芩榆燒傷凝膠制備工藝及安全性評價

楊巧麗 劉 燕 史玉柱 王 雪 姚 華 王林林 康雨彤 胡海蛟 黃 華

新疆維吾爾自治區藥物研究所，新疆烏魯木齊830004

芩榆燒傷凝膠制備工藝及安全性評價

楊巧麗 劉 燕 史玉柱 王 雪 姚 華 王林林 康雨彤 胡海蛟 黃 華

新疆維吾爾自治區藥物研究所，新疆烏魯木齊830004

目的制備一種治療燒燙傷的純中藥凝膠劑——芩榆燒傷凝膠，并進行安全性實驗研究。方法將黃芩、關黃柏、地榆中藥材經浸漬、滲漉、濃縮、干燥、粉碎等現代工藝制成干粉，白及蒸餾提取制成一定比重的濃縮液，冰片加入乙醇溶液溶解，三者合并加入甘油、高取代羥丙基纖維素（H-HPC）和苯甲酸鈉混勻后制成凝膠劑，并進行安全性試驗研究。結果大鼠皮膚急性毒性試驗證明該制劑無急性毒性；豚鼠完整和破損多次皮膚給藥刺激試驗結果證明該制劑對破損及完整皮膚多次給藥均無刺激性；豚鼠皮膚局部過敏試驗結果證明，該制劑高劑量組[1.5 g（生藥）/g]致敏率為10.0%，有弱致敏性，24 h后情況逆轉，紅斑及水腫消失。芩榆燒傷凝膠組[0.5 g（生藥）/g]致敏率為0.0%。結論芩榆燒傷凝膠臨床劑量用于皮膚安全。

芩榆燒傷凝膠；制備工藝；安全性實驗

芩榆燒傷液為解放軍69220部隊醫院開發的用于治療燒燙傷的制劑，此方具有止痛生肌、化瘀解毒、清熱涼血等作用，用于各種原因引起的燒傷、燙傷。考慮到燒傷液中的60%可能會給患者帶來一定的刺激性，長時間存放易揮發等問題，課題組對該制劑進行了改進，制備了芩榆燒傷凝膠。課題組前期藥效學研究表明，芩榆燒傷凝膠對燙傷皮膚有促愈合作用，同時具有較好的抗炎鎮痛和抗菌作用，與原制劑芩榆燒傷液作用相當[1]。

在前期研究的基礎上，為評價其用藥安全性，本課題進行了皮膚急性毒性試驗、皮膚刺激性試驗及皮膚過敏性試驗，評價其皮膚用藥的安全性，為臨床用藥提供依據。現報道如下：

1 動物與試藥

1.1 供試品

芩榆燒傷凝膠組：0.5 g（生藥）/g，批號：20121013。芩榆燒傷凝膠高劑量組：1.5 g（生藥）/g，由浸膏粉和蒸餾水臨用前配制成稠膏。芩榆燒傷凝膠、芩榆燒傷高劑量和空白基質組用樣品均由新疆維吾爾自治區藥物研究所維吾爾藥分析實驗室提供。

1.2 試劑

羧甲基纖維素鈉（CMC-Na，黏度：300～600，安徽山河藥用輔料股份有限公司，批號：20110904；黏度：800～1200，上海山浦化工有限公司，批號：20110401），低取代羥丙基纖維素（L-HPC，湖州展望化學藥業有限公司，批號：20110426），高取代羥丙基纖維素（HHPC，黏度：75～150，批號：424851；黏度150～300，批號：55024，購自北京鳳禮精求商貿有限責任公司），羥丙基甲基纖維素（HPMC，湖州展望化學藥業有限公司，批號：20110509），聚乙烯吡咯烷酮-K30（PVP-K30，購自北京鳳禮精求商貿有限責任公司，批號：G01757PTO），甘油（浙江遂昌惠康藥業有限公司，批號：20120415）、苯甲酸鈉（武漢有機實業有限公司，批號：Y-100330003）；黃芩、關黃柏、地榆和白及等均購自新疆奇康哈博維藥有限公司，經新疆維吾爾自治區藥物研究所何江副研究員鑒定符合《中國藥典》2010年版規定。2，4-二硝基氯苯，天津市光復精細化工研究所，批號：2005 0323；無水乙醇，天津市致遠化學試劑有限公司，批號：20090628。

