艾司西酞普蘭灌胃對抑郁癥大鼠海馬組織中5-HT及5-HT1A受體表達的影響

劉 英，徐愛軍，張玉蕊

(1唐山市工人醫(yī)院，河北唐山063000;2河北聯(lián)合大學(xué)基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)院)

抑郁癥是一種反復(fù)發(fā)作的慢性情感性精神疾病，嚴重時甚至伴隨自殺傾向，發(fā)病機制尚未明確，已成為目前研究熱點［1，2］。抑郁癥臨床治療藥物較多，但常伴有較多不良反應(yīng)。艾司西酞普蘭是西酞普蘭的S-異構(gòu)體代謝產(chǎn)物，治療抑郁癥起效快，不良反應(yīng)少［3］。2014年3月，我們觀察了艾司西酞普蘭灌胃對抑郁癥大鼠海馬組織中5-羥色胺(5-HT)及5-HT1A受體表達的影響。現(xiàn)將結(jié)果報告如下。

1 材料與方法

1.1 實驗動物、藥品與試劑 SPF級健康成年雄性SD大鼠(河北聯(lián)合大學(xué)實驗動物中心提供，合格證號:SCXK京2009-0004)60只，體質(zhì)量180～220 g。艾司西酞普蘭(商品名為來士普，西安楊森制藥有限公司生產(chǎn)，批號J20050124)。兔多克隆5-HT1A抗體(Santz Cruz公司)，Western blotting相關(guān)試劑(武漢博士德生物工程有限公司)。

1.2 實驗動物分組、造模及艾司西酞普蘭灌胃方法 將大鼠適應(yīng)性飼養(yǎng)1周，隨機分為對照組、模型組和治療組各20只。采用慢性不可預(yù)見性溫和應(yīng)激(CUMS)方法建立抑郁癥模型，模型組和治療組均給予11種應(yīng)激，鼠籠45℃傾斜24 h，行為限制24 h，潮濕墊料 24 h，42℃熱水游泳 5 min，4℃冰水游泳5 min，禁食24 h，禁水24 h，夾尾1 min，持續(xù)光照36 h，鼠籠搖動15 min，天敵聲音30 min。隨機將上述11種應(yīng)激分配到21 d內(nèi)，每日給予1種應(yīng)激，每種應(yīng)激平均出現(xiàn)2次，但同種應(yīng)激不能連續(xù)出現(xiàn)。對照組除每天抓取1次外，不作其他處理。造模同時，給予治療組大鼠艾司西酞普蘭，20 mg/kg，每日按2 mL/kg灌胃1次。

1.3 抑郁癥大鼠的行為觀察 ①糖水偏好實驗。三組大鼠均給予糖水和自來水雙瓶供飲，測量禁水2.5 h后三組大鼠1 h內(nèi)的糖水和自來水的消耗量，計算糖水偏好百分比(糖水消耗量/總液體消耗×100%)。②Morris水迷宮實驗。連續(xù)測試3 d，每天5個循環(huán)，記錄三組大鼠在60 s內(nèi)尋找水面下平臺的時間，即逃避潛伏期(EL)。取3 d的測試成績計為動物的空間記憶成績。

1.4 抑郁癥大鼠海馬組織中5-HT檢測 采用高效液相色譜法。每組取10只大鼠，1%戊巴比妥鈉(40 mg/kg)腹腔注射麻醉，斷頭取腦，冰上快速分離海馬組織。加入高氯酸提取液冰浴勻漿后離心，留取上清 20 μL進行分析。流動相:緩沖液(50 mmol/L KH2PO4)/甲醇 (95∶5)，緩沖液:3 mmol/L庚烷磺酸鈉、10 mmol/L醋酸鈉、85 mmol/L 檸檬酸、0.2 mmol/L EDTA，pH 3.7、柱溫40 ℃、波長掃描范圍210～370 nm、檢測波長275 nm、流速1.0 mL/min。以標(biāo)準(zhǔn)品峰保留時間與樣品峰保留時間對照定性，標(biāo)準(zhǔn)品峰面積與內(nèi)標(biāo)峰面積比值進行定量分析。

