OLYMPUS AU640型全自動生化分析儀性能驗證

馮洋，徐上放，魯靜

(上海市閔行區梅隴社區衛生服務中心，上海 200237)

目前，全自動生化分析儀已經成為臨床生化檢驗的常用儀器之一。儀器的性能優劣直接關系到檢驗質量，同時對儀器的性能進行驗證也是《醫學實驗室質量和能力的專用要求》[1]和《醫學實驗室質量和能力認可準則》[2]的要求。為了保證檢驗質量，驗證儀器性能，本文選取了幾個常用生化項目對本實驗室OLYMPUSAU640型全自動生化分析儀的性能進行驗證，以對其目前的性能有一個較為客觀的評價。

1 材料與方法

1.1 儀器 OLYMPUS AU640型全自動生化分析儀。

1.2 試劑、校準品及質控品 試劑、校準品為原裝配套產品；質控品為美國BECKMAN-COULTER公司產品，質控品批號分別為高值：M1303；低值：M1301。

1.3 樣本來源 BECKMAN-COULTER質控血清；本院就診患者或正常體檢者無溶血、無黃疸、無脂血的新鮮血清；生理鹽水。

1.4 精密度驗證實驗 參考美國臨床實驗室標準化協會(CLSI)EP5-A2[3]文件，選擇2個水平的質控血清作為批內和批間精密度的待測標本。批內精密度：在室內質控均在控的前提下，將兩個濃度水平的質控品隨機插入病人樣本中進行檢測，一批內連續測定20次。批間精密度測定：在室內質控均在控的前提下，每天將兩水平濃度的質控品隨機插入病人樣本中檢測兩次，每次至少間隔兩小時，共測定20d。將以上檢測結果進行統計分析，計算批內、批間精密度和標準差。批內精密度以小于CLIA’88允許誤差的1/4為標準；批間精密度以小于CLIA’88允許誤差的1/3為標準。

1.5 正確度驗證實驗 參考CLSIEP15-A2[4]文件。對上海市臨床檢驗中心2013年第一次室間質評發放的5個不同批號的室間質控品進行檢測，計算檢測值和“靶值”的相對偏倚(SE%)。SE%≤1/2CLIA’88允許總誤差(TEa)為可接受。

1.6 線性范圍驗證實驗 參考CLSIEP6-A2[5]文件。以患者樣本為高值樣本(H)，生理鹽水為低值樣本(L)，其中高值檢測物質含量盡量接近說明書線性范圍的上限，在沒有高濃度臨床樣本的情況下，通過在儀器上設置增加樣本量來完成。按1L、0.2H+0.8L、0.4H+0.6L、0.6H+0.4L、0.8H+0.2L、1H將H和L配制成6個系列濃度樣本，用OLYMPUS AU640型全自動生化分析儀對系列血清進行檢測，在最短的時間內每個標本重復測定2次。記錄檢測結果，求出每個濃度2次測定的均值，記錄結果。觀察收集到的數據有無明顯的離群點，如有，應查找原因。若有明了原因，糾正后修正數據，如果沒有明顯原因，則應重新檢測全部數據。對測量數據作精密度檢驗：計算CVr，將CVr與設定的不精密度目標進行比較，本文設定不精密度目標為CLIA’88允許誤差的1/4。如果CVr超過設定目標，則可能是精密度太低，表明測量數據的精確度不符合線性判斷的要求。反之，則表示符合。以理論值為橫坐標，以實測值的均值為縱坐標進行回歸分析，計算一階、二階、三階回歸方程及回歸標準誤。對二階(b2)三階(b2、b3)回歸系數作t檢驗，如果三個回歸系數與0比較均無顯著性差異，即差異無統計學意義(P>0.05)，判斷為一級線性，否則判斷為統計學標準的非線性。當存在非線性時，根據回歸分析的標準誤大小，以最小者確定為最適多項式。當數據線性模型為非一次多項式時，則需計算最適多項式在每個實測點上的線性偏差，與設定目標比較，以評價每個點的非線性程度。

1.7 參考區間驗證實驗 參考CLSIC28-A2[6]文件。選擇2O名健康體檢合格者為第一組實驗對象，第一組實驗對象的測定值如果有95%以上在所選的參考值范圍內，所選用的參考區間便可以接受。假如有2名或2名以上檢測結果在參考區間以外，則必須重新收集第2組數據重新檢測，第2組檢測數據不超過2名結果在參考區間以外，可以認為驗證有效；假如第2組檢測數據超過2名結果在參考區間以外，先檢查檢測系統性能、檢測程序的正確，然后考慮該項目是否具有人群生物特性，做進一步調查，重新選擇合適的生物參考區間，必要時自建生物參考區間。

1.8 統計學處理 檢測所得的數據采用SPSS16.0和Excel 2003進行統計學處理。

2 結果

2.1 精密度驗證結果 OLYMPUSAU640型全自動生化分析儀對質控血清各驗證項目進行測定，計算批內、批間精密度結果顯示，各檢測項目的批內精密度均小于CLIA’88允許誤差的1/4；批間精密度均小于CLIA’88允許誤差的1/3。精密度驗證結果見表1。

