血管生成素－2與基質(zhì)金屬蛋白酶－2在腦膠質(zhì)瘤中的表達(dá)及意義

吳紅芳 符寶敏

南陽(yáng)醫(yī)學(xué)高等專科學(xué)校病理教研室 南陽(yáng) 473000

人腦膠質(zhì)瘤的重要生物學(xué)行為之一是侵襲性生長(zhǎng)，腫瘤內(nèi)血管增生情況與其惡性程度密切相關(guān)，若能抑制腫瘤血管生長(zhǎng)，降低其侵襲性則可明顯改善人腦膠質(zhì)瘤的預(yù)后。近來(lái)發(fā)現(xiàn)血管生成素－2（angiopoietin－2，Ang－2）在血管新生中作用顯著，參與腫瘤血管新生，影響腫瘤的生長(zhǎng)及遷徙。基質(zhì)金屬蛋白酶－2（MMP－2）能降解基膜和細(xì)胞外基質(zhì)中的IV型膠原成分，為惡性腫瘤的侵襲、轉(zhuǎn)移及血管新生提供有利條件。我們應(yīng)用免疫組化技術(shù)，對(duì)45例腦膠質(zhì)瘤及13例正常腦組織Ang－2及MMP－2蛋白表達(dá)情況進(jìn)行了檢測(cè)，探討Ang－2在腦膠質(zhì)瘤發(fā)生、發(fā)展中的作用及可能的機(jī)制，為靶向治療提供理論依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 臨床資料 收集南陽(yáng)醫(yī)專第一附屬醫(yī)院病理科2007－07—2012－11手術(shù)切除膠質(zhì)瘤石蠟標(biāo)本45例，男31例，女14例；年齡8～65歲，平均（42.3±16.4）歲。根據(jù)2000年WHO神經(jīng)系統(tǒng)腫瘤的分類標(biāo)準(zhǔn)對(duì)膠質(zhì)瘤進(jìn)行組織學(xué)的分類和分級(jí)：Ⅰ級(jí)6例，Ⅱ級(jí)14例，Ⅲ級(jí)18例，Ⅳ級(jí)7例。為統(tǒng)計(jì)方便，將Ⅰ～Ⅱ級(jí)歸為低度惡性 ，Ⅲ～Ⅳ級(jí)歸為高度惡性。45例膠質(zhì)瘤均為首次確診，術(shù)前均未經(jīng)過(guò)任何放療和化療及其他治療。另取13例腦外傷內(nèi)減壓術(shù)中切除的腦組織標(biāo)本作為正常對(duì)照。所有標(biāo)本均經(jīng)過(guò)4%甲醛固定，石蠟包埋，切片，HE染色。

1.2 免疫組化染色 所有標(biāo)本作4μm連續(xù)切片，免疫組化染色。兔抗人Ang－2多克隆抗體、鼠抗人MMP－2單克隆抗體、S－P試劑盒及DAB顯色劑均由福建邁新生物技術(shù)公司提供，染色過(guò)程按試劑盒操作。陰性對(duì)照用PBS代替Ⅰ抗；陽(yáng)性對(duì)照切片由試劑公司提供。

1.3 結(jié)果判定 Ang－2和MMP－2蛋白染色陽(yáng)性反應(yīng)信號(hào)呈棕黃色細(xì)小顆粒 ，定位于胞漿。每例隨機(jī)選10個(gè)高倍視野，計(jì)數(shù)1 000個(gè)細(xì)胞，計(jì)算陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)的百分比。陽(yáng)性細(xì)胞≥10%者，即為陽(yáng)性病例；陽(yáng)性細(xì)胞＜10%者，均按陰性病例處理。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理 采用SPSS 13.0統(tǒng)計(jì)軟件對(duì)數(shù)據(jù)進(jìn)行方差分析、χ2檢驗(yàn)及Spearman等級(jí)相關(guān)分析，以P＜0.05為差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 Ang－2及MMP－2的表達(dá) 正常腦組織中Ang－2和MMP－2呈陰性表達(dá)。腦膠質(zhì)瘤中Ang－2表達(dá)的陽(yáng)性率為62.2%（28／45），顯著高于正常腦組織（P＜0.01）；I～I(xiàn)I級(jí)腦膠質(zhì)瘤中Ang－2表達(dá)的陽(yáng)性率為35%（7／20），III～I(xiàn)V級(jí)腦膠質(zhì)瘤中Ang－2表達(dá)的陽(yáng)性率為84%（21／25），2組表達(dá)差異顯著。腦膠質(zhì)瘤中MMP－2表達(dá)的陽(yáng)性率為46.7%（21／45），顯著高于正常腦組織（P＜0.01）；I～I(xiàn)I級(jí)腦膠質(zhì)瘤中MMP－2表達(dá)的陽(yáng)性率為25%（5／20），III～I(xiàn)V級(jí)腦膠質(zhì)瘤中MMP－2表達(dá)的陽(yáng)性率為64%（16／25），2組表達(dá)差異顯著，見表1。

2.2 腦膠質(zhì)瘤中Ang－2及MMP－2表達(dá)的相關(guān)性 腦膠質(zhì)瘤中Ang－2及MMP－2的表達(dá)呈正相關(guān)性（r＝0.487，P＜0.01），隨著Ang－2表達(dá)增強(qiáng)MMP－2表達(dá)增強(qiáng)，見表2。

