脈脂康膠囊制備工藝研究

周 麗，張留記，屠萬倩，孫丹丹

(1.河南中醫學院2011 級碩士研究生，河南 鄭州450008;2.河南省中醫藥研究院，河南鄭州450004)

近年來，隨著人民生活水平的提高，高脂血癥的發病率逐年上升，且有患者年輕化的趨勢［1］。脈脂康膠囊為河南省中醫藥研究院附屬醫院制劑室研制品種，由人參、川芎、當歸、山楂、制何首烏等5 味中藥組成。全方標本兼治，通補結合，具有益氣補血［2］、活血化瘀［3-4］、健脾化積［5］、降脂通便［6-7］等功能，適用于高脂血癥人群，對動脈粥樣硬化、冠心病等心血管疾病具有較好的預防保健作用。本研究根據文獻資料所報道的各藥味有效成分的特性及相關藥理作用，設計實驗，以期優選出脈脂康膠囊的最佳提取工藝。

1 藥品、試劑與儀器

人參皂苷Rb1對照品(批號110704 -200318)、人參皂苷Re 對照品(批號110754 -200421，含量測定用對照品)、人參皂苷Rg1對照品(批號110703-200323，含量測定用對照品)、2，3，5，4＇-四羥基二苯乙烯-2-O-β-D 葡萄糖苷對照品(批號110844 -200404，含量測定用對照品)，均購自中國藥品生物制品檢驗所。甲醇、乙腈均為色譜純，均購自德國Merck 公司;其他試劑均為分析純;蒸餾水購自鄭州市大成蒸餾水廠;重蒸水為自制。Waters 2695 高效液相色譜儀(2996 紫外檢測器，Empower Ⅱ色譜工作站軟件)，美國Waters 公司產品;恒溫水浴鍋，北京中興偉業儀器有限公司產品;GT -350W 超聲波提取器，濟寧科技超聲電子有限公司產品;日本島津LIBROR-160DPT 萬分之一天平，產地日本;Mettler Toledo 十萬分之一天平，產地瑞士;DZTW 調溫電熱套，北京永光明醫療儀器廠產品;揮發油提取器，上海玻璃儀器廠產品;DL-1 萬用電爐，北京中興偉業儀器有限公司產品;101 -2 電熱恒溫鼓風干燥箱，上海市實驗儀器廠產品。

2 方法與結果

2.1 山楂、人參乙醇提取工藝的考察

2.1.1 乙醇提取工藝條件正交試驗法優選

在乙醇提取工藝研究中，選取乙醇濃度、乙醇用量、提取時間、提取次數4 個主要影響因素，每個因素選擇3 個水平，按照L9(34)表進行正交試驗。見表1。以人參皂苷Rb1、Rg1和Re 為測定指標優選最佳提取工藝。

表1 乙醇提取工藝因素水平表

按處方比例稱取山楂和人參，采用L9(34)正交試驗表，按各試驗號參數進行實驗，提取液過濾，濾液濃縮至無醇味，轉移至100 mL 量瓶中，加水稀釋至刻度，即得1 ～9 號乙醇提取液。

2.1.2 乙醇提取液中人參皂苷Rb1、Rg1和Re 的含量測定

色譜條件:色譜柱為美國熱電Hypersil C18ODS填料柱(4.6 mm×250 mm，5 μm);流動相為乙腈—水溶液系統，梯度洗脫，梯度洗脫程序見表2;體積流量1.0 mL/min;檢測波長203 nm;柱溫40 ℃;理論塔板數按人參皂苷Rg1峰計算應不低于3 000。對照品和供試品色譜圖見圖1、圖2。

表2 梯度洗脫時間程序

圖1 人參皂苷(Rg1、Re、Rb1)對照品HPLC 圖

圖2 人參乙醇提取供試品HPLC 圖

對照品溶液的制備:精密稱取人參皂苷Rb1、Rg1、Re 對照品2.9，1.39，1.10 mg，置5 mL 量瓶中，加甲醇溶解并定容至刻度，搖勻，制成每毫升含人參皂苷Rb10.580 mg、Rg10.278 mg、Re 0.220 mg 的混合溶液，即得。

標準曲線:精密吸取對照品溶液2，5，10，15，20 μL，分別注入液相色譜儀，按上述色譜條件測定人參皂苷Rb1、Rg1、Re 的吸收峰峰面積積分值，以進樣量為橫坐標(X)，以峰面積積分值為縱坐標(Y)，進行回歸處理，結果見下表3。

