不同類型消化道腫瘤患者化療前后T淋巴細胞亞群變化及其意義

彭潔雅 何雅軍 曾小丹

1.廣州市紅十字會醫院檢驗科，廣東廣州510220；2.廣州醫科大學檢驗系，廣東廣州510182

不同類型消化道腫瘤患者化療前后T淋巴細胞亞群變化及其意義

彭潔雅1何雅軍1曾小丹2

1.廣州市紅十字會醫院檢驗科，廣東廣州510220；2.廣州醫科大學檢驗系，廣東廣州510182

目的探討不同類型消化道腫瘤患者在化療前后T細胞亞群總T細胞（CD3+）、T輔助淋巴細胞（CD4+）、T抑制淋巴細胞（CD8+）、CD4+/CD8+比值的變化情況及臨床意義。方法應用流式細胞術分析不同類型消化道腫瘤患者在化療前后及對照組CD3+、CD4+、CD8+細胞百分率和CD4+/CD8+比值。結果消化道腫瘤患者化療前CD3+、CD4+、CD4+/CD8+比例均低于對照組，CD8+高于對照組，差異均有統計學意義（P＜0.05）；結腸癌和胃癌患者化療后CD3+、CD4+百分比較化療前均增高，CD8+百分比降低，差異均有統計學意義（P＜0.05）。直腸癌患者化療后CD3+百分比較化療前增高，CD8+百分比降低，差異有統計學意義（P＜0.05），CD4+、CD4+/CD8+比值差異無統計學意義（P＞0.05）。結論通過檢測消化道腫瘤患者T淋巴細胞亞群化療前后的變化，對了解機體的免疫動態有著重要的臨床意義。

消化道腫瘤；化療前后；T淋巴細胞亞群

T淋巴細胞是一種胸腺依賴性淋巴細胞，是構成機體免疫防御系統的重要成分，隨著對腫瘤免疫機制的了解和腫瘤免疫治療的應用，越來越多的細胞免疫檢測指標被用來監測腫瘤的發生、發展和判斷治療效果及預后，目前應用較廣泛的是T細胞亞群的測定，對于判斷癌癥患者的免疫狀態具有重要的意義。T淋巴細胞包括兩個主要亞群（CD4和CD8）。在正常情況下，機體內兩個T細胞亞群之間，保持一定的數量比例，維持平衡狀態。當機體發生腫瘤時，該平衡狀態被破壞，嚴重影響兩個T細胞亞群之間的數量比例，導致機體免疫功能紊亂[1]。本研究通過總結各類消化道腫瘤患者化療前后T淋巴細胞亞群變化，探討各類消化道腫瘤患者化療前后免疫功能的變化。

1 資料與方法

1.1 一般資料

收集2010年1月～2013年6月廣州市紅十字會醫院（以下簡稱“我院”）收治的各類消化道腫瘤患者在化療前1 d及化療后15 d均檢測T淋巴細胞含量的166例成人患者資料，其中，男108例，女58例，年齡46～82歲。相關腫瘤類型均得到病理學形態證實。胃癌21例，結腸癌100例，直腸癌45例。按《臨床病診斷及療效標準》[2]中的消化道疾病診斷，經每周期方案化療結束后15 d可經相關檢驗驗證取得療效。另以30名正常人（來自我院體檢中心健康體檢者）作為對照組，其中，男16名，女14名，年齡19～74歲。

1.2 方法

各類消化道腫瘤患者在化療前1 d及化療后15 d均檢測T淋巴細胞含量。清晨空腹抽取靜脈血2 m L，EDTA-2K抗凝，取患者新鮮抗凝血標本100μL，放入樣品測定管，加入相應的熒光標記單克隆抗體，振蕩混勻，室溫下避光孵育20～30 min，加入溶血素，溶血完畢后上機檢測。采用流式細胞儀BD Facs calibur，上機獲取10 000個淋巴細胞，對CD3+、CD4+、CD8+T淋巴細胞的百分比進行檢測分析。本次實驗所有檢測實行全過程質量控制。

