復方首烏蒺藜湯對蘑菇酪氨酸酶激活作用的研究

宋業強白 鵬

·中醫中藥·

復方首烏蒺藜湯對蘑菇酪氨酸酶激活作用的研究

宋業強1白 鵬2

目的: 確定復方首烏蒺藜湯水提取物對蘑菇酪氨酸酶活性的影響。方法: 采用蘑菇酪氨酸酶多巴速率氧化法測定蘑菇酪氨酸酶活性。反應物2 m L，37℃孵育10 min后，加0.15%DL－多巴1mL，再孵育2min，用分光光度計于475 nm處測定吸光度A值(A475)。結果: 觀察組復方首烏蒺藜湯水提取物對蘑菇酪氨酸酶的激活率為78.01%，對照組白靈片的激活率為10.49%(P＜0.01)。結論: 復方首烏蒺藜湯對蘑菇酪氨酸酶有激活作用，且優于白靈片。

復方首烏蒺藜湯； 白癜風； 蘑菇酪氨酸酶

白癜風是一種以皮膚黏膜色素脫失、表皮黑素細胞減少為特征的色素障礙性皮膚病。筆者根據多年臨床經驗自擬復方首烏蒺藜湯治療白癜風，臨床療效較好。現通過復方首烏蒺藜湯對蘑菇酪氨酸酶活性影響的研究，揭示其治療白癜風的作用機制。

1 材料與方法

1.1 試劑與儀器 DL－多巴(Sigma產品)；蘑菇酪氨酸酶(日本和光純藥工業株式會社產品)；8－甲氧基補骨脂素(大連醫藥科研所提供)；其它試劑均為市售分析純。7200型分光光度計由上海尤尼克儀器有限公司制造。

1.2 實驗藥物 觀察組(A):復方首烏蒺藜湯:何首烏、白蒺藜、當歸、女貞子、旱蓮草、生地、浮萍、蒼耳子、威靈仙、防風、沙苑子、甘草。上述藥物由山東中醫藥大學附屬醫院藥學部提供，符合《中華人民共和國藥典》規定。對照組(B):白靈片:當歸、三七、紅花、牡丹皮、桃仁、防風、蒼術、白芷、馬齒莧、赤芍、黃芪。由廣東省佛山馮了性藥業有限公司生產(國藥準字Z44022380)。

1.3 中藥提取方法 A組:稱取復方首烏蒺藜湯中藥飲片，稍加粉碎，加水適量，加熱回流提取30 min，濾過，殘渣再加水適量，加熱回流30 min，濾過。合并兩次提取液，濃縮至0.1 g/mL，用0.45μm濾膜濾過，濾液置冰箱貯存備用。B組:白靈片(0.33 g/片)粉碎，加開水適量浸泡1～2 h，攪勻，藥物濃度為0.1 g/ mL，用0.45μm濾膜濾過，濾液置冰箱貯存備用。

1.4 實驗方法

1.4.1 酪氨酸酶活性測定方法 采用蘑菇酪氨酸酶多巴速率氧化法測定蘑菇酪氨酸酶活性。反應物2 mL，37℃孵育10min后，加0.15%DL－多巴1 mL，再孵育2 min，用分光光度計于475 nm處測定吸光度A值(A475)。

觀察組和對照組分別分為a、b、c、d共4組。其中a組為:pH 6.8磷酸緩沖液1.9 mL，蘑菇酪氨酸酶0.1 mL(80 u)。b組為:pH 6.8磷酸緩沖液2 mL。c組為:pH 6.8磷酸緩沖液1.8 mL，藥物0.1 mL(濃度0.1 g/mL)，蘑菇酪氨酸酶0.1mL(80 u)。d組為:pH 6.8磷酸緩沖液1.9 mL，藥物0.1 mL(濃度0.1 g/ mL)。

pH 6.8磷酸緩沖液根據2005版《中華人民共和國藥典》配制。

蘑菇酪氨酸酶激活率按下列公式計算:激活率(%)A＝[(c－d)－(a－b)]/(a－b)×100，其中，Aa＝A475－A藥＋A酶；Ab＝A475－A藥－A酶；Ac＝A475＋A藥＋A酶；Ad＝A475＋A藥－A酶。