1.3 動物

SD大鼠，體重180～220 g；健康豚鼠，體重280～320 g，雌雄各半，均由新疆實驗動物研究中心提供，實驗動物生產許可證號分別為：SCXK（新）2011-0001和SCXK（新）2011-0002。

2 方法與結果

2.1 藥物組成及制備工藝

2.1.1 藥物組成

黃芩100 g，關黃柏66.7 g，地榆66.7 g，白及16.7 g，冰片2 g。

2.1.2 制備工藝

以上五味，地榆粉碎成粗粉，用適量5%乙醇做溶劑，浸漬72 h后，加30倍量5%乙醇進行滲漉，流速為300mL/（min·kg），收集滲漉液，減壓濃縮（0.08mPa，60℃）至相對密度為1.20～1.25（60℃）的清膏，真空干燥（0.08mPa，60℃），粉碎，過160目，備用；黃芩和關黃柏粉碎成粗粉，用適量70%乙醇做溶劑，浸漬12 h后，加40倍量70%乙醇進行滲漉，流速為200mL/（min·kg），收集滲漉液，減壓濃縮（0.08 mPa，60℃）至相對密度為1.20～1.25（60℃）的清膏，真空干燥（0.08 mPa，60℃），粉碎，過160目，備用；白及粉碎成粗粉，加14倍量水煎煮2次，每次1.5 h，濾過，合并濾液，濃縮至藥材∶藥液=1∶15（g/g），備用。將120 g H-HPC和1.8 g苯甲酸鈉加入白及水提液中分散均勻，溶脹過夜；再將100 g甘油加入H-HPC凝膠基質中，攪拌均勻；再將上述地榆浸膏、黃芩、關黃柏浸膏，加入凝膠基質中，攪拌均勻；取冰片加適量乙醇使溶解，加入上述基質中，攪拌均勻，加注射用水至500 g，即得[2]。

2.1.3 用法

外用，涂抹于潔凈創面，每日3～4次。

2.2 皮膚急性毒性試驗

2.2.1 試驗分組

選用健康SD大鼠40只，體重180～220 g，雌雄各半，于給藥前24 h剔去大鼠頸背部毛，每側備皮面積6 cm×6 cm，依性別、體重隨機分為5組，分別為空白基質組、芩榆燒傷凝膠完整皮膚組、芩榆燒傷凝膠破損皮膚組、芩榆燒傷凝膠高劑量完整皮膚組、芩榆燒傷凝膠高劑量破損皮膚組，每組8只。破損皮膚的制備采用無菌9號針在大鼠備皮區劃“#”字，以滲血為度。

2.2.2 給藥方法

制作破損皮膚模型當天各給藥組均采用最大給藥量開始涂抹給藥，給藥體積以均勻涂布備皮區為宜，約40 mg/cm2。每天給藥4次，前3次給藥后敷貼3 h后用溫水除去受試物，末次給藥后24 h用溫水除去受試藥[3]。

2.2.3 觀察指標

去除受試物后肉眼觀察并記錄體重變化、飲食、外觀、分泌物、排泄物、死亡情況及中毒反應（中毒反應的癥狀、嚴重程度、起始時間、持續時間、是否可逆）等。對瀕死及死亡動物及時進行解剖，連續觀察14 d。

