DRD2基因TaqIA多態性與興奮型毒品依賴遺傳易感性的Meta分析

鄧小冬，高 琴，張 偉，劉 云

(1.川北醫學院法醫系；2.南充市中心醫院血液科，四川 南充 637000)

目前，興奮型毒品已成為嚴重影響人類身心健康的公共衛生安全問題，是毒品依賴和濫用的主要類型之一，其中可卡因和甲基苯丙胺是當今最為流行的興奮型毒品(http://www.unodc.org/wdr/index.html)。毒品依賴是在生物-心理-社會因素綜合作用下發生的多因素疾病，遺傳與環境因素起著很重要的作用，遺傳因素起十分重要的作用(約60%)，其中DRD2基因(多巴胺受體-D2)對毒品依賴作用約占27%遺傳因素[1]。但DRD2基因TaqIA多態性與興奮型毒品依賴(可卡因、甲基苯丙胺)遺傳易感性的相關性研究結果并不一致[2-5]。因此，本研究運用Meta分析方法綜合探討DRD2基因TaqIA多態性與興奮型毒品依賴(可卡因、甲基苯丙胺)遺傳易感性的相關性，以期為防治興奮型毒品依賴及其并發癥提供一定的證據。

1 資料與方法

1.1 文獻檢索

以DRD2/ ANKK1、多巴胺受體-D2/錨蛋白重復和激酶域1、單核苷酸多態性、可卡因、甲基苯丙胺、依賴/濫用/成癮等為主題詞，檢索中國學術期刊全文數據庫(CNKI)、萬方數據庫和VIP數據庫；以D2 Dopamine receptor or dopamine receptor D2 or DRD2 or D2DR or ANKK1、polymorphisms or SNPs or mutation or variant or variation、cocaine or methamphetamine、abuse or misuse or dependence or addiction等為主題詞，檢索PubMed、Medline和Web of Science英文數據庫，收集國內外公開發表DRD2基因TaqIA多態性與興奮型毒品依賴(可卡因、甲基苯丙胺)遺傳易感性的相關文獻。檢索截至2013年10月。

1.2 文獻納入標準

(1)文獻語種限于中文和英文；(2)有關DRD2基因TaqIA多態性與興奮型毒品依賴(可卡因、甲基苯丙胺)遺傳易感性的人體研究；(3)研究數據符合病例-對照設計要求，且為一次文獻；(4)有等位基因頻率和基因型分布的數據，可計算相應OR值和95%CI；(5)對照組群體基因型分布符合Hardy-Weinberg平衡(HWE)；(6)不限文獻的研究樣本量；(7)如果同一作者或單位發表一篇以上相關或類似的文獻，納入最全或最新的文獻，排除重復的其它文獻；(8)未公開發表的文獻不納入。

1.3 數據的提取

兩名作者獨立提取符合納入標準的文獻數據。提取的原始數據由第三名作者核實，爭議之處由三名作者共同討論并達成一致。將提取的數據制成表格，表格中的內容包括文獻的第一作者、發表年份、人群的種族和國家、病例組及對照組分型數據、HWE、病例組診斷標準、基因分型技術、對照組的匹配情況以及文獻的質量評分結果。

1.4 文獻質量評估

參考以往文獻[6-8]質量評估方法和思路對納入文獻從以下幾方面進行質量評價：(1)病例組來源；(2)對照組來源；(3)病例組診斷標準；(4)基因分型的結果檢測；(5)HWE；(6)統計方法技術。由兩位作者采用統一的評分標準，獨立評分，而后交叉核對，最后由第三位作者核實。爭議之處由三位作者共同討論并達成一致。總分10分，大于或等于6分者為高質量文獻，反之，為低質量文獻。詳細評估標準，見表1。

表1 文獻質量評估細則

1.5 統計學分析

采用基因計數方法對每篇文獻中的DRD2基因TaqIA多態性基因的頻率進行計算，用卡方檢驗來分析對照組的HWE，P<0.05認為有統計學意義。

運用Meta 分析對DRD2基因TaqIA多態性與興奮型毒品依賴(可卡因、甲基苯丙胺)遺傳易感性的關系在不同遺傳模式進行異質性分析(異質模式：TC vs CC；同質模式：TT vs CC、顯性模式：TC/TT vs CC；隱性模式：TT vs CC/TC)，如納入研究間同質(PQ>0.1和I2<50%)，則采用固定效應模型進行合并分析；反之，則采用隨機效應模型進行合并分析[8-10]。然后計算出其合并OR 值及其95%CI。如果研究間存在異質性，運用亞組分析(毒品依賴種類、種族和質量評分)、Meta回歸、及結合Galbraith 圖尋找異質性來源。Meta回歸參數包括樣本量類型(≥500為大樣本，反之為小樣本)、基因分型技術、種族、質量評分、匹配情況以及對照組來源。敏感性分析用來評價Meta分析的可靠性；Egger’s分析和Begg’s分析對發表偏倚進行識別[11]。以上所有統計學分析采用Stata 11.0 軟件進行，以P<0.05為有顯著性統計學意義。

