表沒食子兒茶素沒食子酸酯對2型糖尿病大鼠生化指標的影響

曹弟勇，紅日木沙，安紅梅，熊 琪，沈 俊，李陽友，項 濤，劉 華，鄭 倩

(川北醫學院 1.藥理學教研室；2.2012級臨床醫療系；3.動物實驗中心；4.機能實驗中心，四川 南充 637100)

近年來，糖尿病的發病率呈顯著上升的趨勢，已成為威脅人類健康的主要疾病之一，我國糖尿病患者達到9.6%，總人數已經超過7千萬，成為糖尿病人口最多的國家[1]。目前，藥物治療多采用口服降糖藥(磺脲類、雙胍類)或注射胰島素等方法，這雖然可以有效地降低血糖，但會導致糖尿病患者產生耐藥性，引起低血糖、合并肝、腎功能降低等多種不同程度的毒副作用，加速了糖尿病并發癥的發生和發展。因此研究天然降血糖活性成分用以開發降血糖藥物具有重要意義。

表沒食子兒茶素沒食子酸酯(epigollatecatechin gallate,EGCG)是茶葉特有的兒茶素，是茶多酚的主體部分，研究發現，EGCG對癌癥、肥胖、糖尿病、心血管疾病都具有預防功效，已經成為研究的熱點。近來研究認為，EGCG可以降低血糖和胰島素水平[2-3]，但是其對血液脂類代謝、肝功和腎功影響的報道較少，本課題采用鏈脲佐菌素(Streptozotocin,STZ)聯合高脂飲食復制2型糖尿病大鼠模型，EGCG治療4周，測定大鼠血液生化指標，觀察肝功與腎功變化。

1 材料和方法

1.1 動物與試劑

3月齡雄性Wistar大鼠，一級，重量(195±16)g。常規飼料：57%碳水化合物，22%蛋白質，6%脂肪，8%纖維素，7%其它成分。高能飼料(60%常規飼料，20%蔗糖，15%豬油，5%膽固醇)。動物和飼料均由川北醫學院動物中心提供。EGCG(上海雅吉，A-0159)，鏈脲佐菌素(STZ,Sigma)。

1.2 動物模型建立與分組治療

T2DM大鼠模型的復制參照本實課題組既往方法[4]，高能飼料喂養大鼠4周，空腹12 h后一次性腹腔注射STZ 25 mg·kg-1，STZ臨時用pH=4.2的枸櫞酸-枸櫞酸鈉緩沖液配成2.5%的終濃度。對照組大鼠用等量緩沖液處理，繼續高能飼料喂養4周后，采尾靜脈血檢測空腹血糖(fasting blood glucose,FBG)，以FBG>7.8 mmol·L-1作為T2DM模型成功的判斷標準[5-6]。

隨機把實驗動物分為五組(每組n=8)：正常對照組(NOR)、模型對照組(MOR)、EGCG低劑量治療組(EGCG1)、EGCG中劑量治療組(EGCG2)、EGCG高劑量治療組(EGCG3)。EGCG1組每日上午一次性腹腔注射EGCG劑量為1 mL·kg-1·d-1，EGCG2組注射劑量為2 mL·kg-1·d-1，EGCG3組注射劑量為5 mL·kg-1·d-1，模型對照組每次給予等量生理鹽水處理。動物飼養于川北醫學院動物實驗中心標準大鼠飼養室，自由飲水，治療期間，全部大鼠常規飼料飼養。飼養期間定期檢測動物空腹血糖水平。8周后，除去死亡動物，實驗動物正常組存活8只，模型組存活7只，EGCG1存活7只，EGCG2存活8只，EGCG3存活8只，將實驗大鼠于空腹12 h，心臟采血制備血清標本，采用全自動生化分析儀測定門冬氨酸氨基轉移酶(AST)、丙氨酸氨基轉移酶(ALT)、總膽固醇(TCHO)、甘油三酯(TG)、尿素氮(UREA)，肌酐(CREA)。

