甲基綠探針吸收光譜法測定安乃近

譚建紅，黃 惟，江 虹

(長江師范學(xué)院 化學(xué)化工學(xué)院，重慶 408100)

安乃近(ANG)是一種重要的解熱鎮(zhèn)痛類藥物，由氨基比林和亞硫酸鈉結(jié)合得到，在臨床上廣泛用于感冒、頭痛、發(fā)熱、肌肉關(guān)節(jié)痛、牙痛、痛經(jīng)、風(fēng)濕及類風(fēng)濕關(guān)節(jié)痛等的治療，其解熱鎮(zhèn)痛效果快而強(qiáng)，使用方便，價(jià)格低廉，優(yōu)于其他解熱鎮(zhèn)痛藥。目前，測定安乃近的方法主要有滴定法[1]、高效液相色譜法[2-5]、電化學(xué)分析法[6-8]、紫外分光光度法[9-10]、紅外光譜法[11]、熒光分析法[12]、化學(xué)發(fā)光法[13-15]等。這些方法使用儀器或較貴不易普及或操作麻煩費(fèi)時(shí)、靈敏度較低等，不適用急檢需要。本實(shí)驗(yàn)在堿性條件下，以甲基綠(MEG)作探針，建立了檢測安乃近的吸收光譜法，迄今未見文獻(xiàn)報(bào)道。實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)，安乃近與甲基綠反應(yīng)后的生成物能使溶液顏色產(chǎn)生褪色現(xiàn)象，在可見光區(qū)出現(xiàn)3個(gè)明顯的褪色峰，最大和次大褪色波長分別位于670 nm和424 nm，表觀摩爾吸光系數(shù)分別為1.82×104L/(mol·cm)和1.50×104L/(mol·cm)，在此兩波長處，安乃近在一定濃度范圍內(nèi)與吸光度的絕對值呈良好的線性關(guān)系，服從比爾定律，能用于安乃近的定量分析。該法用于實(shí)際樣品測定，結(jié)果滿意。

1 實(shí)驗(yàn)

1.1 儀器與試劑

儀器：U-3010型紫外-可見分光光度計(jì)(日本，日立公司)；S20K型pH計(jì)。

試劑：安乃近(重慶藥檢所提供)標(biāo)準(zhǔn)溶液(1.0×10-4mol/L)，冰箱中4 ℃保存。甲基綠(MEG，中國醫(yī)藥(集團(tuán))上海化學(xué)試劑公司)溶液(1.0×10-3mol/L)。三羥甲基氨基甲烷(Tris)-鹽酸緩沖溶液為0.1 mol/L鹽酸溶液和0.2 mol/L Tris混合而成，用酸度計(jì)測定配成pH 3.0～9.8的系列緩沖溶液。試劑均為分析純，實(shí)驗(yàn)用水為超純水。

1.2 實(shí)驗(yàn)方法

于10 mL具塞比色管中，依次加入適量的1.0×10-4mol/L安乃近標(biāo)準(zhǔn)溶液，2.0 mL、pH為9.60的Tris-HCl 緩沖溶液和 3.0 mL、1.0×10-3mol/L的甲基綠溶液，用水稀釋至刻度，搖勻后室溫下放置20 min，以試劑空白作參比，用1 cm 比色皿在670 nm和424 nm波長處測定溶液的吸光度A。

2 結(jié)果與討論

2.1 吸收光譜

測得的溶液的吸光度曲線見圖1。

圖1 安乃近溶液吸收光譜

從圖1可見，安乃近在可見光區(qū)幾乎無吸收，甲基綠在可見光區(qū)產(chǎn)生較強(qiáng)吸收，其最大吸收波長λmax= 630 nm，A=0.668；在堿性條件下，安乃近與甲基綠反應(yīng)生成具有3個(gè)負(fù)吸收峰的絡(luò)合物，其負(fù)吸收波長分別位于 424 nm、542 nm和670 nm，從曲線3—7可以看出，最大負(fù)吸收波長為670 nm(紅移40 nm)和次大負(fù)吸收波長為424 nm(紫移206 nm) 處，安乃近在一定濃度范圍內(nèi)，其吸光度的絕對值與濃度呈正比關(guān)系，服從比爾定律；而在542 nm處，安乃近與吸光度之間無線性關(guān)系。由此可知，在670 nm 和424 nm 處可用于安乃近的定量分析。

2.2 溶液酸度

室溫下，考察了BR、Tris-HCl緩沖溶液對體系絡(luò)合反應(yīng)的影響。結(jié)果表明：在pH為7.2～9.8的Tris-HCl 條件下，體系有較大的靈敏度，實(shí)驗(yàn)用pH為9.60 的Tris-HCl 緩沖溶液，用量以2.0 mL 為宜。

2.3 染料用量

室溫下，考察了不同用量的1.0×10-3mol/L MEG 溶液對體系靈敏度的影響.結(jié)果表明,MEG的適宜用量是2.7～3.2 mL，實(shí)驗(yàn)用 3.0 mL、1.0×10-3mol/L的MEG 溶液。

2.4 試劑加入順序

室溫下，考察了ANG、MEG及pH為9.60 的Tris-HCl 溶液在不同加入順序時(shí)對體系吸光強(qiáng)度的影響。結(jié)果表明：按ANG、Tris-HCl、MEG的加入順序配制溶液，生成的絡(luò)合物在424 nm和670 nm處其吸光度的絕對值較大，實(shí)驗(yàn)選用該加入順序。

2.5 反應(yīng)時(shí)間

考察了在670 nm處不同時(shí)間對體系靈敏度的影響，結(jié)果表明：20 min后吸光度值趨于平穩(wěn)，穩(wěn)定時(shí)間可達(dá)1 h以上，實(shí)驗(yàn)選在室溫下20 min后測定。

2.6 干擾實(shí)驗(yàn)

室溫下，670 nm 處，考察了藥物制劑中常見輔料物質(zhì)對測定安乃近含量的干擾情況。結(jié)果表明，100倍的葡萄糖、蔗糖、麥芽糖、乳糖、NaCl、KCl及60倍的L-色氨酸、L-亮氨酸、L-組氨酸、甘氨酸、谷氨酸，20倍的淀粉、利福平、麥迪霉素、紅霉素、羅紅霉素等對安乃近的測定均無干擾。

2.7 標(biāo)準(zhǔn)曲線

按實(shí)驗(yàn)方法配制系列標(biāo)準(zhǔn)溶液(濃度為c)并掃描吸收光譜，作A-c標(biāo)準(zhǔn)曲線。得到的一元線性回歸方程、相關(guān)系數(shù)、線性范圍及靈敏度等見表1。

表1 標(biāo)準(zhǔn)曲線相關(guān)參數(shù)

2.8 樣品測定

取安乃近片3粒，用水溶解后過濾，轉(zhuǎn)入1 000 mL容量瓶中，稀釋至刻度，搖勻。取安乃近注射液和安乃近滴鼻液各1支，分別將其內(nèi)容物置于500 mL 容量瓶中，用水稀至刻度，搖勻。取前述稀釋液各1.0 mL，分別置于100 mL容量瓶中，用水稀釋至刻度，搖勻，安乃近片待測液記為1#、安乃近注射待測液記為2#、安乃近滴鼻待測液記為3#。取各待測液1.0 mL，分別在670 nm波長下，按實(shí)驗(yàn)方法各平行測定6次，同時(shí)作加標(biāo)回收實(shí)驗(yàn)，結(jié)果見表2。

表2 樣品濃度分析及回收結(jié)果

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