匹多莫德對哮喘患兒血清中GATA-3與T-bet的影響

高雪，宮建，陳琪瑋，羅佳，曲華，任靈

哮喘是一種兒童時期最常見的慢性呼吸道疾病，是多種細胞和細胞組分共同參與的氣道慢性炎癥性疾病，最新全國兒童流行病學調查顯示，94.62%患兒以呼吸道感染為誘因[1]。而呼吸道感染又與Th1、Th2細胞亞群失衡有關，而匹多莫德能調節Th1、Th2細胞亞群失衡[2]。GATA蛋白家族屬于Ⅳ型鋅指蛋白，迄今為止，該家族共發現有6個成員(GATA-1～GATA-6)。GATA-3對Th1細胞的發育起抑制作用，可能通過抑制γ干擾素(interferon-γ，IFN-γ)、白細胞介素12(interleukin-12，IL-12)的信號傳導來抑制Th1細胞發育，GATA-3是Th2細胞發育過程中重要的轉錄因子，主要在Th2細胞中表達[3]。T-bet是T-box家族成員，在胚胎發育中起重要作用，Th0細胞產生的IFN-γ與其受體結合，激活信號轉導和轉錄活化因1(signal transduction and transcriptional activation factor-1，STAT-1)，進一步活化T-bet基因，而后者則激活IFN-γ基因，即T-bet的作用是通過激活IFN-γ基因而發揮其對Th1細胞發育的正調控作用的[4]。本文初步分析匹多莫德與GATA-3與T-bet濃度的關系，為進一步探討匹多莫德糾正Th1、Th2細胞亞群失衡提供理論依據。

1 資料與方法

1.1 臨床資料 2010-03/2013-02沈陽醫學院附屬第二醫院兒科門診首次診斷為哮喘患兒90例，按隨機數字表法分為觀察組和對照組各45例。兩組治療前臨床資料見表1。兩組患兒在年齡、性別、體質量指數(BMI)、血清GATA-3、T-bet濃度方面比較差異無統計學意義(P>0.05)，具有可比性。

表1 兩組治療前臨床資料比較±s，n=45)

1.2 診斷標準 參照兒童支氣管哮喘診斷與防治指南(2008年修訂)中兒童支氣管哮喘的診斷標準[5]。

1.3 納入標準 (1)符合兒童支氣管哮喘的診斷標準；(2)年齡3～6歲；(3)家長知情同意。

1.4 排除標準 (1)合并甲亢、糖尿病、急慢性胰腺炎以及嚴重肝腎疾病、心肺功能不全者、無服用影響糖代謝的藥物；(2)合并痛風、外科手術或嚴重創傷；(3)合并血液系統疾病；(4)治療前3個月使用免疫抑制藥者，如非甾體抗炎藥、類固醇和鴉片等藥物等；(5)合并急性感染、惡性腫瘤等疾病；(6)存在免疫缺陷等疾病。

1.5 治療方法 對照組患兒運動前或體力勞動前給予硫酸沙丁胺醇吸入氣霧劑(英國葛蘭素威康制藥有限公司)100 μg/次。觀察組在對照組基礎上連續口服匹多莫德口服液(意大利多帕藥業有限公司)400 mg/次，每日2次。兩組均治療3個月。治療期間每周電話隨訪1次，每2～4周門診隨訪1次。

1.6 檢測方法 連續口服藥物3個月后對所有檢測對象均抽取靜脈血3 mL，注入玻璃試管內，靜置10 min，以3 000 r/min離心10 min，分離血清-70 ℃保存待測。血清GATA-3與T-bet檢測采用ELISA法測定，試劑盒購自上海西塘生物科技公司，實驗步驟嚴格按照說明書進行。

1.7 療效判定標準 (1)顯效：治療中未復發或6個月內輕微發作不超過1次；(2)好轉：6個月內復發次數減少1/2以上，發病時病程縮短，癥狀減輕；(3)無效：治療前后復發次數、病程及癥狀均無明顯改變[6]。

