冬奇子口服液對(duì)小鼠肝損傷保護(hù)作用的研究

黃啟超，馬青

冬奇子口服液對(duì)小鼠肝損傷保護(hù)作用的研究

黃啟超，馬青

目的通過(guò)建立四氯化碳（CCl4）致小鼠急性肝損傷模型，觀察冬奇子口服液對(duì)肝損傷的的保護(hù)作用，并初步探討冬奇子口服液的保肝機(jī)制。方法將50只ICR小鼠隨機(jī)分為5組：對(duì)照組，CCl4致肝損傷模型組，低、中、高劑量的冬奇子給藥組（1、2.5、5g/kg）。各組連續(xù)給藥7 d，末次給藥1h后，正常組腹腔注射調(diào)和油，其余各組腹腔注射0.1%CCl4調(diào)和油溶液（10 ml/kg），18 h后測(cè)定血清丙氨基轉(zhuǎn)移酶（ALT）和天門(mén)冬氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶（AST），肝組織丙二醛（MDA）和超氧化物歧化酶（SOD）的活性。結(jié)果低、中、高劑量的冬奇子給藥組與肝損傷模型組比較，血清ALT分別降低16.27%（＜0.05）、64.96%（＜0.01）和113.77%（＜0.01）；血清AST分別降低33.79%（＜0.05）、61.20%（＜0.01）和87.31%（＜0.01）；肝組織MDA含量分別降低28.27%（＜0.05）、65.74%（＜0.01）和108.89%（＜0.01）；肝組織SOD活性分別增加13.82%（＞0.05）、27.31%（＜0.05）和40.73%（＜0.05）。結(jié)論冬奇子口服液對(duì)肝損傷具有保護(hù)作用，其機(jī)制可能與減少肝組織脂質(zhì)過(guò)氧反應(yīng)，增強(qiáng)SOD的抗自由基的能力有關(guān)。

丙氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶；天門(mén)冬氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶；肝損傷；丙二醛；超氧化物歧化酶；冬奇子口服液

冬奇子口服液由枸杞、五味子及麥冬等藥材組成，主要含有多糖、皂苷及黃酮等有效成分，這些物質(zhì)具有抗衰老[1]，提高機(jī)體免疫力[2]等功效。據(jù)研究報(bào)道，3種單藥單獨(dú)均有抗氧化[3]、抗腫瘤[4]及抗疲勞[5]等功效。但對(duì)肝損傷保護(hù)作用的報(bào)道相對(duì)不多。本研究采用腹腔注射四氯化碳（CCl4）致小鼠肝損傷模型，觀察冬奇子口服液對(duì)肝損傷的保護(hù)作用，為今后臨床應(yīng)用冬奇子口服液預(yù)防肝損傷提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)。現(xiàn)將結(jié)果報(bào)道如下。

1 資料與方法

1.1 藥物及試劑冬奇子口服液制備[6]：稱取枸杞250g、五味子300g、麥冬300g，共3份按藥材與水的質(zhì)量比1∶3浸泡于大燒杯中24 h。提取：中藥材（枸杞子、五味子、麥冬），超聲波提取25 min 3次，濃縮至1∶1后過(guò)濾、濾液冷藏備用。CCl4為南京試劑廠產(chǎn)品，用調(diào)和油配成0.1%溶液。血清丙氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶（ALT）、肝臟丙二醛（MDA）、肝臟超氧化物歧化酶（SOD）試劑盒均為南京建成生物工程研究所。

