龍牡桂枝湯改善注意缺陷多動障礙模型大鼠行為的實驗研究

何平，唐彥，楊若俊

注意缺陷多動障礙(attention deficit hyperactivity disorder,ADHD)簡稱兒童多動癥，主要表現為注意缺陷、多動、沖動，常伴學習困難，是兒童最常見的行為障礙之一，嚴重影響其身心健康及學業成績。云南省名老中醫劉以敏教授從醫近五十年，是全國第三、五批老中醫學術經驗繼承指導老師，對于多動癥的證治有著深厚的理論積淀和豐富的臨床經驗。他以仲景經方桂枝加龍骨牡蠣湯合甘麥大棗湯化裁，創制龍牡桂枝湯治療ADHD療效確切[1]，尤其能改善患兒的注意力。本實驗應用目前國際上使用最為廣泛的ADHD動物模型[2]——自發性高血壓大鼠(spontaneously hypertensive rat，SHR)，通過開場實驗和Làt迷宮，探索龍牡桂枝湯對ADHD動物模型自發活動和非選擇性注意力的影響，現報道如下。

1 材料與方法

1.1 實驗動物 雄性SHR大鼠48只，鼠齡5周，北京維通利華實驗動物技術有限公司提供。

1.2 實驗設備 (1)開場實驗箱：裝置及操作參考池霞等[3]的文獻自制，為60 cm×60 cm×40 cm木制箱體，用線條將箱子底部分為20 cm×20 cm的9個方格。(2)Làt迷宮[4]：在開場實驗箱中間放置一個30 cm×30 cm的透明有機玻璃箱，產生一個寬15 cm、長60 cm、高40 cm的通道，用一只4 W的冷光源，放置在木箱上方60 cm處。

1.3 藥物及制備 藥方由桂枝、白芍、生龍骨、生牡蠣、石菖蒲、炙遠志、浮小麥、小棗、炙甘草組成，由云南中醫學院第一附屬醫院門診部藥房提供，制成水煎劑后，按高、中劑量給藥，配成含生藥1.8 g/mL、0.9 g/mL的溶液并充分攪勻，用量分別為18 g/kg、9 g/kg貯于4 ℃冰箱備用；鹽酸哌甲酯控釋片(美國ALZA公司，批號：0DA3915)，每次灌胃時當場配制，使藥物濃度為0.375 g/L，用量為3.75 mg/kg。

1.4 分組及給藥 48只雄性SHR大鼠飼養于清潔級環境中，平衡1周后，按隨機數字表法分為生理鹽水對照組、鹽酸哌甲酯對照組、龍牡桂枝湯中劑量組和龍牡桂枝湯高劑量組4組，均按10 mL/kg灌胃。每日給藥1次，共14 d。用藥前后進行行為學檢測。

1.5 行為學檢測方法 (1)開場實驗：實驗時將大鼠輕輕放入中央格子，在光亮條件下，觀察5 min內大鼠的活動情況，以大鼠穿越的格子數和直立次數來衡量其自發活動水平。(2)Làt迷宮：實驗時將大鼠輕輕放入角落，通過給大鼠一個視覺空間注意目標，觀察10 min內大鼠的活動情況，記錄其斜搭在玻璃箱上的次數，作為對環境刺激的非選擇性注意指標。

2 結果

2.1 大鼠在開場實驗中的行為表現 見表1。

表1 給藥前穿越格子數和直立次數比較±s，n=12)

表1結果表明，給藥前各組大鼠在實驗箱中的穿越格子數和直立次數比較差異均無統計學意義(P>0.05)。給藥14 d后，各藥物組與生理鹽水組比較，SHR穿越格子數和直立次數明顯減少，差異有統計學意義(P<0.01)；鹽酸哌甲酯組大鼠穿越格子數和直立次數少于中藥中劑量組，差異有統計學意義(P<0.05)，而中藥高劑量組與鹽酸哌甲酯比較差異無統計學意義(P>0.05)。提示中藥和西藥均能明顯減少模型動物的自發活動，高劑量龍牡桂枝湯的作用與鹽酸哌甲酯相近。

2.2 大鼠在Làt迷宮中的行為表現 見表2。

表2 給藥前后各組大鼠斜搭次數比較±s，n=12)

