豬弓形蟲病的血清學檢測

顧冬花 （青海省大通縣畜牧獸醫站 810100） 李涵林 （青海省大通縣農牧扶貧開發局）

應用ELISA方法對采自青海省4家規模場的200份豬血清進行豬弓形蟲病的檢測，檢測結果為1場仔豬陽性1份；4場母豬陽性1份；2場、3場檢測結果全部為陰性；200份檢測樣品，其中子豬檢測90份，仔豬陽性率為1.1%；母豬檢測50份，母豬陽性率為2%；育肥豬檢測60份，陽性率為0。檢測結果表明1場仔豬和4場母豬存在豬弓形蟲病感染，該兩場需采取有效的治療和預防措施，防止該病的傳播擴散。

弓形蟲病是由剛地弓形蟲(Tox op lasmagondi)引起的一種人畜共患原蟲病，1908年法國學者Nicolle 和manceaux在北非剛第最早發現［1］。弓形蟲宿主范圍廣，常寄生于組織細胞內，人和動物一旦攝入被弓形蟲卵囊污染的食物或飲水就可感染發病。人的先天性弓形蟲病可使胎兒或嬰幼兒出現發育畸形、智力障礙、腦炎、腦膜炎甚至死亡等臨床癥狀，常成為免疫抑制及免疫缺陷人群的致死病因之一[2]。豬感染弓形蟲初期體溫升高，食欲減退，呼吸困難，感染母畜流產、死胎，其余則出現消化道和呼吸道癥狀，或隱性感染，給養豬業生產帶來了較大的經濟損失。自從于恩庶等1955年在豬體內分離到弓形蟲以后[3]，20世紀80年代，我國有多個省、市、自治區相繼報道了豬感染弓形蟲病的情況［4］。為了了解青海省規模場豬弓形蟲病的感染狀況，筆者對青海省的200份豬血清用ELISA試驗進行了豬弓形蟲感染的血清學檢測，現將檢測結果報告如下。

1 材料

1.1 樣品來源 被檢血清200份，采自青海省4個規模場各50份，其中仔豬90份、母豬50份、育肥豬60份。

1.2 儀器 移液器、恒溫培養箱、洗板機、酶標儀等。

1.3 試劑 標準抗原、陰陽性血清均購自中國農業科學院蘭州獸醫研究所。

2 方法

按照蘭州獸醫研究所提供的豬弓形蟲病ELISA診斷試驗操作說明進行。

3 步驟

（1）用微量移液器向每個孔內加0.2ml0.05mPH9.6碳酸鹽緩沖液稀釋的抗原，置濕盒內于4℃冰箱包被18～24h。然后取出包被好的抗原板甩去抗原，用含有0.05%吐溫-20pH7.2PBS(簡稱洗滌液)洗滌3次，甩去洗滌液，倒置在濾紙上輕拍使孔內液體充分流出。（2）向孔內分別加入用稀釋液稀釋好的被檢豬血清、陽性血清、陰性血清各0.2ml，置濕盒內于37℃恒溫2h。（3）取出反應板甩去血清，同上洗滌5次拍干。再加入稀釋好的酶標記物兔抗豬或鼠抗豬IgG0.2ml，置濕盒內于37℃恒溫2h。（4）同上甩去殘留的酶標記物溶液，洗滌5次拍干。加入底物溶液0.2ml，置濕盒內于37℃恒溫30min，拿出后立即向孔內加入0.03ml終止液，終止反應。

4 結果判定

4.1 肉眼觀察 在反應終止后，于白色背景上用肉眼觀察各孔中所呈現的顏色反應，并與陰性血清孔中呈現的顏色比較，凡試驗血清孔中的顏色明顯深于陰性血清孔，成鮮明的棕黃色者為陽性反應，以能產生陽性反應的最高血清稀釋度為該份血清的終點滴度。無色或很淺淡黃色者為陰性反應。

