組蛋白去乙酰化酶6在胃癌中的表達及意義

李光明，李能蓮，張嶺漪，王 亮，趙 睿

（1.蘭州大學第二醫院，甘肅 蘭州 730030；2.甘肅中醫學院，甘肅 蘭州 730000）

組蛋白去乙酰化酶6在胃癌中的表達及意義

李光明1，李能蓮2，張嶺漪1，王 亮1，趙 睿1

（1.蘭州大學第二醫院，甘肅 蘭州 730030；2.甘肅中醫學院，甘肅 蘭州 730000）

目的 了解組蛋白去乙酰化酶6（HDAC6）在胃癌組織中的表達及臨床意義。方法 采用組織芯片與免疫組織化學SP法檢測75例胃癌組織、15例癌旁正常組織和18例中-重度異型增生胃黏膜組織中HDAC6的表達情況，并分析其表達與胃癌臨床病理特征的關系。結果 HDAC6在胃癌組織中的陽性表達率（52.0%）顯著高于正常（0.0%）或中-重度異型增生組織（22.2%），差異具有顯著性（P<0.05）；并且HDAC6在胃癌組織中的陽性表達率與腫瘤的浸潤深度和淋巴結轉移均具有相關性（P<0.05）。結論 HDAC6在胃癌組織中過表達，可能與胃癌的發生發展以及浸潤和轉移等惡性生物學行為密切相關。

組蛋白去乙酰化酶6；胃癌；免疫組織化學

腫瘤的發病機制十分復雜，近十余年來組蛋白去乙酰化酶（histone deacetylases，HDACs）在腫瘤發生中的作用成為研究熱點。目前的研究多集中在Ⅰ類HDACs，認為其主要通過使核心組蛋白去乙酰化，導致染色質的空間構象由疏松型轉為緊密型，從而引起某些腫瘤抑制基因轉錄抑制。研究[1~3]表明，組蛋白去乙酰化酶6（HDAC6）與肺癌、乳腺癌和口腔鱗癌等實體瘤的發生發展密切相關。但有關HDAC6與胃癌發生發展的關系，目前文獻報道較少。本實驗利用免疫組織化學法分別檢測胃癌組織、癌旁正常組織和中-重度異型增生的胃黏膜組織中HDAC6的表達水平，并分析其與胃癌各臨床病理特征之間的關系。

1 材料和方法

1.1 材料

選取2012年10月至2013年10月蘭州大學第二醫院收治的術前未經過放、化療的胃癌手術切除石蠟標本75例，正常對照標本15例（距癌組織5 cm以上），均為同批次手術的正常胃組織標本；中-重度異型增生18例，均為同年胃鏡活檢的組織。75例胃癌病例中，男性42例，女性33例；年齡31～76歲，平均55歲，≥55歲者45例，<55歲者30例；組織學分類：高分化腺癌16例，中分化腺癌26例，低分化腺癌33例（包括黏液腺癌7例，黏液細胞癌1例）；癌組織突破漿膜層21例，未突破漿膜層54例；有淋巴結轉移29例，無淋巴結轉移46例。

1.2 方法

1.2.1 組織芯片的制備 先制備模板蠟塊，在模板上用組織陳列儀打出直徑為2 mm的孔，然后鏡下觀察病理HE切片，對照相應蠟塊選取典型腫瘤組織區域。在此區域獲取2 mm的柱形組織，置于模板蠟塊已打好的孔內，按號碼順序排列，表面壓平，做二次包埋。常規石蠟切面，厚4 μm，進行免疫組化染色。

1.2.2 免疫組化染色 試劑采用鼠抗人單克隆抗體HDAC6（北京中杉公司），工作濃度為1∶100，SP9000通用型試劑盒和DAB顯色劑（北京中杉公司）。具體操作按說明書染色步驟進行。抗原修復用微波修復。用PBS代替一抗作陰性對照。

1.3 結果判定

免疫組織化學檢測結果：光鏡下HDAC6表達主要定位于腫瘤細胞漿，以黃色、棕色、棕褐色顆粒為陽性表達。采用IP（Intensity Percentages）評分方法，綜合染色強度和陽性細胞數兩項指標進行判斷。具體方法：（1）染色強度記分：細胞質無染色為0分，淡黃色為1分，棕黃色為2分，棕褐色為3分；（2）陽性細胞數記分：0分為無陽性細胞，1分為陽性細胞≤10%，2分為11%<陽性細胞<50%，3分為51%<陽性細胞<75%，4分為陽性細胞＞75%。陽性強度為兩項記分之和：0分者為陰性（-），1～2分者為弱陽性（+），3～5分者為中等強度陽性（++），6～7分者為強陽性（+++）。

