＜ 0.01），其他時間無統計學差異（p ＞ 0.05）。

3.3.3 復方中藥對冷應激雛雞血液尿素氮含量、尿酸和肌酐的影響

由表3-3看出，尿素氮指標統計學比較差異不顯著（p ＞0.05）。

由表3-4 明顯看出，冷應激對照組雛雞的尿酸含量明顯較空白對照組高，統計學差異顯著或極顯著（p ＜ 0.05或P ＜ 0.01）。中藥組與空白對照組比較差異不顯著（p ＞ 0.05）。與冷應激對照組比較差異顯著或極顯著（p ＜ 0.05或p ＜ 0.01）。

由表3-5明顯看出，冷應激對照組雛雞的肌酐含量明顯較空白組高，統計學差異顯著或極顯著（p＜ 0.05或p ＜ 0.01）。中藥組與空白組比較差異不顯著（p ＞ 0.05）。與冷應激對照組比較差異極顯著（p ＜ 0.01）。

3.4 復方中藥對冷應激雛雞抗氧化性能的影響

3.4.1 復方中藥對冷應激雛雞血液T-AOC含量的影響

由圖3-9可見，冷應激對照組T-AOC含量下降明顯，與空白組數據統計比較在14d、21d和35d時差異性極顯著（p ＜ 0.01）。中藥組雛雞血液內總抗氧化能力值較空白組比較無統計學差異（p＞ 0.05）。

3.4.2 復方中藥對冷應激雛雞血液GSH-Px活性的影響

由圖3-10可知，實驗第14d 開始，冷應激對照組和中藥組與空白對照組進行統計學比較差異顯著或極顯著（p ＜ 0.05或p ＜0.01）。而中藥組的GSH-Px活性升高顯著，較冷應激對照組比較統計學差異顯著或極顯著（p ＜ 0.05或p ＜ 0.01）。

3.5 復方中藥對冷應激雛雞血液T3，T4含量的影響

由表3-6明顯看出，從14d開始至28d，冷應激對照組雛雞的T3含量明顯升高，與空白對照組統計學比較差異顯著或極顯著（p ＜ 0.05或P ＜ 0.01）。中藥組雛雞的T3含量未見明顯變化，與空白對照組比較差異不顯著（p ＞ 0.05）。與冷應激對照組比較差異極顯著（p ＜ 0.01）。

由表3-7看出，從14d開始至28d，冷應激對照組雛雞的T4含量升高，與空白對照組統計學比較差異顯著（p ＜ 0.05）。中藥組雛雞的T4含量未見明顯變化，與空白對照組比較差異不顯著（p ＞0.05）。與冷應激對照組比較差異顯著（p ＜ 0.05）。

4 討論

冷應激雛雞生長性能下降，免疫能力降低，機體抗氧化能力和激素調節水平下降。復方中藥能夠提高冷應激雛雞的免疫水平和抗氧化能力，促進雛雞生長。通過實驗表明復方中藥能夠保證雛雞在冷應激環境下正常生長。對家禽的養殖生產有一定的實際應用意義。