液基薄層制片技術與傳統涂片法在痰脫落細胞檢查中的應用

曲燦華，李 瑩，趙德明，牟洪香

(佳木斯大學附屬第一醫院檢驗科，黑龍江 佳木斯 154003)

痰脫落細胞檢查是早期肺癌診斷的重要方法之一，該方法安全、簡便、重復性好、患者容易接受等優點廣泛應用于臨床。傳統痰涂片方法存在盲點取材、痰黏稠不易取材、涂片厚薄不均，干擾閱片等弊端，導致臨床痰細胞診斷假陰性結果過多。20世紀90年代末出現了液基薄層細胞學檢測(liquid-based cytology test，LCT)技術，LCT最早被應用于婦科陰道及宮頸上皮內病變與篩查，極大的提高了宮頸癌及癌前病變的檢出率及診斷率[1]。此后，逐漸在非婦科細胞學領域也得到了很好的應用[2]，我院痰液基細胞學檢查應用于2007年，收集我院門診及住院患者855例痰標本脫落細胞檢查，采取傳統涂片、液基薄層制片技術兩種方法聯合應用，分析兩種制片法在肺癌診斷上的優缺點，探討在臨床中的應用價值。現報道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料

2012-09～2013-08我院門診及住院患者855例痰脫落細胞檢查，其中，男468例，女387例，年齡33～89歲，平均(45.7±8.3)歲，對每例患者痰標本同時采用傳統方法涂片和液基薄層制片進行細胞學檢查。試劑：北京華葉液基細胞處理液。

1.2 方法

①傳統涂片：咳痰前晨起漱口，將口水、鼻涕排凈，深呼吸幾次后再咳，痰必須從肺的深部咳出，一般以血絲痰為好。采用拉片制片法，取合格痰約綠豆粒大小于載玻片上，上壓一載玻片，壓下，上下玻片向兩側對拉，制成2張涂片，1張干燥后進行瑞氏-吉姆薩染色、1張95%酒精固定10min后，進行巴氏染色。其余標本置于液基細胞處理液中。 ②液基制片：將上述標本置于處理液中后，加入3滴DDT，于振蕩器上震蕩5min充分混勻，靜止30min，消化黏液，加篩網過濾，取濾液倒于離心管中，以1500r/min離心沉淀5min，用一次性吸管吸取上清液棄去，留取約2mL液體，將其混勻，利用甩片機制片1張，95%酒精固定10min后，進行巴氏染色，樹脂膠封固涂片后與傳統涂片一起顯微鏡閱片。

1.3 統計學處理

采用SPSS15.0軟件對所得出的數據進行χ2檢驗，P>0.05無統計學意義。

2 結果

2.1 兩組涂片整體質量對比

傳統涂片上細胞分布不均勻、堆積重疊、黏液多、背景雜亂、讀片視覺效果差，但細胞排列方式較好。痰液基涂片細胞分布均勻、數量多、背景清晰、細胞結構易于辨認，讀片視覺效果佳。

2.2 細胞學診斷陽性符合率

在所檢測的855例痰標本中，細胞學診斷陽性共43例。傳統涂片瑞氏-吉姆薩染色：可疑癌4例、癌標本33例，假陰性6例，陽性符合率77%(33/43)。傳統涂片巴氏染色：可疑癌4例、癌標本35例，假陰性4例，陽性符合率81%(35/43)。液基薄層制片巴氏染色：可疑癌2例、癌標本39例、假陰性2例，陽性符合率91%(39/43)。

2.3 傳統涂片兩種染色方法對比

瑞氏-吉姆薩染色陽性符合率77%(33/43)、巴氏染色陽性符合率81%(35/43)，經χ2檢驗顯示傳統涂片兩種染色方法陽性符合率無統計學意義(P>0.05)。