表1 Ang－2及MMP－2的表達(dá)

表2 膠質(zhì)瘤中Ang－2及MMP－2表達(dá)的相關(guān)性

3 討論

腫瘤內(nèi)血管增生程度與腫瘤的惡性程度密切相關(guān)，并決定著腫瘤的生長(zhǎng)和侵襲情況［1］。腫瘤內(nèi)血管增生是各種生長(zhǎng)因子及其受體、蛋白酶、黏附分子等，多種因素共同參與的結(jié)果［2］。與血管新生關(guān)系比較密切的有血管生成素，血管成素是一組血管生成調(diào)節(jié)因子，其中Ang－2可降低血管的穩(wěn)定性，并在VEGF存在的情況下促進(jìn)血管生成［3］。

目前已發(fā)現(xiàn)Ang－2在胃癌、肝癌、胰腺癌等多種惡性腫瘤內(nèi)呈過(guò)表達(dá)，我們應(yīng)用免疫組化技術(shù)對(duì)45例腦膠質(zhì)瘤組織和13例正常腦組織中Ang－2蛋白的表達(dá)情況進(jìn)行檢測(cè)，發(fā)現(xiàn)腦膠質(zhì)瘤中Ang－2表達(dá)的陽(yáng)性率為62.2%（28／45），高于正常腦組織有顯著差異性（P＜0.01），提示Ang－2可能在腦膠質(zhì)瘤的發(fā)生、發(fā)展中起著重要作用，與Hu B等［4］報(bào)道基本一致。Ang－2在低度惡性（I～I(xiàn)I級(jí)）腦膠質(zhì)瘤中的表達(dá)率35%，與高度惡性（III～I(xiàn)V級(jí)）腦膠質(zhì)瘤中的表達(dá)率84%相比，有顯著性差異（P＜0.01），提示Ang－2的表達(dá)水平與腦膠質(zhì)瘤的惡性程度密切相關(guān)，其表達(dá)水平可作為評(píng)價(jià)腫瘤的惡性程度的指標(biāo)之一。

Ang－2能促進(jìn)血管生成，尤其在促進(jìn)惡性腫瘤血管生成中發(fā)揮重要作用，但其作用機(jī)制仍不清楚，目前有學(xué)者認(rèn)為可能與MMPs的存在有關(guān)。MMPs是一組與細(xì)胞外基質(zhì)降解有關(guān)的重要蛋白水解酶。MMP－2是MMPs家族常見成員之一，不僅可以降解細(xì)胞外基質(zhì)擴(kuò)大細(xì)胞外間隙，為腫瘤血管的形成提供有利空間，還可以增強(qiáng)內(nèi)皮細(xì)胞移動(dòng)能力，提高促血管生成因子間接參與血管的形成［5］。我們應(yīng)用免疫組化技術(shù)對(duì)45例腦膠質(zhì)瘤組織和13例正常腦組織中MMP－2蛋白的表達(dá)情況進(jìn)行檢測(cè)，結(jié)果表明腦膠質(zhì)瘤中MMP－2表達(dá)的陽(yáng)性率為46.7%（21／45），高于正常腦組織有顯著性差異（P＜0.01），提示MMP－2在腦膠質(zhì)瘤的發(fā)生、發(fā)展中也發(fā)揮著重要作用。MMP－2在低度惡性（I～I(xiàn)I級(jí)）腦膠質(zhì)瘤中的表達(dá)率25%，與高度惡性（III～I(xiàn)V級(jí)）腦膠質(zhì)瘤中的表達(dá)率64%相比，有顯著性差異（P＜0.01），提示MMP－2的表達(dá)水平與腦膠質(zhì)瘤的惡性程度密切相關(guān)，與相關(guān)文獻(xiàn)報(bào)道相符［6］。

為了更好了解兩者在腦膠質(zhì)瘤發(fā)生中的關(guān)系，將45例腦膠質(zhì)瘤中Ang－2和MMP－2蛋白的表達(dá)情況聯(lián)系起來(lái)分析，發(fā)現(xiàn)兩者表達(dá)呈正相關(guān)性（rs＝0.487，P＜0.01），提示在腦膠質(zhì)瘤的發(fā)生過(guò)程中Ang－2和MMP－2相互作用，降低血管壁的穩(wěn)定性和降解細(xì)胞外基質(zhì)，促進(jìn)血管生成。Ang－2的過(guò)表達(dá)可能是促進(jìn)MMP－2過(guò)表達(dá)的基礎(chǔ)，MMP－2的過(guò)表達(dá)可能是Ang－2促進(jìn)血管生成的機(jī)制，但仍有待進(jìn)一步研究。

總之，Ang－2和MMP－2在腦膠質(zhì)瘤發(fā)生、發(fā)展過(guò)程中，尤其是促進(jìn)腫瘤血管生成中發(fā)揮了重要作用，可以看做腦膠質(zhì)瘤惡性程度的判定指標(biāo)之一，甚至可作為未來(lái)腦膠質(zhì)瘤抗血管治療的靶點(diǎn)，具有重要的意義。

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