2.2.4 結果

實驗結果表明，在試驗觀察期內芩榆燒傷凝膠、芩榆燒傷凝膠高劑量組以及空白基質組外用時對完整皮膚和破損皮膚的SD大鼠的動物活動行為無改變，飲食正常，毛發有光澤，眼及耳鼻無分泌物，排泄物正常，無死亡及中毒情況，與空白基質組比較，各給藥組間動物體重增長率均無明顯變化，差異無統計學意義（P＞0.05）。提示芩榆燒傷凝膠在大鼠皮膚外用無明顯急性毒性。結果見表1、2。

表1 芩榆燒傷凝膠急性毒性實驗期內各組動物一般情況

2.3 急性皮膚刺激性試驗

2.3.1 試驗分組

取健康白色豚鼠20只，體重280～320 g，于實驗前24 h，用動物電推剪剔去豚鼠頸背部毛（每側3 cm× 3 cm，無紅斑、水腫及破損）；脫毛后依性別、體重隨機分兩組，分別為芩榆燒傷凝膠完整皮膚組和芩榆燒傷凝膠破損皮膚組，每組10只，其中破損皮膚組動物在脫毛基礎上，用消毒過的9號針在受試動物脫毛區左側劃“#”字，以滲血為度，制作破損皮膚模型。

2.3.2 給藥方法

每組豚鼠左側脫毛區為受試物區涂抹芩榆燒傷凝膠劑，右側為對照區給予空白基質。受試動物左右脫毛區均給藥40 mg/cm2，4次/d，每次給藥后玻璃紙覆蓋無刺激膠布固定4 h，后除去受試物并用溫水洗凈給藥部位[4-5]。

表2 芩榆燒傷凝膠急性毒性實驗中各組大鼠毒性情況及體重變化情況（g，±s）

表2 芩榆燒傷凝膠急性毒性實驗中各組大鼠毒性情況及體重變化情況（g，±s）

組別動物數（只）死亡（只）動物體重給藥前用藥后7 d用藥后14 d體重增長系數（%）空白基質組芩榆燒傷凝膠完整皮膚組芩榆燒傷凝膠破損皮膚組芩榆燒傷凝膠高劑量完整皮膚組芩榆燒傷凝膠高劑量破損皮膚組8 8 8 8 8 0 0 0 0 0 201.3±14.1 200.6±15.0 201.0±13.6 204.8±11.5 201.1±14.2 226.9±16.5 228.6±22.1 222.5±15.3 230.4±15.3 227.3±13.8 247.9±19.6 249.1±23.7 243.3±12.5 249.1±17.8 247.0±14.3 23.2 24.2 21.0 21.7 22.8

表3 皮膚刺激性反應評分標準

表4 皮膚刺激性強度評分標準

2.3.3 觀察指標及評價方法

去除藥物后1、24、48、72 h觀察并記錄用藥部位有無紅斑、水腫等情況。對每只豚鼠根據皮膚刺激性反應評分標準進行評分，并計算平均分，根據皮膚刺激強度評分標準進行評價。

2.3.4 結果

參照表3、4的皮膚刺激性反應和強度評分標準，通過肉眼觀察豚鼠的完整皮膚及破損皮膚均無紅斑、水腫以及充血的出現。去除藥物后72 h觀察未發現豚鼠有不正常行為，呼吸正常，飲食正常，且各組72 h內各個時間點刺激反應評分為0。提示芩榆燒傷凝膠對豚鼠完整及破損皮膚均無刺激性。見表5。

表5 芩榆燒傷凝膠皮膚刺激性實驗結果（分）

2.4 主動皮膚過敏性實驗[6-7]

2.4.1 試驗分組

取健康白色豚鼠40只，體重280～320 g，于實驗前24 h，用動物電推剪剔去豚鼠頸背部毛（每側3 cm× 3 cm，無紅斑、水腫及破損）；脫毛后依性別、體重隨機分4組，每組10只，分別為芩榆燒傷凝膠組、芩榆燒傷凝膠高劑量組、空白基質組、2，4-二硝基氯苯陽性對照組。