1.8 觀察指標 兩組臨床療效及治療前后血清GATA-3、T-bet濃度。

2 結果

2.1 兩組臨床療效對比 見表2。

表2 兩組臨床療效對比[n(%)，n=45]

表2結果表明，觀察組顯效率高于對照組，差異有統計學意義(P<0.01)。兩組總有效率比較差異無統計學意義(P>0.05)。

2.2 兩組治療前和治療后血清GATA-3、T-bet濃度對比 觀察組、對照組連續治療3個月后GATA-3與治療前比較有所降低，差異有統計學意義(P<0.05)，治療3個月后觀察組較對照組GATA-3濃度低，差異有統計學意義(P<0.05)；觀察組、對照組連續治療3個月后T-bet與治療前和對照組比較升高，差異有統計學意義(P<0.05)，治療3個月后觀察組T-bet濃度高于對照組，差異有統計學意義(P<0.05)。見表3。血清中GATA-3濃度與T-bet濃度呈負性相關關系(r=-0.68,P=0.041<0.05)。

表3 兩組治療前后血清GATA-3、T-bet濃度對比±s，n=45，ng/L)

3 討論

匹多莫德化學名為(R)-3-[(S)-(5-氧-2-吡咯烷基)羥基]-噻唑烷基-4-甲酸，是一種全新的化學合成免疫調節劑，其結構類似二肽，是意大利多帕藥業有限公司產品，1993年上市，是一種新型免疫調節劑，由焦谷氨酸和硫代脯氨酸組成，它很好地克服了生物來源免疫調節劑的不良反應，既能促進非特異性免疫反應，又可以促進特異性免疫反應[7]。劉恩梅等[8]試驗證明，匹多莫德能調節T細胞亞群，下調IL-4等炎性因子，并可以通過激活抗原提呈細胞，促進Th1細胞功能，抑制哮喘患兒體內相對亢進的Th2細胞功能，使哮喘癥狀得到改善。而匹多莫德能調節各類免疫功能低下人群的細胞免疫功能，而發揮增強患者非特異免疫功能的作用[9]。

T-bet主要表達于T、B、NK細胞、巨噬細胞和樹突狀細胞，Th0細胞產生的IFN-γ與其受體結合，激活STAT-1，進一步活化T-bet基因，而后者則激活IFN-γ基因，即T-bet的作用是通過激活IFN-γ基因而發揮其對Th1細胞發育的正調控作用的[4]。GATA-3與T-bet作用相反，使Th0向Th2細胞分化，GATA-3優先激活IL-4基因，進一步調節IL-5和IL-13的表達。最新研究表明，GATA-3對于早期IL-4的產生與以后穩定Th2細胞的極化狀態都是必須的，既可以通過TCR信號傳導途徑也可以通過IL-4/STAT-6信號途徑來誘導GATA-3的表達，而后者是Th2細胞增殖的主要途徑[10]。本實驗數據表明，對照組與觀察組治療后血清中GATA-3明顯降低，而T-bet明顯升高；觀察組血清T-bet濃度高于對照組，GATA-3濃度低于對照組，且觀察組顯效率高于對照組，證實了匹多莫德能通過調節GATA-3與T-bet來控制哮喘的癥狀。Th1細胞是參與細胞免疫的重要正向調節細胞，分泌的細胞因子IFN-γ調節效應性T細胞的功能；T-bet在哮喘患者體內表達量降低導致Th2細胞分化[11]，其激發Th0細胞向Th1細胞分化的能力降低，GATA-3表達量增加。而通過給予外源性的匹多莫德后，T-bet表達量升高，GATA-3表達量降低，說明匹多莫德能很好的通過這一途徑來改善哮喘癥狀。匹多莫德改善哮喘癥狀并不是單純一條途徑，而是多條途徑共同作用的結果，這些途徑的相互關系如何值得去進一步探索。

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(收稿日期：2014-02-20)