放療聯合TK/GCV自殺基因系統對肺腺癌細胞凋亡活性的影響

康保國，陳 宏，楊 茜，曹學武，紀 華

(成都軍區昆明總醫院腫瘤科，昆明 650032)

肺癌是我國最常見的惡性腫瘤之一，近年來隨著環境污染的不斷加重，肺癌患者的數量逐年增加[1-2]。然而，常規的手術、放療、化療和生物治療雖然在一定程度上延長了患者的生存期，但大部分患者最終由于腫瘤復發、轉移而導致治療失敗，因此研究更加有效的肺癌治療方法，對于延長患者生存期、提高患者的生存質量具有重要意義。本研究利用前期研究構建的同步放大基因電路系統提高目的基因胸苷激酶(thymidine kinase,TK)基因的表達，通過放療聯合TK/丙氧鳥苷(ganciclovir，GCV)自殺基因系統共同作用，促進肺腺癌細胞凋亡，以探尋肺癌治療的新途徑。

1 材料與方法

1.1材料 抗性篩選試劑G418為美國MBI公司產品，lipofectamine2000轉染試劑盒購自美國Invitrogen公司，含10%胎牛血清的達爾伯克必需基本培養液為美國Gibco公司產品，凋亡檢測試劑盒轉移酶介導的三磷酸脫氧鳥苷-生物素刻痕末端標記(TUNEL)法購自瑞士Roche公司，人肺腺癌細胞株(A549細胞)為本科室儲備。放射源：X射線(成都軍區昆明總醫院腫瘤放療中心)。

1.2方法 將前期研究中構建的pfos-iNOS/TK治療載體轉染A549細胞。G418篩選陽性克隆。分別取轉染治療載體的細胞(轉染治療載體組)和未轉染的對照細胞(未轉染組)通過反轉錄-聚合酶鏈反應(reverse transcriptase/polymerase chain reaction,RT-PCR)檢測細胞中TK基因的表達。將陽性轉染細胞和未轉染的A549細胞按0.6×104/孔。分別接種于4個96孔板,每板接種20孔，轉染治療載體組和未轉染組各2個(并于1個未接種的孔內加入同種培養液作為空白孔)。……