1.3 統計學方法

采用SPSS 17.0統計學軟件進行數據分析，計量資料數據用均數±標準差（x±s）表示，兩組間比較采用獨立樣本t檢驗、配對t檢驗；以P＜0.05為差異有統計學意義。

表1 消化道腫瘤患者化療前后外周血T淋巴細胞亞群的表達（x±s）

表2 不同病理類型消化道腫瘤患者化療前后T細胞亞群比較（x±s）

2 結果

與對照組相比，消化道腫瘤患者化療前CD3+、CD4+、CD4+/CD8+比例均較低（P＜0.05），CD8+細胞百分比明顯升高（P＜0.05），差異有統計學意義。消化道腫瘤患者化療后CD3+、CD4+百分比和CD4+/CD8+比值較化療前均增高，差異有統計學意義（P＜0.01或P＜0.05），CD8+降低，差異有統計學意義（P＜0.05）。見表1。

不同病理類型的腫瘤患者化療前后T細胞亞群結果比較顯示，結腸癌和胃癌患者化療后CD3+、CD4+百分比較化療前均增高（P＜0.05），CD8+降低（P＜0.05），差異均有統計學意義；直腸癌患者化療后CD3+百分比較化療前增高（P＜0.05），CD8+百分比降低（P＜0.05），差異均有統計學意義，化療前后CD4+、CD4+/CD8+比值差異無統計學意義（P＞0.05）。見表2。

3 討論

腫瘤與免疫的關系復雜，免疫功能低下或抑制均有可能導致腫瘤發生。外周血T細胞亞群是經研究證實能較好反映機體細胞免疫狀態的指標。免疫學機制中，CD3+體現總細胞免疫狀態。CD4+稱為輔助性T淋巴細胞，和其他免疫細胞一起參與免疫應答，以達到抗腫瘤作用。文獻報道[3-5]，CD3+、CD4+淋巴細胞減少會導致免疫功能低下。CD8+通過自身及抑制因子在免疫反應中起負向作用，抑制CD4+細胞和B細胞功能，從而抑制抗體形成及細胞免疫反應，CD8+細胞增多有利于腫瘤持續增長，而在腫瘤發展過程中又可誘導和激發CD8+細胞，進而促進腫瘤增殖。CD3+、CD4+細胞能促進效應細胞抗腫瘤作用，CD3+、CD8+細胞主要為抑制性T細胞，抑制機體免疫應答。研究證實，在腫瘤或其他疾病進展過程中，機體免疫功能常呈現紊亂，其中一個明顯表現為T淋巴細胞亞群在數量上和功能上發生改變[6-7]。在消化道腫瘤形成中，由于腫瘤細胞會產生一些免疫抑制因子，使得CD4+減少，CD8+反應性增多；同時，由于增多的CD8+細胞可能是以抑制性T細胞（TS）居多，這變相對CD4+細胞產生一定抑制作用，使CD4+/CD8+比值下降。正常生理狀態下，CD4+/ CD8+處于相對穩定狀態，實現機體細胞免疫功能穩定。若T細胞總數或CD4+/CD8+T細胞比值發生異常時，反映機體正常T細胞亞群狀態被打破，視為免疫調節紊亂，宿主免疫功能低下或受抑制，易發生腫瘤或自身免疫疾病，機體正常的免疫功能會發生變化，呈現下降趨勢。

本研究結果顯示，與對照組相比，消化道腫瘤患者化療前CD3+、CD4+百分比較低（P＜0.05），CD8+較對照組升高（P＜0.05），差異有統計學意義。提示腫瘤患者確實存在免疫功能低下表現，與國內外報道相符[8-9]。而CD4+/CD8+比值明顯下降，說明消化道腫瘤患者體內細胞免疫功能處于抑制狀態，對識別和殺傷癌變細胞的能力下降，引起機體免疫平衡狀態被打破。化療后CD3+、CD4+較化療前有所增高（P＜0.01），趨于正常，化療后CD4+/CD8+比值較化療前增高（P＜0.05），與文獻報道相符[10-11]。提示消化道腫瘤患者體內免疫功能有不同程度的恢復[12]。CD4+/CD8+比值用于反映患者淋巴系統的機能狀態，但目前對于腫瘤患者化療效果、淋巴細胞亞群以及CD4+/CD8+并沒有一個統一的參考標準。同時，不同腫瘤類型可導致T淋巴細胞亞群發生不同程度的改變，在臨床中通過比較化療前后淋巴細胞亞群變化情況，客觀地反映機體的免疫狀況，判斷患者的病情進展以及評價療效[13]。