表3 人參皂苷Rb1、Rg1、Re 線性范圍考察

供試品溶液的制備及測定:分別精密吸取2.1.1項下1 ～9 號乙醇提取液各20 mL;用乙酸乙酯振搖提取4 次，每次20 mL;棄去乙酸乙酯液，水層用水飽和正丁醇振搖提取4 次，每次20 mL;合并正丁醇液;用體積分數40%的氨試液充分洗滌2 次，每次30 mL;棄去氨液;正丁醇液蒸干;殘渣加甲醇溶解，移至5 mL 量瓶中;加甲醇稀釋至刻度，搖勻，用0.45 μm 的微孔濾膜濾過，即得。精密吸取各供試品溶液10 μL 注入液相色譜儀，按照上述色譜條件進行測定，并計算提取液中人參皂苷Rb1、Rg1和Re的總含量，結果見表4。

表4 乙醇提取正交試驗設計和人參總皂苷含量測定結果

根據上表可知，因素B 的極差R 值最小，以B列為誤差列，對正交試驗結果進行方差分析，結果見表5。

表5 乙醇提取正交試驗方差分析表

結果:由試驗結果的直觀分析和方差分析可知，在乙醇提取過程中對人參皂苷總含量影響因素的大小順序為A ＞C ＞D ＞B，因素A、C 對試驗結果均有顯著性影響。根據正交試驗結果，選取顯著因素A、C的最佳水平，得到最佳工藝水平A2C1。次要因素B、D 均取第一水平，故山楂、人參乙醇提取的最佳條件為A2B1C1D1，即:山楂和人參用5 倍量750 g/L 乙醇，加熱回流0.5 h 即可。

2.2 制何首烏等藥材水提工藝的優選

以煎液中2，3，5，4＇-四羥基二苯乙烯-2-O-β-D葡萄糖苷(以下簡稱二苯乙烯苷)含量為控制指標，采用L9(34)正交試驗，對煎煮工藝的煎煮次數、煎煮時間、加水量和浸泡時間等主要影響因素進行考察，優選最佳工藝參數。

2.2.1 水煎煮工藝條件正交試驗因素水平表見表6。

表6 煎煮工藝因素水平表

按脈脂康膠囊處方比例，稱取人參、川芎、當歸、山楂、制何首烏，川芎和當歸加水蒸餾揮發油，人參、山楂按2.1.2 項下乙醇提取工藝方法進行提取，其藥渣與制何首烏混合，采用L9(34)正交試驗表，按各試驗號參數進行實驗，煎液濾過，合并，濃縮至約200 mL，完全轉移至250 mL 量瓶中，加水至刻度，搖勻，即得1 ～9 號水煎提取液。

2.2.2 提取液中二苯乙烯苷的含量測定

色譜條件:色譜柱為美國熱電Hypersil C18ODS填料柱(4.6 mm×250 mm，5 μm);流動相為乙腈—水(20∶80)，體積流量1.0 mL/min;檢測波長320 nm;柱溫40 ℃;理論塔板數按二苯乙烯苷峰計算應不低于2 000。對照品和供試品色譜圖見圖3、圖4。

對照品溶液的制備:精密稱取二苯乙烯苷對照品2.665 mg，置50 mL 量瓶中，加甲醇溶解并定容至刻度，搖勻，制成每毫升含0.053 3 mg 的溶液，即得。

標準曲線:精密吸取對照品溶液2，4，6，8，10，12 μL，分別注入液相色譜儀，按上述色譜條件測定二苯乙烯苷吸收峰峰面積積分值，以進樣量為橫坐標(X)，以峰面積積分為縱坐標(Y)，進行回歸處理。回歸方程為Y =3．63 ×106X -3．79 ×104，r =0.999 8。結果提示:二苯乙烯苷在0. 106 6 ～0.629 6 μg 范圍內，進樣量與峰面積積分值呈良好的線性關系。

圖3 二苯乙烯苷對照品HPLC 圖

圖4 供試品HPLC 圖

供試品溶液的制備及測定:精密吸取2.2.1 項下1 ～9 號水煎煮正交實驗提取液各5 mL，置25 mL量瓶中，緩緩滴加950 g/L 乙醇，振搖，稀釋至刻度，靜置，濾過，取續濾液，用0.45 μm 的微孔濾膜濾過，即得。精密吸取各供試品溶液2 μL，注入液相色譜儀，按照上述2.2.2 項下色譜條件進行測定計算提取液中二苯乙烯苷的含量。結果見表7。