2 結果

2.1 納入研究的基本特征

初次檢索相關文獻59篇(英文數據庫59篇，中文數據庫0篇)，通過閱讀標題和摘要排除45篇，剩下的14 篇文獻通過閱讀全文和參考文獻增加5篇文獻，最后通過精讀全文進一步篩檢，排除了10篇文獻，最終符合納入標準的文獻9篇(可卡因依賴5篇[3-4，12-14]，甲基苯丙胺4篇[2，5，15-16])。文獻篩選流程，見圖1。9篇文高加索人群[3，13，16]和亞洲人群[2，5，15]各3篇、非洲人群2篇[12，14]、和混合人群1篇[4]。樣本量最少77例[5]，最大1 511例[4]。 所有研究均采用PCR-RFLP基因分型技術除Lohoff等[14]研究運用Assays-on-deman基因分型技術。大多數研究提供了人口學特征，2篇文獻描述年齡和性別匹配[3，5]、5篇研究性別匹配、 2篇文獻未描述匹配參數[4，14]。文獻質量評分顯示7篇文獻是高質量研究、2篇研究為低質量研究[5，16]。所有對照組均符合HWE。納入文獻的主要研究特征和基因型分布情況，見表2。

2.2 Meta分析結果

表3顯示DRD2基因TaqIA 多態性與興奮型毒品依賴易感性關聯在不同遺傳模式的主要Meta分析結果。DRD2基因TaqIA多態性與興奮型毒品依賴(可卡因、甲基苯丙胺)遺傳易感性在不同遺傳模式均無顯著統計學意義(TC vs CC：OR= 1.144，95%CI= 0.882～1.458，POR=0.311；TT vs CC：OR= 1.021，95%CI= 0.827～1.26，POR= 0.848；TC/TT vs CC：OR= 1.247，95% CI= 0.937～1.661，POR=0.13；TT vs CC/TC：OR= 1.024，95%CI= 0.841～1.247，POR= 0.813)。按照毒品依賴種類、種族和質量評分分別在不同遺傳模式進行亞組分析，其結果與整體Meta分析結果一致，均無顯著性統計意義(POR>0.05)。

2.3 異質性分析

異質性檢驗結果顯示TaqIA 多態性在同質和顯性遺傳模式存在異質性(TC vs CC：I2= 68.9%，PQ= 0.001；TC/TT vs CC：I2= 76.9%，PQ<0.001)(表3)。以樣本量大小、基因分型技術、種族、質量評分、匹配參數及對照組來源等參數進行Meta回歸分析，結果顯示上述參數并不是異質性來源(P>0.536)；毒品依賴種類、種族和質量評分進行亞組分析亦未發現異質性來源；Galbraith圖顯示Noble[3]、 Ballon[12]和Han[5]研究是顯著的離群研究(值)(圖2)，排除上述3篇文獻在不同遺傳模式下異質性顯著降低，同時總ORs和相應95%CI并沒有明顯改變(TC vs CC：I2=0.0%，PQ=0.745，POR=0.502，OR=0.955，95%CI=0.834～1.093；TT vs CC：I2=0.0%，PQ=0.983，POR=0.842，OR= 0.978，95%CI=0.788～1.215；TC/TT vs CC：I2=0.0%，PQ=0.866，POR=0.536，OR=0.960，95%CI=0.845～1.092；TT vs CC/TC：I2=0.0%，PQ=0.960，POR=0.969，OR=1.004，95%CI= 0.820～1.229)。表明上述3篇研究可能是異質性來源。

表2 納入研究的基本特征及各研究DRD2基因TaqIA多態性的基因型分布

DSM(Diagnostic and Statistical Manual)：診斷和統計手冊；ICD(International Classification of Diseases)：國際疾病分類；NA：未描述。

a 本研究自己計算已納入文獻中未直接給出的基因型個數；b 基因分型技術為Assays-on-demand。

表3 DRD2基因TaqIA 多態性與興奮型毒品依賴易感性關聯在不同遺傳模式的主要Meta分析結果

a.95% 可信區間；b.PQ和I2代表異質性檢驗值；c.當I2>50%且PQ<0.1時采用隨機效應模式；否則，采用固定效應模式。

2.4 發表偏倚及敏感性分析

發表偏倚用Begg和Egger分析提出的秩相關法或線性回歸法進行發表偏倚的識別和評估。Begg分析的漏斗圖顯示在不同遺傳模式下文獻間的對稱性均較好(圖3)；Egger線性回歸法分析表明在不同遺傳模式均無明顯的發表偏倚(P>0.055)，Begg和Egger分析說明Meta分析結果缺乏發表偏倚。

