c-ski在食管鱗狀細胞癌中的表達及意義

郭曉光，王 瓊，朱治鍵

(1.南充市中心醫院病理科，川北醫學院第二附屬醫院；2.川北醫學院病理教研室，四川 南充 637000)

食管癌(carcinoma of esophagus)是最常見的消化道惡性腫瘤之一。近年來對食管癌分子生物學的研究表明，食管癌的形成是細胞生長與增殖調控發生嚴重紊亂的結果，而癌基因和抑癌基因在腫瘤的發生、發展和治療方面都扮演著重要的角色，但確切的發病機制仍未清楚。ski基因作為細胞內的一個原癌基因，具有多種生物活性，參與體內多種病理生理過程。人的c-ski基因屬于 ski原癌基因家族，有研究表明它是轉化生長因子-β(transforming growth factor-beta，TGF-β)通路最主要的一個負性調控因子，它和Smad復合物的結合可以干擾 Smad 蛋白的磷酸化過程，然后拮抗TGF-β對正常組織細胞分裂生長的抑制效應[1-2]。

c-ski在食管癌中的研究較少，國內尚未見報道。本研究利用免疫組化及原位雜交方法，檢測84例食管鱗癌組織、24例食管上皮內瘤變組織中c-ski的表達情況，結合臨床病理各項指標，探討其在食管鱗癌發生發展過程中的作用，以期尋找食管鱗癌診斷及治療的新型基因靶點。

1 材料和方法

1.1 材料和試劑

材料：收集2005年1月至2007年12月間川北醫學院附屬醫院病理科確診的食管鱗癌組織84例，上皮內瘤變組織24例，正常食管組織22例。患者年齡38～74歲，平均年齡56歲；55歲以下27例，55歲及以上57例。腫瘤分化：高分化組29例，中分化組39例，低分化組16例。淋巴結轉移：有轉移組23例，無轉移組61例。根據2009年國際食管癌TNM分期標準：Ⅰ期33例，Ⅱ期39例，Ⅲ期12例。24例上皮內瘤變組織，年齡40～72歲，平均年齡52歲。并對食管鱗癌患者進行了隨訪，獲得62例(74%)隨訪資料；所選病例均有完整臨床資料和病理資料，所有病例均經病理復檢核實。另選22例因食管鱗癌行食管切除的上切緣組織(距癌組織大于2 cm，無癌殘留)作為對照組。

試劑：濃縮型兔抗人多克隆抗體c-ski，規格1.0 mL，購自北京博奧森生物技術有限公司；c-ski原位雜交試劑盒購自武漢博士德生物技術有限公司。免疫組化二抗試劑盒(SP試劑盒)，二氨基聯苯四鹽酸(DAB)購自福建邁新生物科技開發公司。

1.2 方法

對3組共130例食管組織作連續切片3張，厚度為3 μm，分別進行c-ski免疫組化染色及原位雜交染色。免疫組化染色采用SP法，原位雜交方法按說明書操作。用已知c-ski蛋白陽性的肺癌組織作為陽性對照，用 PBS 替換一抗做為空白對照。

1.3 結果判斷

c-ski蛋白免疫組化染色以在細胞膜/漿內出現棕黃色顆粒為陽性，c-ski mRNA原位雜交染色以在細胞核中出現棕褐色顆粒為陽性。每張切片隨機選擇 10個高倍視野，分別按照c-ski mRNA，c-ski蛋白陽性細胞數占視野中總細胞數的平均百分比計數，陽性細胞數大于等于10%為陽性(+)，陽性細胞數小于10%為陰性(-)。

1.4 隨訪

以信函、電話方式對所選病例進行隨訪，從術后第1天起，術后5年截止，隨訪60個月。

1.5 統計學分析

采用χ2檢驗和Spearman相關性分析，以P<0.05為有統計學意義，P<0.01為有高度統計學意義。生存分析采用Kaplan-Meier法，用對數秩檢驗圖表示，以P<0.05具有統計意義。所有統計數據均用SPSS16.0軟件分析完成。