2.4.2 給藥方法

2.4.2.1 致敏接觸將受試物均勻涂布于左側受試區，約40mg/cm2，給藥后玻璃紙覆蓋無刺激膠布固定6 h，第7天和第14天以同樣方法各重復1次，陽性致敏組致敏濃度為1%的2，4-二硝基氯苯。

2.4.2.2 激發接觸于末次給受試物后14 d，將受試物均勻涂布與右側受試區，約40 mg/cm2，給藥后玻璃紙覆蓋無刺激膠布固定6 h，陽性致敏組激發濃度為0.1%的2，4-二硝基氯苯。6 h去除受試物后，即刻觀察。

2.4.3 觀察指標及評分方法

去除藥物后1、24、48、72 h再次觀察皮膚過敏情況，按皮膚過敏反應評分標準給予評分，并記錄各組各時間的平均分值，同時密切觀察動物是否有哮喘、站立不穩或休克等嚴重的全身過敏反應出現。通過皮膚致敏性評價標準計算致敏反應發生率。將出現皮膚紅斑、水腫或全身過敏反應的動物例數（不論程度輕重）除以受試物總數計為致敏發生率。

2.4.4 試驗結果

參照表6、7的皮膚過敏反應程度和評價標準，各組動物均未出現休克或死亡等嚴重全身過敏反應；芩榆燒傷凝膠組受試動物均未出現紅斑、水腫等過敏反應；芩榆凝膠高劑量組激發后1 h出現弱致敏反應，致敏度為10.0%，24 h時紅斑及水腫過敏情況逆轉；陽性對照組給藥區域出現不同程度的紅斑及水腫，致敏率為100.0%。結果見表8。

表6 皮膚過敏反應程度的評分標準

表7 皮膚致敏性評價標準

表8 主動皮膚過敏反應實驗結果

3 討論

芩榆燒傷液是多年臨床應用的經驗方，處方由黃芩、關黃柏、地榆、白及等中藥組成，為解放軍69220部隊醫院開發的用于治療燒燙傷的制劑，課題組將該方中藥材采用30倍量60%乙醇，以7 mL/min流速經滲漉法提取后得到該制劑。此方具有止痛生肌、化瘀解毒、清熱涼血等作用，用于各種原因引起的燒傷、燙傷。課題組前期安全性研究表明，芩榆燒傷液在大鼠完整或破損皮膚用藥，在實驗觀察期內均未出現死亡，動物給藥部位皮膚及全身也未出現其他與給藥相關的急性毒性反應。芩榆燒傷液對豚鼠完整皮膚及破損皮膚均無刺激性。芩榆燒傷液在實驗觀察期內對豚鼠皮膚外用給藥未引起主動皮膚過敏反應。藥效學研究表明，芩榆燒傷液對大鼠深Ⅱ度燙傷創面愈合有較好的促進作用，具有一定的抗炎作用，在體外對金黃色葡萄球菌、銅綠假單胞菌和大腸埃希菌均有一定的抑菌作用[8-10]。

考慮到芩榆燒傷液中60%的醇可能會刺激燒燙傷患者創面皮膚、作用于病灶部位的藥物濃度降低較快、長期存放不穩定等問題，芩榆燒傷凝膠在保持芩榆燒傷液處方不變前提下，運用現代制藥技術，結合凝膠劑藥物，與能形成大分子網絡體系的輔料混合制成半流體制劑，該極性可較長時間與作用部位緊密黏附，有較好的生物相容性，無油膩感，通過改進后可能更有利于藥物釋放、吸收，穩定性可能也會有所改善等。

為更好地探討用藥的安全性，采用最大給藥量法進行大鼠急性毒性試驗，觀察給藥后14 d內大鼠的行為活動、飲食、用藥部位皮膚以及體重增長率，與空白基質組比較無顯著性差異；皮膚局部過敏性試驗高劑量組（臨床劑量3倍）激發后1 h出現弱致敏性，24 h后情況逆轉，紅斑及水腫現象消失。此外，本藥物的皮膚刺激性試驗研究均無異常，提示該制劑臨床擬用劑量用于皮膚是安全的。

[1]胡海蛟，張莉，黃華，等.芩榆燒傷凝膠對燙傷的藥效學研究[J].中藥藥理與臨床，2013，29（2）：160-163.