1.2 動(dòng)物及分組ICR小鼠（寧波大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供），體質(zhì)量（21.3±1.9）g，雄雌兼用，自由飲水、進(jìn)食，將動(dòng)物編號(hào)，按隨機(jī)數(shù)字表法[7]分成正常對(duì)照組、CCl4損傷組、冬奇子給藥組1（DOL1組）、冬奇子給藥組2（DOL2組）、冬奇子給藥組3（DOL3組），每組10只。正常對(duì)照組（CON組）：0.9%氯化鈉注射液25m1· kg－1·d－1灌胃連續(xù)7 d后，腹腔注射調(diào)和油；CCl4損傷模型組（CCl4組）：0.9%氯化鈉注射液25m1·kg－1·d－1灌胃連續(xù)7 d，末次給藥后1 h，腹腔注射0.1%CCl4調(diào)和油溶液l0 ml·kg－1·d－1；DOL1組：給冬奇子口服液1 g ·kg－1·d－1灌胃連續(xù)7 d，末次給藥后1 h，腹腔注射0.1%CCl4調(diào)和油溶液l0 ml·kg－1·d－1；DOL2組：給冬奇子口服液2.5 g·kg－1·d－1灌胃連續(xù)7 d，末次給藥后1h，腹腔注射0.1%CCl4調(diào)和油溶液l0ml·kg－1·d－1；DOL3組：給冬奇子口服液5 g·kg－1·d－1灌胃連續(xù)7 d，末次給藥后1 h，腹腔注射0.1%CCl4調(diào)和油溶液l0ml·kg－1·d－1；小鼠在腹腔注射CCl4后禁食過(guò)夜18 h后斷頭處死動(dòng)物，立刻采血、取肝。測(cè)血清ALT和天門(mén)冬氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶（AST）、肝組織MDA和SOD。

1.3 指標(biāo)檢測(cè)血清ALT和AST含量測(cè)定，肝勻漿SOD活性，MDA含量的測(cè)定，均按照試劑盒說(shuō)明書(shū)操作，采用全自動(dòng)生化分析器檢測(cè)。

1.4 統(tǒng)計(jì)方法采用SPSS13.0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行分析，計(jì)量資料采用均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差表示，采用檢驗(yàn)。＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 冬奇子口服液對(duì)CCl4肝損傷血清ALT和AST的影響ALT的改變：CCl4損傷組比對(duì)照組高68.32%（=3.17，＜0.01）；DOL1、DOL2和DOL3組分別與CCl4損傷組比較，分別降低16.27%（=2.23，＜0.05）、64.96%（=3.12，＜0.01）和113.77%（=3.56，＜0.01）。AST的改變：CCl4損傷組比對(duì)照組高51.13%（=3.21，＜0.01）；DOL1、DOL2和DOL3組分別與CCl4損傷組比較，分別降低33.79%（=2.45，＜0.05）、61.20%（=3.09，＜0.01）和87.31%（=3.25，＜0.01）。見(jiàn)表1。

2.2 冬奇子口服液對(duì)CCl4肝損傷肝組織MDA、SOD的影響MDA參數(shù)改變：CCl4損傷組與對(duì)照組比較，高59.42%（=3.19，＜0.01）；DOL1、DOL2和DOL3組分別與CCl4損傷組比較，分別降低28.27%（=2.38，＜0.05）、65.74%（=3.54，＜0.01）和108.89%（=3.87，＜0.01）。SOD參數(shù)改變：CCl4損傷模型組與對(duì)照組比較，降低106.45%（=3.74，＜0.01）。DOL1、DOL2和DOL3組分別與CCl4損傷模型組比較，分別增加13.82%（=0.96，＞ 0.05）、27.31%（=2.22，＜0.05）和40.73%（=2.44，＜0.05）。見(jiàn)表1。

