敦煌固本方對運動負荷小鼠股四頭肌細胞內鈣離子含量和相關酶活性的影響*

李希斌，彭雪晶

(甘肅中醫(yī)學院，甘肅 蘭州730000)

運動性疲勞的有效恢復是運動員、教練員及運動醫(yī)學工作者普遍關心的問題。在尋找安全、有效的抗運動性疲勞方法和途徑中，中醫(yī)藥以其副作用少、絕大多數不含興奮劑成分而日益成為國內學者研究的熱點之一，也成為體育競賽事業(yè)中的科技研究焦點。國內外許多學者已通過實驗證實，中藥補劑對提高運動能力，消除疲勞有一定的效果［1-3］。在本課題前期臨床研究中，選用敦煌醫(yī)學文獻經方“敦煌固本方(人參、黃芪、岷當歸、馬鹿茸、橘皮、女貞子)”進行了初步實驗觀察。結果顯示:敦煌固本方具有顯著的抗氧化作用和機體免疫調節(jié)功能，初步驗證了敦煌固本方具有防治運動性疲勞綜合征的顯著作用［4-5］。本實驗測定運動負荷小鼠股四頭肌細胞內鈣離子含量、線粒體Ca2+-Mg2+-ATP 酶和己糖激酶活性，用以綜合分析此方是否具有抗疲勞作用。

1 材料與方法

1.1 動 物

昆明種SPF 級小鼠50 只，雌雄各半，由甘肅中醫(yī)學院動物實驗中心提供。基礎飼料飼養(yǎng)，食水自由，觀察小鼠進食、活動、睡眠情況，均確認為健康后以備實驗使用。SPF 級動物合格證號為SCXK(甘)2011 -0001 -0002722，SPF 級實驗設施合格證為SYXK(甘)2011 -0001 -0001167。動物顆粒飼料由北京科奧協力飼料責任有限公司提供。

1.2 藥品與試劑

敦煌固本方處方組成:人參10 g，黃芪15 g，岷當歸10 g，馬鹿茸1.5 g，女貞子10 g，橘皮10 g 等。上述藥材由甘肅中醫(yī)學院附屬醫(yī)院中藥房提供。將藥材置于7 倍藥量的蒸餾水中浸泡1 ～2 h，煮沸30 min，過濾，為1 煎;藥渣加5 倍量蒸餾水，繼續(xù)煮沸20 min，過濾，為2 煎;將1 煎、2 煎合并，濃縮至35 mL，即配制成2 000 g 生藥/L 溶液。鈣測定試劑盒(批 號 20120422)、ATP 酶 試 劑 盒(批 號20120618)、己糖激酶測定試劑盒(批號20120604)，均購自南京建成生物工程研究所。

1.3 分組與給藥

小鼠購進后適應性喂養(yǎng)1 周，然后隨機分為正常對照組、模型對照組和敦煌固本方高、中、低劑量組5 組，每組10 只。正常對照組、模型對照組每日灌胃生理鹽水0.4 mL，敦煌固本方低、中、高劑量組每日依次灌胃敦煌固本方藥液0.1，0.4，0.8 mL，連續(xù)30 d。除正常對照組外，其余4 組每天進行遞增負荷游泳負荷實驗［6］。

1.4 檢測指標

每周周一、周四稱量體質量，取平均值，觀察敦煌固本方對小鼠體質量有無影響。30 d 給藥結束后，脫臼處死小鼠，摘取小鼠股四頭肌，用預冷的生理鹽水洗凈血污，濾紙吸干，用勻漿介質低溫勻漿制備100 g/L 的肌勻漿液，0 ～4 ℃下以5 000 r/min 轉速離心25 min，取上清液，-20 ℃保存，待測。檢測鈣離子含量、ATP 酶和己糖激酶活性［7］，操作嚴格按試劑盒說明書進行。

1.5 統計學方法

采用SPSS 13.0 統計分析軟件處理。計量資料數據以均數(ˉx)± 標準差(s)表示，組間比較采用t 檢驗。以P ＜0.05 為差別有統計學意義。

2 結 果

2.1 各組小鼠體質量對比

各組小鼠體質量組間對比，差別無統計學意義。結果見表1。表明:敦煌固本方對小鼠體質量無影響。

表1 各組小鼠體質量對比 n=10

表1 各組小鼠體質量對比 n=10

組 別 第1 周/g 第2 周/g 第3 周/g 第4 周/g正常對照組 22.15 ±2.90 25.21 ±3.74 28.73 ±4.27 29.67 ±4.26模型對照組 22.25 ±2.73 25.06 ±1.94 27.85 ±2.74 27.91 ±3.47敦煌固本方低劑量組 22.24 ±2.47 25.10 ±1.54 29.40 ±2.72 31.55 ±2.64敦煌固本方中劑量組 22.26 ±2.37 26.05 ±2.12 28.70 ±2.47 30.45 ±2.08敦煌固本方高劑量組 22.30 ±2.35 26.18 ±2.19 29.95 ±3.46 32.17 ±2.58