2 結果

2.1 c-ski蛋白和c-ski mRNA在正常食管、食管上皮內瘤變、食管鱗癌組織中的表達情況

免疫組織化學結果顯示：c-ski蛋白陽性表達在胞膜/胞漿，呈棕黃色顆粒(圖1、圖2)。c-ski蛋白在正常食管組織，上皮內瘤變組織和食管鱗癌組織中陽性表達率分別為6.67%(6/22)、45.8%(11/24)、70.2%(59/84)，陽性率依次遞增，3組之間的差異有高度統計學意義(P<0.01)。原位雜交染色顯示：c-ski mRNA的表達陽性物主要位于胞核中，呈棕褐色顆粒狀(圖3、圖4)。在正常食管組織，上皮內瘤變組織，食管鱗癌組織中c-ski mRNA陽性表達率分別為13.6%、62.5%、92.9%，3組之間差異有高度統計學意義(P<0.01)(表1)。

2.2 c-ski蛋白的表達與臨床病理特征之間的關系

c-ski蛋白在食管鱗癌中的表達與TNM分期有相關性(P<0.05)，而與患者的年齡、性別、腫瘤分化程度、淋巴結轉移等均無相關性(表2)。

表1 c-ski mRNA與c-ski蛋白在正常食管上皮，上皮內瘤變，食管鱗癌組織中的表達情況

例數c-ski 蛋白陽性(%)c-ski mRNA陽性(%)食管上皮組織226(27.3)3(13.6)上皮內瘤變組織2411(45.8)15(62.5)食管鱗癌組織8459(70.2)?78(92.9)#

* χ2=15.186，P<0.01；# χ2=12.113，P<0.01。

表2 c-ski蛋白表達與食管鱗癌患者的臨床病理特征的關系

2.3 c-ski蛋白在食管鱗癌組織中的表達與患者五年生存率的關系

共隨訪食管鱗癌患者62例，c-ski蛋白陽性表達者術后5年生存率為64.1%，c-ski蛋白陰性表達者術后5年生存率為69.6%，二者差異不大。Kaplan-Meier生存曲線顯示食管鱗癌組織中c-ski蛋白表達陰性、陽性患者的五年生存時間無明顯關系(圖5)。

3 討論

3.1 c-ski在食管鱗癌中的表達情況及與臨床病理特征的關系

ski基因是生物細胞內的一個原癌基因，具有多樣的生物活性功能，參與了動物體內多種生理和病理過程[3-5]。人c-ski基因屬于ski 原癌基因家族，定位于人染色體的lq22-24，有6種不同片段長度的轉錄子，分別是1.0 kb，2.1 kb，3.0 kb，3.8 kb，4.7 kb和6.0 kb。最近關于c-ski研究認為，c-ski的表達失常與多種腫瘤的癌變相關，如在神經母細胞瘤、黑色素瘤、乳腺癌、甲狀腺癌、胃癌及前列腺癌中，c-ski表達均明顯升高[6-7]。

本文對84例食管鱗癌組織，24例上皮內瘤變組織和22例正常食管組織做c-ski蛋白的免疫組化染色，對c-ski mRNA進行原位雜交染色，并對c-ski蛋白的表達情況與臨床病理特征之間的相關性進行分析。實驗結果顯示，c-ski及c-ski mRNA在食管癌中的表達明顯高于上皮內瘤變組織和食管上皮組織。c-ski蛋白在食管癌中的高表達與腫瘤TNM分期密切相關，該結果與Fukuchi等[8]報道一致，提示c-ski可能是食管癌發生發展過程中的一個有意義的分子事件，可能為食管癌基因靶向治療提供一個新型的潛在作用靶點。但本研究同時還顯示，c-ski蛋白的陽性表達與患者的性別、腫瘤的分級、是否有淋巴結轉移及五年的生存時間無明顯關系。c-ski在腫瘤中的作用還有很多未知，有很大的研究空間。

3.2 c-ski蛋白表達情況與食管癌患者預后的關系

關于c-ski的表達與食管癌患者預后的相關研究，國內外均未見相關報道。有學者在研究胃癌、乳腺癌、甲狀腺癌、神經母細胞瘤等惡性腫瘤時發現c-ski的表達與患者的生存時間關系不大。本研究共隨訪食管鱗癌患者62例，c-ski蛋白陽性表達者與陰性表達者術后5年生存時間無明顯差異.這一研究結果與其他作者在胃癌中的研究結果一致[9]。我們認為患者生存時間的長短與多種因素相關，比如個體身體素質，年齡，心理，治療狀況等，而c-ski的表達作為其中的一個因素，對患者的預后起到多大影響，還需要進行更多、更長時間的回訪跟蹤研究。

【參考文獻】

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