表2結果表明，給藥前各組大鼠斜搭次數差異均無統計學意義(P>0.05)。給藥14 d后，各藥物組與生理鹽水組比較斜搭次數均增多，差異有統計學意義(P<0.01)；中藥高劑量組斜搭次數多于中劑量組及鹽酸哌甲酯組，差異有統計學意義(P<0.05)，中藥中劑量組與鹽酸哌甲酯組比較差異無統計學意義(P>0.05)。提示中藥和西藥對模型動物的非選擇性注意力水平均有明顯改善作用，而高劑量龍牡桂枝湯的作用優于鹽酸哌甲酯。

3 討論

ADHD的病因和發病機制至今尚未明確，其核心癥狀注意缺陷對學業和職業成就的影響較為深遠，多動只是一個從屬現象。中醫認為，本病與遺傳有較大關聯，腎為先天之本，藏精舍志，故腎藏精氣是基礎；心主神明，注意力不集中是心神失調；肝主疏泄，情緒不穩是氣機失于調暢。故本病與心、肝、腎三臟氣血升降失調，陰陽水火失濟有關，治療則以交通心腎，開竅寧神，潛陽入陰為法，據此劉以敏教授以仲景《金匱》之桂枝加龍骨牡蠣湯合甘麥大棗湯化裁，創制了龍牡桂枝湯，方中桂枝味辛可制肝，白芍味酸可柔肝，二藥相須為用，收斂浮越陽氣；重用龍骨、牡蠣潛陽安神；龍骨、牡蠣之重鎮可下交于腎，桂枝升發陰氣而上交于心；浮小麥養心除煩，小棗寧心安神；基于“怪病頑癥多有痰作祟”，龍骨、牡蠣降逆化痰；石菖蒲豁痰開竅；遠志清心化痰，均可化無形之痰，以“開心竅，通神明”，炙甘草調和諸藥，以上九藥合用，蘊涵了升降互補、剛柔相濟、相反相成的配伍思想，尤有“調和陰陽”之妙，用于心肝腎失調所致以注意缺陷為主的ADHD患兒，療效甚佳。

本研究所采用的ADHD動物模型幼年SHR能同時表現出注意缺陷、沖動、多動等ADHD的核心癥狀，神經病理、生化和藥理研究也支持其作為動物模型的合理性，是目前公認的研究ADHD最好的動物模型[5]，應用開場實驗和Làt迷宮實驗觀察動物自發活動和非選擇性注意力是目前應用最廣泛、最基本的檢測方法[6]。本研究首先通過動物行為學觀察評價了龍牡桂枝湯的藥效，結果顯示，在開場實驗中，龍牡桂枝湯高劑量組降低SHR自發活動水平與ADHD一線治療藥物鹽酸哌甲酯相近；在Làt迷宮實驗中，龍牡桂枝湯高劑量組提高SHR非選擇性注意力水平的作用優于鹽酸哌甲酯。本研究在動物實驗中驗證了龍牡桂枝湯的療效，證實了此方能減少多動，尤其對注意力的改善較為突出。研究結果為臨床用藥提供了實驗依據，其作用機制值得深入探索。

[1] 何平,朱瑛.劉以敏老師辨證治療兒童多動癥經驗初探[J].云南中醫中藥雜志,2006,27(1):5.

[2] 池霞,郭錫熔,陳榮華.注意缺陷障礙的動物模型[J].國外醫學：兒科學分冊,2004,31(6)：317-319.

[3] 池霞,郭錫熔,陳榮華,等.注意缺陷障礙動物模型的行為學特征檢測[J].中國臨床康復,2006,10(38):68-70.

[4] Ruocco LA,de Souza Silva MA,Topic B,et al.Intranasal application of dopamine reduces activity and improves attention in naples high excitability rats that feature the mesocortical variant of ADHD[J].Eur Neuropsychopharmacol,2009,19(10):693-701.

[5] Davids E,Zhang K,Tarazi FI,et al.Animal models of attention-deficit hyperactivity disorder[J].Brain Res Brain Res Rev,2003,42(1):1-21.

[6] 洪琴,池霞,陳榮華.注意缺陷障礙動物模型的行為學檢測[J].國際兒科學雜志,2007,34(1):9-11.

(收稿日期：2014-04-08)