2.2 各組小鼠鈣離子含量、ATP 酶活性、己糖激酶活性對比

鈣離子含量方面，模型對照組與其他各組對比，差別具有統計學意義(P ＜0.05 或P ＜0.01)。ATP酶活性方面，模型對照組低于其他各組，差別有統計學意義(P ＜0.05 或P ＜0.01);正常對照組與敦煌中、高劑量組對比，差別有統計學意義(P ＜0.01)。己糖激酶方面，敦煌高劑量組與其他各組對比，差別有統計學意義(P ＜0.05 或P ＜0.01)。見表2。

表2 各組小鼠鈣離子含量、ATP 酶活性、己糖激酶活性對比 n=10 ±s

表2 各組小鼠鈣離子含量、ATP 酶活性、己糖激酶活性對比 n=10 ±s

注:與正常對照組對比，* P ＜0.05，＊＊ P ＜0.01;與模型對照組對比，# P ＜0.05，## P ＜0.01;與敦煌高劑量組對比，△P ＜0.05，△△P ＜0.01。

組 別 鈣離子/(nmol·mgpro -1) Ca2+ -Mg2+ -ATP 酶/(U·mgprot -1) 己糖激酶/(U·mgprot -1)正常對照組 16.74 ±2.27## 2.141 ± 0.568#△△ 0.042 ±0.005△模型對照組 32.84 ±0.16＊＊ 1.682 ±0.612△△ 0.039 ±0.007△△敦煌低劑量組 26.16 ±1.62* # 3.542 ±1.012## 0.046 ±0.003△敦煌中劑量組 24.09 ±2.05# 4.044 ±1.522＊＊## 0.052 ±0.006△敦煌高劑量組 22.12 ±1.62# 5.572 ±0.814＊＊## 0.067 ±0.004＊＊

3 討 論

本項目工作假說立論于運動訓練耗氣傷津(表現為乏力、大汗、口渴、易感冒等癥狀)和“氣陰兩虛”的中醫(yī)理論，采用運動訓練小鼠優(yōu)化模型，以敦煌固本方進行干預治療，從相關藥效學角度觀察該方對運動負荷小鼠股四頭肌細胞內鈣離子含量及糖代謝相關酶活性的影響，進一步為其被開發(fā)為運動保健食品提供理論依據。本方組成中，人參可補元氣;黃芪營衛(wèi)固表;鹿茸被稱為血肉有情之品，為補血圣藥;女貞子斂陰補腎。按照中醫(yī)基礎理論，以上各藥配伍有補血行氣的功效，對于從事體力活動較多的人群有延緩或消除疲勞的作用［8］。本次研究從實驗角度驗證了這一假說。就鈣離子含量而言，隨著敦煌固本方給藥量的增加，由于運動多量導致胞漿內鈣離子大量聚集得到逐漸減緩。ATP 酶存在于組織細胞及細胞器的膜上，是生物膜上的一種蛋白酶，在物質運送、能量轉換及信息傳遞方面具有重要的作用。就本研究測定的Ca2+-Mg2+-ATP 酶活力而言，服用敦煌固本方30 d 后，中、高劑量組負荷游泳運動小鼠股四頭肌Ca2+-Mg2+-ATP 酶活性高于正常對照、模型對照組(P ＜0.01)，說明該方可以增強股四頭肌中Ca2+-Mg2+-ATP 酶活性，保持組織細胞和線粒體中鈣的穩(wěn)態(tài)，從而減少負荷運動后產生的過多自由基對組織細胞的損害，使組織在負荷運動中能夠保持細胞結構及功能的完好狀態(tài)，避免了運動性損傷，延緩了運動性疲勞的產生或有助于促進機體運動性疲勞消除作用［9］。就己糖激酶而言，敦煌高劑量組小鼠股四頭肌己糖激酶含量明顯高于模型對照組，說明敦煌固本方可以修復因為負荷運動而造成糖酵解異常，但具體作用機制仍需進一步研究。

［1］余謙，李明富，宋開源，等. 中醫(yī)藥抗體力性疲勞的整體思辨與應用前景［J］. 中國運動醫(yī)學雜志，2001，20(1):3.

［2］劉曉莉，張琴.復方中藥消除運動性疲勞的優(yōu)勢［J］. 中國臨床康復，2003，7 (4):649.

［3］李麗.補氣活血方抗運動性疲勞的實驗研究［J］.中醫(yī)藥信息，2006，23(3):65.

［4］陳奇. 中藥藥理研究方法學［M］. 北京:人民衛(wèi)生出版社，1993:334.

［5］李麗.補氣活血方抗運動性疲勞的實驗研究［J］.中醫(yī)藥信息，2006，23(3):65.

［6］熊正英，唐量. 蘆薈對運動訓練小鼠骨骼肌自由基代謝及運動能力的影響［J］. 中國運動醫(yī)學雜志，2003，22(2):182 -183.

［7］曲綿域，高云秋，浦鈞宗，等. 實用運動醫(yī)學［M］. 北京:北京科學技術出版社，1995:52.

［8］羅瓊. 閻俊. 李瑾瑋. 等. 枸杞多糖粗品與純品抗疲勞作用 的比較［J］. 湖北醫(yī)科大學學報，1999，12(5):296 -299.

［9］吳新正，何迎春，劉紅萍，等. 紅景天復方制劑對小鼠抗運動性疲勞的作用及機制研究［J］.現代檢驗醫(yī)學雜志，2008，23(2):73 -75.