敏感性分析結果顯示在不同遺傳模式下順次刪除單個文獻，Meta分析的結果未發生明顯改變，表明當前Meta分析結果研究結果是穩定可靠的。

3 討論

多巴胺能信號通路是毒品依賴的重要組成部分，DRD2基因是毒品依賴、認知功能和精神障礙重要的遺傳因素[1，17-19]。DRD2基因位于11q23.2，編碼G蛋白偶聯受體，其多態性Taq1A(rs1800497，32806C/T) 位于3’-端非編碼區(3’-UTR)，是毒品依賴和濫用最常研究的多態性；有研究認為Taq1A多態性位于錨蛋白重復和激酶域1基因(ANKK1)第8外顯子(713Glu/Lys)，該多態性雖不會改變基因編碼蛋白的完整性，但可能會影響蛋白與其他物質結合的特異性[20]。

本研究未發現DRD2基因TaqIA多態性與興奮型毒品依賴(可卡因、甲基苯丙胺)存在相關性；按毒品濫用種類亞組分析也得到類似結果(P>0.05)。說明DRD2基因TaqIA多態性在興奮型毒品依賴(可卡因、甲基苯丙胺)的危險因素中不起主要作用。其可能原因：(1)不同毒品依賴可能涉及到不同的神經遞質，其依賴機制并不一樣[21]。本研究未發現TaqIA多態性與可卡因或甲基苯丙胺類毒品依賴有任何相關性；但Chen等[22]通過Meta分析發現TaqIA多態性的T等位基因增加阿片類依賴風險，說明不同毒品依賴機制并不一樣，需進一步研究毒品依賴機制驗證本實驗結果。(2)DRD2 基因TaqIA多態性可能與其他多態性存在連鎖不平衡，共同影響物質依賴行為的形成，導致Meta分析結果沒有顯著性差異。(3)毒品依賴的遺傳易感性可能受多個基因及其多態性影響，如DRD2、DRD3、DRD4、多巴胺轉運蛋白(MAT)等基因及其多態性與毒品依賴都有一定關系[12]。研究表明DRD2基因TaqIA多態性和DRD4基因48 bp VNTR相互作用有直接關系[23]。(4)毒品依賴可能受遺傳和環境因素共同影響，多數基因受環境因素的影響，在逆境中遺傳風險被放大，或在良好環境中遺傳風險被抑制[24]。(5)種族和人群的異質性并不能排除。Noble等[3]研究報道TaqIA多態性T等位基因在高加索人群與可卡因依賴有關，但其他種族人群卻是陰性結果[12，14]。(6)該Meta分析的樣本數量太少而引起的統計誤差不能忽視。納入Meta分析的9個研究實驗組和對照組分別是2 144例和2 245例，來自不同種族，可能導致實驗統計誤差，需擴大樣本量進行隨機、多中心試驗進一步予以確證。

Meta分析顯示DRD2基因TaqIA多態性與興奮型毒品依賴在某些遺傳模式下存在顯著異質性(表3)。Meta回歸和亞組分析均未發現異質性來源；Galbraith圖顯示Noble等[3]、Ballon等[12]和 Han等[5]文獻是顯著的離群研究(值)，排除上述3篇研究后在不同遺傳模式下異質性顯著降低，總ORs和相應95%CI并無實質改變，說明上述3篇文獻可能是異質性來源。Noble等[3]和 Ballon等[12]研究對象均是男性可能會造成某種選擇性偏倚，Han等[5]研究樣本量較少(實驗組37例和對照組40例)可能影響統計學力度而造成異質性來源。同時敏感性分析證實本研究結果是可靠的。

解釋Meta分析結果在時應當考慮本研究的一些局限：首先，本研究未納入其他語種以及未公開發表的研究，可能會造成某些偏倚；其次，當前Meta分析結果不能推廣在整個人群中運用，因相對較小的樣本數可能導致統計學差異；最后，本研究未提取DRD2基因其他多態性及其他基因的多態性，可能限制基因-基因相互作用的分析；同時多數研究缺乏有效環境因素數據，本研究亦沒有分析基因-環境的相互作用。因此，需隨機、多中心、大樣本的前瞻性試驗或全基因測序(GWAS)進一步驗證本實驗研究結果。

總之，當前Meta分析顯示DRD2基因TaqIA多態性可能與興奮型毒品依賴(可卡因、甲基苯丙胺)遺傳易感性沒有相關性。

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