4.2 測定吸光值(OD值) 將反應板放入酶標儀讀取492nm吸收波的OD值，凡檢測血清的吸光值高于標準陰性血清吸光值2倍以上者即為陽性反應。

5 結果

附表 各豬場豬弓形蟲病ELISA試驗檢測結果 （%）

6 討論

（1）本次調查采用ELISA試驗診斷方法，檢測4個規模場的豬血清樣品200份，仔豬90份，母豬50份，育肥豬60份；檢測結果仔豬陽性1份，陽性率1.1%，母豬陽性1份，陽性率2%；說明青海地區豬弓形蟲感染率不高，尤其2場和3場豬弓形蟲的感染率為0，感染主要發生在1場和4場，因此1場和4場應進一步加強獸醫衛生管理及疫病的防治工作。（2）應用ELISA試驗診斷方法判斷豬弓形蟲病具有高效、經濟、快速、結果易于判斷等優點，有一定的實用價值。（3）隨著養豬業的集約化和規模化發展，母豬繁殖障礙性疾病已成為豬場的主要疫病之一，目前，沒有預防豬弓形蟲病的疫苗，再加上飼養者對本病認識不足，缺乏診斷防治技術，延誤治療時機，造成大批母豬流產、肉豬發病死亡，給養豬生產帶來嚴重的 經濟損失，因此控制豬弓形蟲病的流行主要依靠有效的防治措施來進行。（4）弓形蟲的整個發育過程需要兩個宿主，貓科動物為終末宿主，是弓形蟲的重要傳播源，因此豬場禁止飼養貓科動物，杜絕弓形蟲的傳播。另外病畜和帶蟲者的肉、內臟、血液、滲出物和排泄物中均可能有弓形蟲，這些不僅可感染家畜，而且對人體健康危害極大。

7 建議

（1）禁止貓科動物進入豬圈舍，防止其糞便污染豬的飼料和飲水；（2）做好豬舍的防鼠滅鼠工作，禁止用屠宰廢物和廚房垃圾、生肉湯水喂豬，以防豬吃到患病和帶蟲動物體內的滋養體和包囊而感染；（3）對豬圈舍定期消毒，保持衛生清潔，對流產胎兒及排泄物嚴格按無害化處理，對流產場地嚴格消毒；（4）加強生豬的宰前、宰后檢疫，防止污染肉上市，以保證人民群眾身體健康。（5）不同地區和環境弓形蟲感染率不同，即使同一種動物也不盡相同。很多國家都有此病，且最高感染率達90%[5]。國內不少地區豬的平均感染率為30%左右，有的高達80%以上[6]，而本次調查比馬利青等應用間接血凝試驗(IHA)檢測出青海省西寧地區豬弓形蟲的感染率為30.34%低[7]，說明近幾年規模場的獸醫衛生管理工作和疫病防治工作取得了顯著成效，今后繼續加強這方面的調查工作，為養殖場防制和凈化本病提供科學依據。

[1]北京農業大學主編.家畜寄生蟲學[m].北京: 農業出版社, 1987.430-435.

[2]吳中光, 鄭葵陽.實用寄生蟲病學[m].南京: 江蘇科學技術出版社, 2003: 152-156.

[3]于恩庶.弓形蟲病學[m].福州: 福建科學技術出版社, 1992: 3-6.

[4]蔡寶祥, 鄭明球主編.豬病診斷和防治手冊[m].上海: 上海科學技術出版社, 1997.271-276.

[5]林明亮等, 牡丹江地區羊弓形蟲病血清學普查報告[J].黑龍江畜牧獸醫, 1995, 7: 27-28.

[6]呂元聰.廣西西南部分地區畜禽弓形體病流行病學監測[J].畜牧獸醫雜志, 1990, 3: 24-26.

[7]馬利清, 王弋平, 閻高峰.青海省西寧地區豬弓形體病的血清學調查[J].家畜生態, 2003: 24(4): 6.