1.5 抑郁癥大鼠海馬組織中5-HT1A受體檢測采用Western blotting法。三組各取10只大鼠，麻醉后斷頭取腦，冰上快速分離海馬組織，加入RIPA裂解液，提取組織總蛋白，定量后按照30 μg蛋白量上樣，進行10%SDS-PAGE電泳，PVDF膜電轉(zhuǎn)印，脫脂奶粉封閉，5-HT1A一抗(1∶500)4℃孵育過夜，二抗IgG(1∶3 000)室溫孵育1 h，ECL顯色。同上進行內(nèi)參照β-actin的Western blotting分析。以目的條帶與內(nèi)參照的光密度比值表示蛋白表達。

1.6 統(tǒng)計學(xué)方法 采用SPSS13.0統(tǒng)計軟件。計量數(shù)據(jù)以±s表示，兩兩比較采用t檢驗。P≤0.05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié)果

對照組、模型組、治療組的糖水偏好百分比分別為 92.48% ±8.18%、57.62% ±4.90%、79.87% ±2.96%，逃避潛伏期分別為(8.63 ± 1.05)、(25.25±2.41)、(19.38 ±2.13)s，海馬組織中 5-HT 分別為(1.92 ± 0.22)、(0.34 ± 0.07)、(0.88 ± 0.11)ng/g，海馬組織中5-HT1A受體相對表達量分別為0.74 ±0.07、0.16 ±0.01 和 0.37 ±0.04，上述指標(biāo)三組間兩兩比較，P均＜0.05。

3 討論

抑郁癥臨床主要表現(xiàn)為情緒低落、興趣減低、悲觀、思維遲緩、運動遲滯等，慢性不可預(yù)見性溫和應(yīng)激(CUMS)是較理想的建立抑郁動物模型的方法，能使大鼠表現(xiàn)出典型的抑郁癥臨床癥狀，主要包括興趣喪失、反應(yīng)遲鈍、情緒低落、記憶力減退等［4］。本實驗利用CUMS應(yīng)激研究艾司西酞普蘭抗抑郁作用機理。實驗結(jié)果表明，與模型組比較，治療組大鼠糖水偏好百分比明顯升高，平均逃避潛伏期明顯降低，提示艾司西酞普蘭能有效改善抑郁癥大鼠的情緒障礙，具有抗抑郁作用。

海馬是重要邊緣系統(tǒng)結(jié)構(gòu)，主要參與調(diào)節(jié)情感、認知、學(xué)習(xí)及空間記憶能力等行為。抑郁大鼠海馬區(qū)的代謝指標(biāo)出現(xiàn)異常并呈一定規(guī)律性動態(tài)變化［5］。在精神疾病發(fā)病機制和治療中，海馬組織中5-HT受體的功能變化具有重要作用［6］。在5-HT受體系統(tǒng)中，5-HT1A亞型和情感障礙關(guān)系最為密切。5-HT1A受體參與了抑郁癥發(fā)病的病理生理過程［7］。神經(jīng)遞質(zhì)5-HT可以興奮性調(diào)節(jié)促腎上腺皮質(zhì)激素釋放激素(CRH)的釋放［8］。下丘腦—垂體—腎上腺(HPA)軸失調(diào)可以導(dǎo)致抑郁的發(fā)生。當(dāng)機體受到應(yīng)激時，HPA軸可以調(diào)控釋放CRH，導(dǎo)致5-HT及去甲腎上腺素合成不足，出現(xiàn)與抑郁癥相關(guān)的癥狀［9］;而抗皮質(zhì)醇藥物能緩解抑郁癥癥狀［10，11］。5-HT及其受體在HPA軸反饋調(diào)節(jié)中起重要作用［12］，其中5-HT1A受體在情緒和精神調(diào)節(jié)中具有重要作用［13］。本實驗結(jié)果顯示，艾司西酞普蘭能明顯升高應(yīng)激所致的5-HT水平，促進5-HT1A受體表達。

綜上所述，艾司西酞普蘭灌胃能提高抑郁癥大鼠海馬組織中5-HT及5-HT1A受體表達水平。

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