2.4 與組織病理對比

在所檢測的陽性標本中，28例與組織學結果對照。組織學診斷：鱗癌16例、腺癌11例、小細胞癌1例。傳統涂片瑞氏-吉姆薩染色診斷鱗癌12例，與組織學診斷分型符合率為75%(12/16)、腺癌9例，與組織學診斷分型符合率為82%(9/11)；傳統涂片巴氏染色診斷鱗癌13例，與組織學診斷分型符合率為81%(13/16)、腺癌9例，與組織學診斷分型符合率為82%(9/11)、小細胞癌1例，與組織學診斷分型符合率為100%(1/1)；液基薄層制片巴氏染色診斷鱗癌15例，與組織學診斷分型符合率為94%(15/16)、腺癌10例，與組織學診斷分型符合率為91%(10/11)、小細胞癌1例，與組織學診斷分型符合率為100%(1/1)。

3 討論

痰脫落細胞檢查已作為肺癌診斷及肺癌高危人群篩查的重要手段，我院已開展近40年。傳統涂片瑞氏-吉姆薩染色作為傳統方法一直延用，近年來開展了傳統涂片巴氏染色，由于傳統涂片標本未經過處理，涂片背景不夠清晰，癌細胞混雜在紅細胞、白細胞、組織細胞、細胞碎片，黏液及壞死成分中，以及標本不能及時固定等影響了細胞形態的觀察而報告可疑癌(瑞氏-吉姆薩染色4例、巴氏染色4例)，或由于取材等原因導致漏診而出現假陰性(瑞氏-吉姆薩染色6例、巴氏染色4例)。對于傳統涂片瑞氏-吉姆薩染色，我科延用多年，通過對比，兩種染色方法其診斷陽性符合率無顯著性差異。 液基薄層制片是近年來引進的新技術。該方法是把痰標本經過細胞處理液，將黏液消化處理，使細胞充分暴露，經過濾，去除了血液、黏液、細胞碎片等等，該方法細胞固定及時、細胞形態保存完好，細胞數量適中、涂片薄、背景干凈等優點廣泛應用于細胞學的各個領域。本組統計資料液基薄層制片診斷，陽性符合率〔91%(39/43)〕高于傳統涂片〔瑞氏-吉姆薩染色77%(33/43)、巴氏染色81%(35/43)〕。可疑癌及假陰性報告例數也低于傳統涂片。 28例組織學診斷來源于我院及外院的支氣管沖洗液、肺腫瘤切除術的組織病理診斷。液基薄層制片巴氏染色與組織病理診斷符合率(鱗癌94%、腺癌91%)高于傳統涂片與組織病理診斷符合率(鱗癌：瑞氏-吉姆薩染色75%、巴氏染色81%；腺癌：瑞氏-吉姆薩染色82%、巴氏染色82%)。

通過上述對比，雖然液基制片陽性符合率高于傳統涂片，但日常工作中，我們仍采取傳統涂片、液基薄層制片技術兩種制片方法聯合應用。液基薄層制片克服了傳統涂片厚薄

不均、細胞重疊、背景雜亂以及細胞本身退變的影響，細胞均勻分布、背景清晰，但經過過濾使細胞群分散，影響了對腫瘤細胞來源的判定，而傳統涂片保持了腫瘤細胞原有的排列方式并伴有腫瘤性素質的背景，更利于判斷腫瘤細胞的來源，如鱗癌細胞散在或成小堆，多在壞死即腫瘤性素質的背景中。腺癌細胞多成團，鑲嵌狀排列。小細胞癌排列成松散的細胞群(葡萄串狀)或脊椎骨樣排列等等。這些特點有利于癌細胞的分型判定。兩種制片相互補充將有助于提高肺癌的檢出率[2]。在實際工作中，通過兩種制片聯合應用，盡可能降低假陰性、減少可疑癌報告例數，有利于提高痰惡性腫瘤細胞的檢出率。

[1]Beckwith DG,Shane JJ,Dupree WB.The promise and risk of a new technology: the Lehigh Valley Hospital's experience with liquid-based cervical cytology[J].Cancer,1998 ,84(5):317-378

[2]何淑蓉，馬正中，賀青.痰細胞學液基薄片與傳統涂片的對比研究[J].中華病理學雜志，2005，34(7)：439