頸側和尾根結核菌素皮內試驗在奶牛結核病監測中的應用探討

康喆恒 曾貴全

(四川省鄧崍市農村發展局畜牧獸醫服務中心,四川鄧崍 611530)

頸側和尾根結核菌素皮內試驗在奶牛結核病監測中的應用探討

康喆恒 曾貴全

(四川省鄧崍市農村發展局畜牧獸醫服務中心,四川鄧崍 611530)

結核病是由結核分枝桿菌引起的一種古老的、危害嚴重的且防控難度大的人畜共患慢性傳染病。牛是最易感染結核病的動物，牛結核病被世界動物衛生組織（OIE）定為B類傳染病，我國將其列入二類動物疫病。牛結核病和人結核病可以相互傳染，約10.6%的人結核病是由牛結核桿菌引起的，約7%的牛結核病是由人結核桿菌引起的[1]，由此可見攜帶結核桿菌的牛是人結核病的最大傳染源之一。隨著現代社會對牛奶制品的消費量越來越大，人的結核病發病率也在上升，社會流行病學研究顯示二者呈明顯的流行病學相關性[2]，食用消毒不徹底的牛奶制品已經成為人類感染結核病的一大潛在重要途徑。

因此，奶牛結核病的監測是動物疫病預防控制機構每年度必須認真開展的一項重要工作。但是基層動防機構每年的監測量較大，受人手、設備、監測成本、監測手段、監測時間等客觀條件限制，無法采用細菌學、血清學、動物試驗等檢測方法來監測，而主要采用動物結核病診斷技術（GB/T 18645-2002）中規定的牛型結核分枝桿菌PPD皮內變態反應試驗來監測。這個試驗經過大家多年的探索，目前有頸側皮試和尾根皮試兩種方法。

1 操作方法及判定標準

（1）頸側皮試的操作方法及判定標準：

①注射部位及術前處理：將牛只編號后在頸側中部上三分之一處剪毛（或提前一天剃毛），三個月以內的犢牛，也可在肩胛部進行，直徑約10cm。用卡尺測量術部中央皮皺厚度，作好記錄。注意，術部應無明顯的病變。

②注射劑量：不論大小牛只，一律皮內注射0.1ml（含2000IU）。即將牛型結核分枝桿菌PPD稀釋成含2萬IU/ml后，皮內注射0.1ml。凍干PPD稀釋后當天用完。

③注射方法：先以75%酒精消毒術部，然后皮內注射定量的牛型結核分枝桿菌PPD，注射后局部應出現小皰，如對注射有疑問時，應另選15cm以外的部位或對側重作。

④注射次數和觀察反應：皮內注射后經72h判定，仔細觀察局部有無熱痛、腫脹等炎性反應，并以卡尺測量皮皺厚度，作好詳細記錄。對疑似反應牛應立即在另一側以同一批PPD同一劑量進行第二回皮內注射，再經72h觀察反應結果。

對陰性牛和疑似反應牛，于注射后96h和120h再分別觀察一次，以防個別牛出現較晚的遲發型變態反應。

結果判定

①陽性反應：局部有明顯的炎性反應，皮厚差大于或等于4.0mm。

②疑似反應：局部炎性反應不明顯，皮厚差大于或等于2.0mm、小于4.0mm。

③陰性反應：無炎性反應。皮厚差在2.0mm以下。

凡判定為疑似反應的牛只，于第一次檢疫60d后進行復檢，其結果仍為疑似反應時，經60d再復檢。如仍為疑似反應，應判為陽性。

（2）尾根皮試的操作方法及判定標準：

①注射部位及術前處理：操作者站在牛身后，一只手抓住牛尾巴往上翹，手離尾根部約30cm，使其與水平線成45°～60°，不用測量術部皮皺厚度。注意此時握牛尾的手拇指在上，使牛尾自然抬起，不要在中間彎曲或偏向一側，否則牛會因疼痛而不安，影響正常操作。

②注射劑量：同頸側皮試。

③注射方法：同頸側皮試，一律注射于尾根左側便于觀察。

④注射次數和觀察反應：皮內注射后經72h判定，仔細觀察局部有無熱痛、腫脹等炎性反應，不用測量皮皺厚度，對疑似反應牛應立即在另一側以同一批PPD同一劑量進行第二回皮內注射，再經72h觀察反應結果。

