血紅素氧合酶在幽門螺桿菌定植黏附中的作用研究進展

馬紅英，周海燕，沙建平

·綜述與講座·

血紅素氧合酶在幽門螺桿菌定植黏附中的作用研究進展

馬紅英，周海燕，沙建平

幽門螺桿菌;血紅素氧合酶;定植

幽門螺桿菌(Helicobacter pylori，H.pylori)為一種定植于胃黏膜的革蘭陰性微需氧菌，其感染呈慢性趨勢，是慢性胃炎、胃十二指腸潰瘍的重要致病因素，并與胃黏膜相關淋巴組織(MALT)淋巴瘤和胃癌密切相關，世界衛生組織更是將其列為一類致癌因子［1］，在發展中國家感染率可達70%以上，中國人群感染H.pylori的人數約有6億。H.pylori的高感染率使其對人類健康構成嚴重危害，但其在胃內復雜環境下黏附定植的機制仍不很清楚，闡明其定植機制對有效預防和治療H.pylori感染具有重要的指導意義。

1 病原微生物的黏附定植是H.pylori感染致病的重要前提

H.pylori能夠在極低pH值、眾多胃蛋白酶等不利因素下成功定植，病原微生物的黏附定植是其感染致病的重要前提，其鐵代謝相關蛋白發揮至關重要的作用。最新研究發現，維持胃黏膜中金屬離子的動態平衡是H.pylori能夠在復雜環境中黏附定植的必備條件之一。大量動物實驗顯示，多種與鐵、銅、鎳等金屬離子代謝相關的蛋白成分都與H.pylori的定植感染密切相關［2-5］，其中與鐵代謝相關的蛋白在H.pylori的最終黏附定植中扮演著更為重要的角色。Koga等［6］發現，當增加食物中鐵離子含量時，H.pylori在小型豬胃黏膜的定植率明顯提高。Waidner等［7］在敲除H.pylori鐵蛋白基因pfr后，發現該敲除株難以在蒙古沙鼠胃黏膜定植。Gancz等［8］的研究表明，H.pylori的鐵吸收調節蛋白(ferric uptake regulator，Fur)與H.pylori在胃內的成功定植密切相關，Fur突變株的定植率可較野生株降低100倍，因為其是H.pylori鐵代謝中的主要調節因子，在鐵攝取、利用、儲存過程中都發揮著重要的調節作用。由此可見，H.pylori的鐵代謝相關蛋白在其黏附定植中是至關重要的，其代謝機制也是研究的重點，但其中許多關鍵問題并未完全闡明。

2 未知功能蛋白HP0318(HugZ)與血紅素氧合酶(hem in oxygenase，HO)的關系

在H.pylori血紅素鐵代謝途徑中起關鍵作用的HO一直未發現，而筆者的前期研究證實，H.pylori中的HugZ具有HO的功能，并與 H.pylori的適應性定植密切相關，推測HugZ即為H.pylori的血紅素氧合酶。

HO作為血紅素代謝過程中的限速酶，其降解血紅素釋放出的鐵是細菌的主要鐵源之一［9］。目前在多種革蘭陰性致病菌中都發現了HO，如空腸彎曲菌、鼠疫耶爾森菌、腦膜炎奈瑟氏菌、志賀(氏)菌、霍亂弧菌及白喉桿菌等，其在細菌的黏附定植中都發揮著不可替代的作用［10-11］。有研究發現，在敲除白喉桿菌和腦膜炎奈瑟氏菌中的HO編碼基因后，細菌難以在宿主體內生存定植［12-13］。而最近對與H.pylori感染類似的革蘭陰性微需氧菌空腸彎曲菌的研究也發現，鐵的獲取是其在宿主腸道內定植及持續感染的重要條件之一，其中高保守的血紅素氧合酶cj1613c發揮著關鍵的作用［14］。早期研究發現，H.pylori基因組中包含與其他細菌血紅素鐵攝取利用系統同源的基因位點，推測H.pylori同樣具有HO功能的相關蛋白，但至今仍未發現。

郭剛等［15］通過蛋白組學二維電泳技術，比較臨床分離的1株幽門螺桿菌在蒙古沙土鼠體內從原代(M0)到穩定傳代(M13)細菌的蛋白組學變化，發現有若干蛋白改變，HugZ就是其中之一，并且該蛋白與H.pylori在沙鼠中的適應性定植密切相關，其突變株在胃內的定植密度較原始株減少約5倍。為了驗證HugZ的具體功能，闡明其與H.pylori黏附定植的關系，之后筆者又進行了一系列體外生物化學實驗，發現該蛋白可與血紅素結合并催化其降解為膽綠素，釋放出CO和鐵。同時，通過微生物基因組學比較，發現HugZ基因與在空腸彎曲菌中發現的cj1613c有62.7%的同源性。因此，推測 HugZ即為在 H.pylori鐵代謝中發揮重要作用的HO。

3 HugZ蛋白的結構與生物學功能

解析HugZ與血紅素結合的復合物(HugZ-Hemin)的晶體結構，可進一步確定HugZ的生物學功能，分析其血紅素結合位點及催化活性位點，為闡明其在H.pylori黏附定植中的作用提供有力證據。

目前，真核生物中的HO已較明確，細菌中的HO雖然具有同樣的催化功能，但其具體的空間結構及作用機制各不相同，因為不同的細菌面對的是不一樣的生存環境。已有研究發現［16］，銅綠假單胞菌、白喉桿菌和腦膜炎奈瑟氏菌的HO與人類HO結構相似，鼠疫耶爾森菌及金黃色葡萄球菌的HO晶體結構卻完全不同。作為在胃黏膜這一特殊環境中定植的HO，HugZ極可能有自己獨特的空間構象及作用機制。研究HugZ與HugZ-Hemin的三維結構，有助于明確其功能，從而進一步探討其在H.pylori黏附定植中的作用。目前國內外尚未見關于H.pylori中HO的研究報道，筆者查找了酶學方面研究的資料，并結合HugZ晶體結構的信息，探討這個蛋白可能的血紅素結合位點及催化活性位點，在此基礎上進一步研究和解釋其生物學功能。同時，筆者認為通過定點突變及基因敲除等手段構建突變體，以體外生物化學實驗驗證其血紅素結合能力及催化活性，在動物實驗中探討HugZ與H.pylori黏附定植的關系，可以進而研究其在H.pylori定植中的具體作用。

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10.3969/j.issn.1009-0754.2014.05.036

2014-03-27)

(本文編輯:施 莼)

200081 上海，解放軍第四一一醫院門診部(馬紅英、周海燕);解放軍第四二一醫院消化科(沙建平)

沙建平，電子信箱:shajianping99@sina.com