1.3 統計學分析

2 結果

2.1 大鼠的一般癥狀和體征變化

與正常對照組大鼠比較，建立的T2DM模型大鼠體重明顯增加，并出現腹型肥胖和多飲、多食、多尿的癥狀，毛發色澤黯淡，精神萎靡，活動減少；EGCG干預4周后，大鼠精神狀態、反應、毛色、尿量和飲食等得到明顯改善。

2.2 血清血脂水平的變化

結果見表1，模型組TG、TCHO比正常情況高，與正常組相比，TG明顯增高P<0.01,TCHO高于正常組，P<0.05，提示糖尿病大鼠有血脂紊亂的表現。給予四周不同濃度EGCG治療后，于模型組相比，TG降低，有統計學意義，TCHO降低，但是低濃度無統計學意義(P>0.05)，高濃度組有差異(P<0.05)。

表1 EGCG干預各組大鼠血脂的變化

*P<0.01，與NOR組比較；#P<0.05，△P<0.01與MOR組比較。

2.3 血清肝功能指標的變化

結果見表2，模型組AST、ALT高于正常組，可見糖尿病大鼠肝臟功能有損傷，EGCG治療后，AST、ALT均有不同程度降低，低濃度組與模型組相比P<0.05，中、高濃度組與模型組相比P<0.01，EGCG對糖尿病大鼠肝臟功能有保護作用。

表2 EGCG干預各組大鼠AST、ALT的變化

*P<0.01，與NOR組比較；#P<0.05，△P<0.01與MOR組比較。

2.4 血清腎功能指標的變化

結果見表3，模型組UREA、CREA高于正常組，可見糖尿病大鼠腎臟功能有損傷，EGCG治療后，UREA、CREA均有不同程度降低，低濃度組與模型組相比P<0.05，中、高濃度組與模型組相比P<0.01，提示EGCG可以保護2型糖尿病大鼠腎臟功能。

表3 EGCG干預各組大鼠UREA、CREA的變化

*P<0.01，與NOR組比較；#P<0.05，△P<0.01與MOR組比較。

3 討論

STZ是一種含亞硝基的化合物，具有抗菌、抗腫瘤和致糖尿病的作用，對胰島B細胞具有高度選擇性的毒性作用，STZ聯合高脂飲食誘導動物模型已經成為常用的2型糖尿病的造模方法[7-9]。該模型能夠較好地評價治療型糖尿病的藥物以及進行型糖尿病病理機理和糖尿病并發癥相關方面的研究，具備方法簡單、經濟、節省時間等優點。

2型糖尿病的主要特征為胰島素抵抗和胰島素分泌絕對或相對不足，由此導致糖、蛋白質和脂肪代謝紊亂。本研究結果也證實，2型糖尿病大鼠血脂代謝紊亂，血清中TG和TCHO比正常對照顯著增加，而使用EGCG干預后無論是低濃度或者是高濃度TG可明顯降低，EGCG可以降低血清中TG含量；不過低濃度組EGCG對TCHO不具有統計學意義，但是高濃度組EGCG可以降低大鼠血清中TCHO水平,提示EGCG可以改善脂代謝。Shimada等[10]在對非肥胖糖尿病Kakizaki大鼠研究中也證實，EGCG可以降低其TG的水平，認為與提高脂聯素水平，改善肝胰島素抵抗有關。

尿素氮和肌酐是蛋白質代謝的終末產物，測定其含量可以反映腎臟功能，2型糖尿病大鼠尿素氮和肌酐明顯增加，EGCG使用后，均可以降低二者的含量，且有劑量依賴性，說明EGCG有保護腎臟功能的作用，其機制有待于進一步研究。

ALT、AST可以反映肝臟功能，在2型糖尿病大鼠中，含量明顯升高，可能與肝臟組織的氧化損傷有關，而使用EGCG后ALT、AST顯著降低，可見EGCG對肝臟有保護作用，其機制有待于進一步研究。

【參考文獻】

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