[2]康雨彤，賀金華，毛艷，等.芩榆燒傷凝膠制備工藝優選[J].醫藥導報，2013，32（8）：1085-1088.

[3]《中藥、天然藥物急性毒性研究技術指導原則》課題研究組.中藥、天然藥物急性毒性研究技術指導原則[S].北京，2005.

[4]陳奇.中藥藥理研究實驗方法學[M].北京：人民衛生出版社，2006：159-162.

[5]《中藥、天然藥物刺激性和溶血性研究的技術指導原則》課題研究組.中藥、天然藥物刺激性和溶血性研究的技術指導原則[S].北京，2005：12-15.

[6]國家藥典委員會.中藥、天然藥物免疫毒性（過敏性、光過敏反應）研究的指導原則[S].北京：中國醫藥科技出版社，2005：10-13.

[7]周一平，陳奇有，陳四艷，等.咪喹莫特乳膏的非臨床安全性評價[J].中國新藥雜志，2005，14（4）：432-435.

[8]李維強，王云飛，蘇慶，等.正交試驗法優選芩榆燒傷液提取工藝研究[J].解放軍藥學學報，2011，27（4）：293-295.

[9]李寅，楊巧麗，王雪，等.芩榆燒傷液的特殊安全性試驗研究[J].中國醫藥導報，2012，9（6）：31-35.

[10]張晗，楊巧麗，李寅，等.芩榆燒傷液治療燒燙傷的主要藥效學研究[J].中國實驗方劑學雜志，2011，17（15）：152-155.

Preparation technology and security experiment of Qinyu Burns Gel

YANG Qiaoli LIU Yan SHI Yuzhu WANG Xue YAO Hua WANG Linlin KANG Yutong HU Haijiao HUANG Hua
Institute of Meteria Medica of Xinjiang Uygur Autonomous Region,Urumqi 830004,China

Objective To preparate raditional Chinesemedicine——Qinyu Burns Gel(QBG)and to evaluate the safety. Methods The raw material such as Astragali Radix,Phellodendri Amurensis Cortex,Radix Sanguisorbae were turned into solid by a serial of modern treatment technology-soak,percolate extraction,concentrated,and dried by vacuum. Meanwhile,Bletilla striata water extracts were concentrated.Borneol were dissolved into rthanol solution.Then,all of them were mixed with Glc,glycerin H-HPC and Natrium benzoicum,which were made QBG.The Security of QBG were evaluated.Results The experimental results showed that itwas neither of urgent toxicity,stimulary function,nor of allergy-inducing response.Guinea pig skin local irritation test results showed that the sensitization rate of preparation of high dose group[1.5 g(crude drug)/g]was 10.0%,there were weak allergenic,the situation reversed after 24 h, erythema and edema disappeared.The sensitization rate of Qinyu Burns Gel[0.5 g(crude drug)/g]was 0.0%.Conclusion QBG isa newly externally-applied burns gelwhich can be used safely.

Qinyu Burns Gel;Preparation technology;Security experiment

R286

A

1673-7210（2014）08（b）-0090-03

2014-04-16本文編輯：衛軻）

新疆維吾爾自治區科技計劃項目（編號2011 10105）。

楊巧麗（1979.12-），女，河南長葛人，碩士；研究方向：中藥藥理與毒理。

黃華（1965.6-），女，江西樟樹人，碩士，研究員，新疆藥物研究所藥理2室主任；研究方向：中藥藥理與毒理。