本研究結果顯示，直腸癌CD4+在化療前后的變化不如結腸癌和胃癌CD4+在化療前后的變化明顯，說明直腸癌化療對CD4+的影響不顯著，這與部分文獻報道[14]不符。探究其原因，可能由于本次研究病例中有部分患者已接受多周期化療療程，患者細胞免疫功能逐漸減低，且細胞活化能力較前減低，同時或許與患者T淋巴細胞水平、年齡有關，更與其選擇的化療方案，如FOLFOX4（奧沙利鉑+5-氟尿嘧啶+亞葉酸鈣）、FOLFRI（伊立替康+5-氟尿嘧啶+亞葉酸鈣）或XELOX（奧沙利鉑+卡培他濱）等方案的不同、療程次數、療程長短等因素有關。在不同病理類型的腫瘤患者中，化療后CD4+/CD8+比值雖有增高，但直腸癌和胃癌化療前和化療后CD4+/CD8+的變化差異無統計學意義（P＞0.05），與部分文獻報道不符[15-16]。究其原因主要為CD4+化療前后變化值不明顯所造成的。另外，消化道腫瘤患者外周血總T細胞CD3+、CD4+和CD4+/ CD8+比值在化療后均高于化療前，提示化療改變了體內的免疫狀態，而T淋巴細胞增高提示化療后腫瘤負荷減少，能一定程度恢復細胞免疫調控能力。

綜上所述，通過檢測消化道腫瘤患者T淋巴細胞亞群化療前后的變化，對了解機體的免疫動態，有著重要的臨床意義。同時，也為免疫調節治療和免疫增強治療提供理論依據。

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Changes of lym phocyte subsets and its significance in patients w ith digestive tract tumor before and after chemotherapy

PENG Jieya1HE Yajun1ZENG Xiaodan2
1.Department of Clinical Laboratory,Guangzhou Red Cross Hospital,Guangdong Province,Guangzhou 510220,China; 2.Laboratory Medical Science,Guangzhou Medical University,Guangdong Province,Guangzhou 510182,China

Objective To investigate the T cell subsets(CD3+)T cells,T lymphocytes(CD4+),T lymphocytes(CD8+)and CD4+/CD8+ratio digestive tract tumor before and after chemotherapy changes and clinical significance of patients with digestive tract tumor before and after chemotherapy.Methods Flow cytometry was used to analyze the CD3+,CD4+, CD8+cell percentage and the ratio of CD4+/CD8+in different types of gastrointestinal cancer patients before and after chemotherapy and the healthy(control group).Resu lts Compared with the control group,the former chemotherapy CD3+,CD4+,CD4+/CD8+ratio of gastrointestinal cancer patients were lower than that of control group(P＜0.05),and CD8+was higher than the control group(P＜0.05),the differenceswere statistically significant.Colon cancer and stomach cancer patients after chemotherapy CD3+,CD4+percentages were higher than before chemotherapy(P＜0.05),the percentage of CD8+was lower(P＜0.05),the differenceswere statistically significant.Patients with rectal cancer after chemotherapy CD3+percentagewas higher before chemotherapy(P＜0.05),the percentage of CD8+was lower(P＜0. 05),the differences were statistically significant;while CD4+and CD4+/CD8+ratio had no statistical significance(P＞0.05).Conclusion For the digestive tract tumor,detecting the changes of T lymphocyte subsets to understand the immune dynamic,in determining the clinical curative effect,and assess the prognosismonitoring,etc.,all have very important clinical significance.

Digestive tract tumor;Before and after chemotherapy;T-lymphocyte subsets

R734

A

1673-7210（2014）08（a）-0040-03

2014-04-03本文編輯：程銘）

廣州市紅十字會醫院院內課題（編號2013-34）。