兩組實驗均重復3次，將3次結果輸入office2003 excel軟件作數據處理，取其平均值。

1.4.2 統計學方法 上述每一實驗均重復3次。所測實驗數據以ˉx±s表示，采用t檢驗，使用office2003 excel和PEMS 3.1醫學統計軟件作數據處理及分析。

2 結果

見表1。

表1 兩組藥物對蘑菇酪氨酸酶激活率的比較

3 討論

白癜風為常見的色素障礙性皮膚病，中醫又稱之為“白癜”、“白駁風”等?！吨T病源候論》云:“白癜者，面及頸項身體肉色變白，與肉色不同，亦不癢痛，謂之白癜。此亦是風邪搏于皮膚，血氣不和所生也?！焙笫泪t家多采用養血、活血、祛風等治法。

色素障礙性皮膚病如白癜風、黃褐斑等的發病與酪氨酸酶關系密切。酪氨酸酶是一種多酚氧化酶，是皮膚黑素生物合成的關鍵酶、限速酶，它不僅決定黑素合成的速率，還是黑素細胞分化成熟的特征性標志。1，2

近年來，關于中藥提取物對酪氨酸酶活性影響的研究逐漸增多。劉之力等3研究了6種中藥復方乙醇提取物對酪氨酸酶激活作用，其中I方養血祛風，II方滋陰熄風，III方行氣活血祛風，IV方補陽祛風，V方清熱柔肝熄風，VI方為綜合組。結果顯示，I，II， III，VI方顯著激活酪氨酸酶活性，其中II，VI方作用較強。李洪武等4研究了復方白駁片、白癜風丸、柴胡疏肝湯、通竅活血湯、白蝕丸5個復方的提取物對蘑菇酪氨酸酶活性的影響，結果具有活血祛風的白癜風丸對酪氨酸酶活性的激活作用最強，柴胡疏肝湯、白駁片次之，白蝕丸較弱。復方首烏蒺藜湯具有養血祛風的作用，白靈片具有益氣活血祛風的作用。本研究顯示二者均具有激活酪氨酸酶活性的作用，但復方首烏蒺藜湯優于白靈片(P＜0.01)，這與上述學者的研究結果既有相同之處，又有一定差異。之所以會出現這種差異，可能與復方中藥成分復雜、中藥劑型的不同、實驗方法的不統一等多種因素有關。

總之，本研究初步揭示了復方首烏蒺藜湯治療白癜風的作用機制可能與其激活酪氨酸酶活性有關，而其對人體免疫功能調節等方面的作用需要進一步研究。

1 Kubo I，Yokokawa Y，Kinst－Hori I.T yrosinase inhibit ors from Bolivian medicinal plants.JNat Prod，1995，58(5):739.

2Smith B，Selby P，Southgate J，et al.Detection of melanoma cells in peripheral blood by m eans of reverse transcriptase and polymerase chain react ion.Lancet，1991，338(8 777):1227.

3劉之力，李雅莉，劉俐，等.六種中藥復方乙醇提取物對酪氨酸酶激活作用及動物致色素作用的研究.中國皮膚性病學雜志，2005，19(10):588－591.

4李洪武，朱文元.治療白癜風復方中藥體外對蘑菇酪氨酸酶活性的作用.臨床皮膚科雜志，2000，29(3):133－135.

(收稿:2012－11－16)

The effect of Com pound Radix Shouwu Jili Soup on the activity of mushroom tyrosinase

SONG Ye-qiang，BAIPeng.Department ofDermatology，Affiliated Hospital ofShandong University ofTraditional ChineseMedicine，Jinan，250033

Objective:To determine the effects of water extract of compound radix Shouwu Jili Soup on mushroom tyrosinase activity.Methods:Mushroom tyrosinase activity wasmeasured bymushroom tyrosinase oxidationmethod.Reagents，2 mL，37℃were incubated for 10 minutes，and then，0.15%DL－dopa 1mL was added，and was incubated for another 2minutes.absorbent valueswasmeasured with a spectrophotometer at 475nm(A475).Results:The activation rate was 78.01%in the experimental group and was 10.49% in the control group，with a significant difference(P＜0.01).Conclusion:Compound Radix Shouwu Jili Soup can activatemushroom tyrosinase and the activation was superior to Bai Ling tablet(P＜0.01).

Compound Radix Shouwu Jili Soup；vitiligo；mushroom tyrosinase

1山東中醫藥大學附屬醫院皮膚科，濟南，250011

2山東省職業病醫院皮膚科，濟南，250062