結果判定

a）陽性反應：有任何程度可摸到或可見的熱、痛、皮膚增厚、腫脹等炎性反應均判為疑似反應[5]。

b）陰性反應：無炎性反應。

凡判為疑似反應的牛只，按GB/T18645—2002的規定進行復檢。

2 頸側皮試和尾根皮試的比較

（1）共同點：兩種方法的判定標準都是按照GB/T18645—2002的規定在注射結核菌素72h后觀察是否有炎性反應，注射量不足或誤注入皮下都將影響檢測結果。

（2）不同點：頸側皮試要求高，需要特別保定牛頭并剃毛，測量皮皺厚度，前期耗時較長，在基層大量監測時需要多人協助，操作麻煩，效率偏低，且可能給人和牛都帶來危險，造成不必要的損失，但是在后期觀察時非常方便，腫脹一眼可見，速度很快。這個方法和判定標準是完全按照GB/T18645—2002的規定進行的，有據可依。

尾根皮試的好處是不需要完全保定，減少了牛的應激反應，對產奶量和生產性能影響較小，減少了不必要的步驟，操作簡便易掌握，縮短了操作時間，使工作效率得到大幅提高，一個人即可完成操作，也更安全。但是在后期觀察時需要再次抬起牛尾，耗時較多，且注射部位離肛門較近，在環境中存在大量抗酸桿菌的氣候潮濕地區或衛生狀況欠佳易發生注射感染的牧場，檢測結果可能會受到干擾。此外還有觀點認為尾根皮膚對結核菌素的敏感性比頸側皮膚低，漏檢率可能偏高。這個方法和判定依據是是近年來從實踐中摸索出來的，其科學性還有待相關部門的確定。

由以上情況可見，頸側和尾根皮試都不是完全理想的皮試方法，實際操作中應視現實條件來決定選擇哪個部位，并靈活采用一些調整措施來降低操作難度，適當縮短操作時間，提高檢測準確性，筆者認為選擇注射部位的條件和可以采用的調整措施如下：

注射前做好皮膚消毒；準確地將結核菌素說明書上標明的1頭份注進皮內，誤注入皮下或注入量不足須重打；

做頸側皮試時，接種前后都由同一名熟練操作者測量皮厚以盡量避免人為的讀數偏差；針對尾根皮膚比頸側皮膚敏感性低的問題，做尾根皮試時可適當將劑量提高至頸側皮試注射量的1.5～2倍；

監測量小而人手充足、時間充裕時可在頸側做初檢，監測量大時可在尾根做初檢；凡判為疑似反應的牛應按GB/T18645—2002的規定進行復檢；

氣候潮濕地區或衛生狀況不佳的牧場可在頸側做初檢，氣候干燥地區或衛生狀況良好的牧場可在尾根做初檢；凡判為疑似反應的牛處理同（3）。

需要說明的是，由于動物個體差異、結核桿菌菌型差異等原因，不論是頸部還是尾根皮試都不一定能檢出全部陽性牛，有時可能會出現非特異性反應，因此，基層機構檢出的疑似反應牛如有必要需采樣送上級機構復檢，結合流行病學調查、臨床癥狀觀察、病理學檢驗和微生物學檢驗等方法進行綜合分析，才能做出更可靠、更準確的診斷。為撲殺陽性牛提供有力證據，讓牛主心服口服，避免因錯殺造成不必要的經濟損失而使牛主抵觸以后的監測工作。

[1] 李金嶺，郭宏軍，王麗艷，等.國內外牛結核病的防制現狀及檢測手段[J].獸醫導刊，2007，（12）：18-37.

[2] 王云霞，于三科，瞿軍軍.牛結核病的現狀及診斷研究進展[J].動物醫學進展，2006，27（6）：38-41.

[3] 靳善寧，馬 杰，韓冰毅，等．牛尾根靜脈采血技術[J].中國畜牧獸醫文摘，2011，27（4）：126-127.

[4] 衛龍興，成建忠.牛結核病流行病學與診斷技術研究進展[J].現代農業科技，2010，（21）：345-348.