表1 冬奇子口服液對(duì)CCl4肝損傷小鼠血清ALT和AST含量的影晌

3 討論

本實(shí)驗(yàn)選用經(jīng)典的CCl4化學(xué)性肝損傷動(dòng)物模型來(lái)觀察冬奇子口服液的保肝作用。目前認(rèn)為，CCl4引起肝細(xì)胞中毒與自由基加速脂質(zhì)過(guò)氧化有關(guān)[8]，其過(guò)程如下：肝內(nèi)主要被微粒體細(xì)胞色素P-450氧化酶代謝，生成兩個(gè)活性自由基(CCl3·和Cl·)及一系列氧活性物與蛋白質(zhì)共價(jià)結(jié)合導(dǎo)致蛋白合成障礙，脂質(zhì)分解代謝紊亂，引起肝細(xì)胞內(nèi)三酰甘油蓄積。CCl3·能迅速與氧結(jié)合轉(zhuǎn)化為過(guò)氧化三氯甲烷自由基(CCl3O2·)導(dǎo)致脂質(zhì)過(guò)氧化，引起細(xì)胞膜的變性傷害，使酶滲漏及細(xì)胞病變，壞死。CCl4誘發(fā)急性肝損傷病理學(xué)表現(xiàn)為肝細(xì)胞彌漫性變性、壞死、炎性細(xì)胞浸潤(rùn)，與臨床病毒性肝炎病理變化極為相似。另一種觀點(diǎn)認(rèn)為[9]，白介素-6（IL-6）、IL-8可能參與肝臟炎性損傷過(guò)程。乙型肝炎病毒感染能誘導(dǎo)肝細(xì)胞合成大量腫瘤壞死因子（TNF-），而TNF-又可誘導(dǎo)肝細(xì)胞合成IL-6、IL-8，IL-6、IL-8可能又促進(jìn)肝內(nèi)炎癥反應(yīng)，介導(dǎo)肝細(xì)胞損傷，誘導(dǎo)各類細(xì)胞分化增殖，從而使慢性肝炎持續(xù)存在，導(dǎo)致纖維化形成。

本文結(jié)果顯示：CCl4損傷組比對(duì)照組高68.32%，表現(xiàn)出高血清ALT，肝細(xì)胞嚴(yán)重受損；DOL1、DOL2和DOL3分別與CCl4損傷組比較，分別降低16.27%、64.96%和113.77%，說(shuō)明冬奇子口服液可以降低ALT，并且存在劑量依賴性關(guān)系。（2）血清天AST的改變：CCl4損傷組比對(duì)照組高51.13%，出現(xiàn)高血清AST，表明肝細(xì)胞受損；DOL1、DOL2和DOL3組分別與CCl4損傷組比較，分別降低33.79%、61.20%和

87.31%，表明冬奇子口服液可以降低丙氨基轉(zhuǎn)移酶，且也存在劑量依賴性關(guān)系。（3）MDA參數(shù)改變：CCl4損傷組與對(duì)照組比較，高59.42%，表明肝組織脂質(zhì)過(guò)氧反應(yīng)增加，自由基增多，肝細(xì)胞的氧化作用顯著增強(qiáng)；DOL1、DOL2和DOL3分別與CCl4損傷組比較，分別降低28.27%、65.74%和108.89%，表明冬奇子口服液具有減少肝組織脂質(zhì)過(guò)氧反應(yīng)，增強(qiáng)抗自由基的能力，并存在劑量依存關(guān)系。（4）肝組織超SOD參數(shù)改變：CCl4損傷模型組與對(duì)照組比較，降低106.45%，表明SOD清除自由基能力降低，肝組織抗氧化作用顯著減弱。DOL1、DOL2和DOL3組分別與CCl4損傷模型組比較，分別增加13.82%、27.31%和40.73%，表明冬奇子口服液可以增強(qiáng)肝臟組織SOD含量和抗自由基的能力，也存在劑量依存關(guān)系。

綜上，本研究提示冬奇子口服液能防止CCl4引起的小鼠血清ALT的升高。其可能機(jī)制在于減少M(fèi)DA肝組織脂質(zhì)過(guò)氧反應(yīng)，增強(qiáng)SOD抗自由基的能力。另外，冬奇子口服液含有的枸杞多糖具有降低細(xì)胞因子（IL-6、IL8）對(duì)肝損傷的作用[9]。

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10.3969/j.issn.1671-0800.2014.04.039

R575.2；R285.5

A

1671-0800(2014)04-0438-03

315211寧波，寧波大學(xué)陽(yáng)明學(xué)院（黃啟超）；寧波大學(xué)醫(yī)學(xué)院（馬青）

馬青，Email：maqing@nbu.edu.cn