自建檢測系統測定血清總蛋白測量不確定度的評估

呂賽平，劉琴，王春陽，金國兵，鄒學森

(江西省腫瘤醫院檢驗科，江西 南昌330029)

根據 《ISO15189醫學實驗室質量和能力認可準則》的要求，實驗室在適用且可能的情況下應該對臨床檢驗結果的測量不確定度進行評估[1]。嚴格評估臨床檢驗不確定度的方法是先對測量過程進行全面分析，識別每一個可能的不確定度來源后再加以評估，這種方法費時費力，難以在臨床檢驗工作中推廣使用[2]。在此背景下，各種測量不確定度的簡化評估方法逐步應用于臨床，本研究即采用歐洲診斷試劑廠家協會頒發的醫學實驗室測量不確定度評估方法對我科自建檢測系統測定血清總蛋白的測量不確定度進行評估，現報告如下。

1 資料與方法

1.1 試驗樣本 根據總蛋白的MDL采用混合血清法配制兩個濃度水平的試驗樣本，要求患者血清無溶血、無黃疸、無脂血，并且要求配制好的低值MDL樣本、高值MDL樣本總蛋白濃度分別在44~46g/L、79~81g/L區間之內。將兩個試驗樣本各分裝成25份，每份至少0.5ml，1份用于批內重復性試驗，其余24份-20℃冰凍保存，用于批間重復性試驗。

1.2 儀器與試劑 日本東芝公司生產的TBA-120FR全自動生化分析儀；上海執誠生物科技有限公司生產的總蛋白試劑盒 (雙縮脲法)，批號為ZCJUNM002；英國朗道實驗診斷有限公司生產的復合校準品及質控品，復合校準品批號為794UN，質控品批號為709UN、498NE。

1.3 測量不確定度的評定方法

1.3 .1批內重復性試驗 測定低值MDL樣本、高值MDL樣本的總蛋白濃度，每個樣本批內重復測定10次以上，分別計算兩個樣本的均值(MEAN)、標準差(SD)、CVw。

1.3 .2批間重復性試驗 測定低值MDL樣本、高值MDL樣本的總蛋白濃度，每天測定1次，連續1個月，分別計算兩個樣本的MEAN、SD、CVB。在此過程中，對自建檢測系統測定總蛋白進行室內質控，室內質控在控時可以直接測定試驗樣本，室內質控失控時需要查找失控原因并給予糾正，待失控解決后再測定試驗樣本。

1.3 .3方法偏倚 根據衛生部臨檢中心組織的室間質評確定自建檢測系統測定血清總蛋白在低值MDL、高值 MDL的 CVBias。 具體方法如下：(1)調取2011-2013年共6次室間質評結果，每次室間質評含5個濃度水平的室間質評品，從其中選取2個濃度水平的室間質評用于計算方法偏倚，選擇原則是室間質評靶值與低值MDL樣本、高值MDL樣本的總蛋白濃度最近。⑵低值MDL、高值MDL的CVBias均按如下方法計算：①計算每次室間質評結果的百分差值dn(%)，注意dn具有正負號。②計算所有百分差值的平均值dm(%)。③計算Sdr，

2 結果

2.1 批內重復性試驗結果 自建檢測系統測定血清總蛋白在低值MDL、高值MDL的CVw分別為0.86%、0.74%，見表 1。

表1 批內重復性試驗結果

2.2 批間重復性試驗結果 自建檢測系統測定血清總蛋白在低值MDL、高值MDL的CVB分別為1.37%、1.41%，見表 2。

表2 批間重復性試驗結果

2.3 方法偏倚試驗結果 自建檢測系統測定血清總蛋白在低值MDL、高值MDL的CVBias分別為2.31%、3.29%，見表 3、表 4。2.4 EU計算結果 自建檢測系統測定血清總蛋白在低值MDL、高值MDL的EU分別為5.64%、7.31%。

表3 低值MDL的方法偏倚

表4 高值MDL的方法偏倚

3 討論

測量不確定度是指表征合理地賦予被測量之值的分散性，與測量結果相聯系的參數[2]。測量不確定度可以用兩種方法表述，以標準差表述時為絕對不確定度，以變異系數表述時為相對不確定度，目前臨床上以后者更為常用[3]。根據不確定度的評定方法，測量不確定度可以分為A類不確定度、B類不確定度兩大類。A類不確定度采用統計學方法評定，主要包括批內重復性不確定度、批間重復性不確定度等。B類不確定度采用非統計學方法評定，主要包括方法偏倚不確定度，其他原因的不確定度如校準品不確定度、分析前因素不確定度等[4,5]。在合成不確定度評定過程中，批內重復性不確定度、批間重復性不確定度、方法偏倚不確定度較容易確定，校準品不確定度由生產廠商提供，但是分析前因素不確定度則難以確定，從而使得合成不確定度難以準確量化，因此目前臨床上評估測量不確定度時常常計算其擴展不確定度[6]。

在本研究中，由于我們未能成功向英國朗道實驗診斷有限公司索取校準品不確定度，因此我們只能根據批內重復性不確定度、批間重復性不確定度、方法偏倚不確定度等3個因子評估我科自建檢測系統測定血清總蛋白的擴展不確定度。在研究過程中，我們對試驗樣本濃度提出了一定的要求。MDL是不同于參考值的另外一些限值，這些值在疾病診斷過程中發揮排除及確診的作用，或者可以用于評估疾病的預后。由于MDL在臨床檢驗結果的解釋過程中的有著十分重要的地位，因此選擇MDL作為試驗樣本濃度的臨床意義是不言而喻的。

本研究結果顯示我科自建檢測系統測定血清總 蛋 白在 低 值 MDL 的 CVw、CVB、CVBias分 別 為0.86%、1.37%、2.31%，EU為5.64%； 在高值 MDL的 CVw、CVB、CVBias分 別 為 0.74% 、1.41% 、3.29% ，EU為7.31%。由于目前臨床上暫未對各個檢驗項目的EU作出明確要求，因此在解釋本研究結果時我們難以作出定論。盡管如此，在日常工作過程中，如果我們狠抓分析前質量控制，嚴格控制其他原因的不確定度，這樣就可以最大限度地縮小測量不確定度評估試驗得到的理論EU值與實際EU值的差距，此時本方法得到的試驗結果可以準確地反映臨床檢驗結果的分散性，從而有利于測量不確定度評估更好地應用于臨床。

[1]中國合格評定國家認可委員會．IS015189醫學實驗室質量和能力認可準則[S]．北京：中國合格評定國家認可委員會，2007．

[2]International Organization for Standardization．ISO guide to the expression of uncertainty in measurement[S].Geneva：ISO，1995．

[3]陳麗.羅氏電化學發光檢測血清腫瘤標志物測量不確定度的測定[J].實驗與檢驗醫學,2011,9(5):501-502.

[4]梅敏,李海珠,帥虎.血清谷丙轉氨酶、谷草轉氨酶測定分析中的測量不確定度評定[J].實驗與檢驗醫學,2010,28(4):371-372，394.

[5]Guerrasio R,Haberhauer-Troyer C,Steiger M,et al.Measurement uncertainty of isotopologue fractions in fluxomics determined via mass spectrometry[J].Anal Bioanal Chem,2013,405(15):5133-5146.

[6]謝華斌,盛楠,林永志,等醫學實驗室電化學發光分析系統測量不確定度評價[J].國際檢驗醫學雜志,2013,34(1):85-87.