表7 正交試驗設計和二苯乙烯苷含量測定結果

由表7 可知，因素D 的極差R 值最小，以D 列做誤差列，對正交試驗結果進行方差分析，結果見表8。

表8 方差分析表

由表8 可知:對試驗結果進行直觀分析和統計分析，水煎煮提取過程中對二苯乙烯苷含量影響因素大小順序依次為:B ＞A ＞C ＞D，其中因素B、A 對試驗結果均有顯著性影響。根據正交試驗結果可知，最佳工藝條件為B3A2。影響因素C、D 對試驗結果影響較小，不呈顯著性，為節約生產成本、加快提取效率，加水量和浸泡時間均選擇最低水平，即C、D 均取1 水平。因此，通過綜合考慮，得到煎煮提取最佳工藝為:B3A2C1D1，即何首烏等藥材加5 倍量水，不需浸泡，直接煎煮2 次，每次2 h。

2.3 濃縮干燥工藝考察

2.3.1 不同濃縮干燥方式樣品的制備

按脈脂康膠囊處方比例，稱取相同質量的藥材2 份，分別按照優選出的最佳提取工藝進行提取。取1 份將乙醇提取液和水煎液混合濃縮至稠膏狀，干燥;另一份乙醇提取液和水煎液分別濃縮至稠膏狀，分別烘干后混合。

2.3.2 人參皂苷含量測定對比

色譜條件和對照品溶液的制備:按2.1.2 項下方法。

供試品溶液的制備及測定:分別取混合濃縮和單獨濃縮的干膏適量，分別粉碎成細粉;取3 g 左右，精密稱定，置索氏提取器中，用乙酸乙酯提取至無色，濾紙筒揮干溶劑，再用甲醇提取至無色，甲醇提取液蒸干;加20 mL 水溶解，用水飽和正丁醇每次20 mL 振搖提取5 次，合并正丁醇液;用體積分數40%的氨試液洗滌2 次，每次30 mL，棄去氨液，正丁醇液水浴蒸干;殘渣用甲醇溶解至5 mL 的量瓶中，搖勻，用0.45 μm 的微孔濾膜濾過，即得。精密吸取供試品溶液30 μL，進行測定，計算混合濃縮和單獨濃縮后混合的粉末中人參總皂苷的含量，結果見表9。結果表明:不同的濃縮干燥工藝對人參皂苷含量影響較大，混合濃縮干燥工藝的人參皂苷轉移率明顯低于單獨濃縮方式。

表9 干燥方式對人參總皂苷含量的結果對比

3 討 論

3.1 工藝路線的擬定

脈脂康膠囊處方中的川芎、當歸含有較多揮發油［8-9］，應先蒸餾提取揮發油。人參中的主要活性成分人參皂苷類成分［10］。山楂中的主要活性成分總黃酮和有機酸等，均為脂溶性物質，乙醇溶解度較好，應先采用乙醇提取。制何首烏中的主要活性成分為二苯乙烯苷等苯乙醇苷類成分，易溶于水。制何首烏可與川芎、當歸蒸餾揮發油后的藥渣及人參、山楂乙醇提取后的藥渣混合，采用加水煎煮的方法進行提取。乙醇和水煎煮提取液濃縮干燥后，粉碎，混勻，將揮發油噴于干燥粉末中，密封過夜，再低溫烘干。

3.2 最佳提取工藝的確定

通過正交試驗對山楂和人參的乙醇提取工藝、制何首烏等藥材的水煎煮工藝分別進行優選，得出的最佳提取工藝參數為:山楂和人參加5 倍量的750 g/L 乙醇，加熱回流提取1 次，0.5 h;何首烏等藥材加10 倍量的水，不需浸泡，煎煮2 次，每次2 h。

3.3 不同濃縮干燥方式的比較

在濃縮干燥工藝方式研究中，主要考察了濃縮方式及出膏率。結果顯示:混合濃縮對人參皂苷等有效成分的保留明顯低于單獨濃縮，應選擇單獨濃縮的方式;濃縮方式對出膏率無影響。通過本研究，確定了脈脂康膠囊的最佳制備工藝，對擬定的生產工藝進行3 批中試生產驗證，結果證明所優選的生產工藝簡單穩定，適合工業化生產。脈脂康膠囊工藝改進后，可減小服藥量，并保證臨床用藥的安全有效性。

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