1.4 統計學分析

采用SPSS 17.0統計軟件，所有資料比較采用χ2檢驗，以P<0.05為有顯著性差異。

2 結果

2.1 HDAC6的表達

胃癌組織中HDAC6主要表達于癌細胞胞漿（見圖1），其陽性細胞主要出現于腫瘤壞死區的周圍以及浸潤腫瘤的邊緣（見圖1）。75例胃癌標本中，有39例HDAC6陽性表達，陽性表達率為52.0%；腫瘤組織內浸潤的淋巴細胞無著色。15例正常胃黏膜組織無HDAC6表達。18例中-重度異型增生胃黏膜組織中，有4例陽性表達，陽性表達率為22.2%，主要在增生腺體腺細胞胞漿（見圖2）。HDAC6在胃癌組織和正常胃黏膜組織中的表達差異有顯著性（χ2=13.765，P=0.000）；HDAC6在胃癌組織和中-重度異型增生胃黏膜組織中的表達差異有顯著性（χ2= 5.178，P=0.025）。

2.2 HDAC6的表達與胃癌臨床病理參數的關系

HDAC6的表達與腫瘤的浸潤深度和淋巴結轉移均相關，有顯著性差異（P＜0.05），與患者年齡、性別、腫瘤分化程度之間無顯著性差異（P＞0.05），見表1。

圖1 HDAC6在胃癌組織中的表達（免疫組化SP法×400）

圖2 HDAC6在癌旁組織中的表達（免疫組化SP法×200）

表1 HDAC6的表達與胃癌臨床病理參數的關系

3 討論

3.1 HDAC6在胃癌組織中高表達可促進胃癌的發生發展

在HDACs家族中，HDAC6是一個比較獨特的組蛋白去乙酰化酶，具有核質穿梭功能，主要定位于細胞質[4]，分子量約為131.4 kDa[5]。研究表明，選擇性HDAC6抑制劑與抗腫瘤藥物紫杉醇聯合作用，可協同抑制雌激素受體陽性乳腺癌細胞MCF-7的生長[6]。另有文獻報道，HDAC6在肺癌組織[1]和乳腺癌組織[2]中的表達水平與腫瘤的預后呈負相關，在口腔鱗癌組織[3]中HDAC6呈上調表達并且與腫瘤的侵襲性明顯相關。研究者還發現[7]，HDAC6過表達的小鼠胚胎成纖維細胞（NIH3T3）運動性比對照細胞強。HDAC6與胃癌發生發展之間的關系，目前文獻報道較少。我們的研究表明，胃癌組織中HDAC6的表達水平顯著高于正常或中-重度異型增生的胃黏膜組織，且穿透漿膜層的胃癌組織中HDAC6的表達水平也高于未穿透者，同時有淋巴結轉移者HDAC6的表達水平明顯高于無轉移者。

3.2 HDAC6促進胃癌發生發展的機制可能與其調節HIF-1а、HSP90、細胞肌動蛋白及IIp45的生物學功能有關

HDAC6促進腫瘤發生發展及轉移的機制目前尚不明了。研究表明[8~11]，HDAC6可增強缺氧誘導因子-1а（hypoxia-inducible factor1-а，HIF-1а）和熱休克蛋白90（heat shock protein 90，HSP90）的生物學功能，可能是二者的上游調節因子。已知HIF-1а和HSP90可促進多種腫瘤（包括胃癌）的發生發展，是重要的致瘤因子。還有研究發現，HDAC6可通過調節細胞骨架肌動蛋白的功能進而促進細胞遷移[12]。另外，新發現的IIp45（aka MIIP）基因的蛋白質產物抑制細胞移動的功能可通過抑制HDAC6實現[13]。據此可以推測，本實驗中HDAC6與胃癌發生發展以及浸潤和轉移等惡性生物學行為密切相關，其部分機制可能是通過增強HIF-1а、HSP90以及細胞肌動蛋白的生物學功能和抑制IIp45生物學功能實現的。

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1671-1246（2014）13-0136-03