表1 批內、批間精密度測定結果

2.2 正確度驗證結果 正確度驗證結果見表2，驗證結果顯示，各項目不論是平均偏移還是在各個不同的醫學決定水平上的偏移，偏倚結果均明顯低于上海市臨檢中心允許的偏倚范圍。

表2 正確度驗證結果(%)

2.3 線性范圍驗證結果 由于高值臨床樣本較難獲得，TP、GLU以及磷采用了將樣本量增加一倍的方法進行驗證。經實驗，沒有發現明顯的離群值，各項目的不精密度均符合線性評價要求。多項式回歸分析結果顯示(見表 3)，對二階(b2)、三階(b2、b3)回歸系數作t檢驗，三個回歸系數差異都無統計學意義(P>0.05)，判斷各項目均為一級線性，可直接判斷呈線性。線性范圍驗證結果見表4。

2.4 參考區間驗證結果 AST、CHOL、P各有一名實驗對象的驗證結果超過現行參考區間上限，TP有一名實驗對象的檢測結果低于現行參考區間下限，其余各項目均在現行參考區間內，因此可判定各項目的參考區間有效。結果見表5。

表3 線性范圍驗證多項式回歸分析結果

表4 線性范圍驗證結果

表5 生物參考區間驗證結果(n=20)

3 討論

精密度是指分析方法對同一樣本產生重復測量相同值的能力[7]，從測量誤差的角度來說，精密度所反映的是測得值的隨機誤差，通常用不精密度表示。因為臨床上在通常情況下僅對標本作一次檢測就發出報告，因此檢測系統的精密度就顯得非常重要。實驗結果表明，批內精密度和批間精密度分別小于1/4CLIA’88的允許范圍和1/3 CLIA’88的允許范圍。

正確度是指大批檢測結果的均值與真值的一致程度[8]。從測量誤差的角度來說，正確度所反映的是測得值的系統誤差，通常用偏移表示。根據上海市臨床檢驗中心室間質評進行的正確度比對試驗顯示，正確度符合臨床要求。

線性范圍評價是觀察一種檢測方法或一個檢測系統的檢測范圍[7]。因此，線性范圍是評價試劑盒性能的重要指標之一，在某種意義上，線性范圍越寬，該試劑盒就越適用于臨床[9]。但由于任何方法的線性范圍都是有限的，所以對一個檢驗項目而言，其線性范圍起碼應該覆蓋本項目的醫學決定水平和常見疾病的檢測值。基于此，對線性范圍進行驗證是性能驗證的重要指標，這將有助于在檢測系統應用到臨床前，幫助工作人員發現線性問題，以使得檢測結果準確和可靠。線性范圍驗證實驗結果顯示，各項目在驗證范圍內均呈一級線性，相關系數(r)均大于0.975,b在0.97~1.030范圍內，截距較小。說明各項目線性范圍驗證實驗結果好，標本在本實驗的高、低值范圍內的線性理想。

生物參考區間是指某項檢查結果在正常人群中的分布范圍，是解釋檢驗結果分析檢驗信息的一個基本尺度和依據，臨床實驗室無論開展什么項目都必須首先制定合理的生物參考區間。CLSI C28-A2文件認為每個實驗室、不同檢測系統在檢測同一檢測項目時都建立各自的生物參考區間不現實，同時闡明可以使用試劑說明書和權威書刊推薦的生物參考區間或轉移其他實驗室的生物參考區間，并推薦一個簡便的驗證方法可以確定引用的生物參考區間是否合適。結果顯示，各驗證結果均符合實驗要求，因此認為本實驗室所使用的參考區間符合臨床要求。

綜上所述，本實驗室OLYMPUSAU640型全自動生化分析儀性能良好，可以滿足臨床的質量要求。

[1]北京市醫療器械檢驗所.中國合格評定國家認可委員會.GB／T22576-2008醫學實驗室質量和能力的專用要求[S].北京:中國標準出版社,2008:1-36.

[2]中國合格評定國家認可委員會.CNAS-CL02醫學實驗室質量和能力認可準則[S].北京:中國合格評定國家認可委員會,2008:1-36.

[3]Clinical and Laboratory Standards Institute.Evaluation of precision performance of quantitative measurement methods[S].EP5-A2,CLSI,2004:1-28．

[4]Clinical and Laboratory Standards Institute.User demonstration of performance for prevision and accuracy[S].EP15-A2,CLSI,2004:1-15.

[5]Clinical and Laboratory Standards Institute.Evaluation of the linearity of quantitative measurement procedures[S].EP6-A2,CLSI,2003:1-47.

[6]Clinical and Laboratory Standards Institute.How to define and determine reference intervals in the clinical laboratory[S].C28-A2,CLSI,2000:1-31.

[7]中華人民共和國衛生部醫政司.全國臨床檢驗操作規程 [M].第3版.南京:東南大學出版社,2006:59-62.

[8]馮仁豐.臨床檢驗質量管理技術基礎[M].第2版.上海:上海科學技術文獻出版社,2007:78.

[9]呂賽平,劉琴,鄒學森.應用EP6-A2方法驗證血糖試劑盒的線性范圍[J].實驗與檢驗醫學,2011,29(1):45-46.