Nestin 和Ki67在卵巢上皮性癌組織中的表達及臨床意義

段愛紅 孫志強 楊麗萍 胡志強

1.河北省邯鄲市中心醫院婦科，河北邯鄲056001；2.河北省邯鄲市中心醫院神經外科，河北邯鄲056001；3.河北省邯鄲市中心醫院放射科，河北邯鄲056001

Nestin 和Ki67在卵巢上皮性癌組織中的表達及臨床意義

段愛紅1孫志強2楊麗萍1胡志強3

1.河北省邯鄲市中心醫院婦科，河北邯鄲056001；2.河北省邯鄲市中心醫院神經外科，河北邯鄲056001；3.河北省邯鄲市中心醫院放射科，河北邯鄲056001

目的探討Nestin及Ki67在卵巢上皮性癌組織中的表達及其與臨床病理特征的關系。方法對2007年1月～2009年1月邯鄲市中心醫院婦科60例卵巢癌患者及20例卵巢正常患者的病理資料進行回顧性分析，采用免疫組化SP法檢測卵巢上皮性癌標本及正常組織中Nestin及Ki67的表達，分析并比較正常卵巢組織及不同病理類型、FIGO分期、殘余腫瘤直徑的卵巢組織中Nestin及Ki67的表達情況。結果①卵巢上皮性癌標本中Nestin和Ki67陽性表達率（38.5%、76.7%）明顯高于正常卵巢組織（5.0%、15.0%），兩者相比，差異均有統計學意義（均P＜0.05）。②組織分化程度高級別的卵巢癌組織中Nestin及Ki67陽性表達率明顯高于低級別者（P＜0.05）；FIGO分期越高、殘余腫瘤直徑越大，Nestin、Ki67陽性表達率越高（均P＜0.05）。③Nestin與Ki67在卵巢癌中的表達無明顯相關性（r=0.176，P=0.13）。結論Nestin與Ki67的表達與卵巢癌的發生、發展有密切關系，對Nestin與Ki67的檢測可用于判斷卵巢上皮性腫瘤的惡性程度及其預后。

卵巢癌；Nestin；Ki67；免疫組化

卵巢上皮性癌（epithelial ovaian cance，EOC）簡稱卵巢癌，占卵巢惡性腫瘤的90%，是病死率最高的生殖道惡性腫瘤，卵巢癌屬于對化療中-高度敏感腫瘤，目前的標準治療是腫瘤細胞減滅術輔以鉑類為基礎的6～8個療程的聯合化療。70%的患者停止化療后會復發，復發患者的治療仍以化療為主，但多數患者表現為化療耐藥，5年生存率為30%左右[1]。迄今，卵巢癌的病死率仍位于婦科惡性腫瘤之首。本研究采用免疫組化SP法檢測原發性卵巢癌中Nestin與Ki67的表達情況，并分析其與卵巢癌臨床病理的關系。

1 資料與方法

1.1 一般資料

對2007年1月～2009年1月邯鄲市中心醫院婦科60例卵巢癌患者的病理資料進行回顧性分析，所以卵巢癌患者術前均未接受化療或放療，術后均經病理確診，病歷資料完整。年齡31～66歲；漿液性腺癌25例，宮內膜樣癌24例，黏液性腺癌11例；2009年國際婦產科聯盟（FIGO）[2]手術-病理分期：Ⅰ期8例，Ⅱ期5例，Ⅲ期40例，Ⅳ期7例；組織分化程度低級別相當于FIGO高中分化（G1/G2）者38例、高級別相當于低分化（G3）者22例；術后殘余腫瘤直徑＜1 cm者48例，≥1 cm者12例。同時選擇同期20例因子宮肌瘤等子宮良性病變行手術治療的正常卵巢組織進行對照研究。

1.2 主要試劑

鼠抗人單克隆抗體及免疫組化S-P試劑盒購自福州邁新生物技術開發公司。免疫組化方法采用S-P，以PBS代替一抗為陰性對照，陽性對照片由福州邁新生物技術開發公司提供。

1.3 方法

采用免疫組化SP法檢測卵巢上皮性癌標本及正常卵巢組織中Nestin及Ki67的表達，具體方法按試劑盒說明書進行。

1.4 判斷標準

Nestin陽性細胞為細胞質內出現棕黃色顆粒，Ki67以細胞核出現棕黃色顆粒為陽性。判定標準：無棕黃色顆粒為（-）；染色弱、染色范圍＞50%或染色強、染色范圍25%～50%者為（＋）；染色強，染色范圍＞75%者為（+++）；介于（+）和（+++）之間為（++），（+）及以上者為陽性表達[3]。

1.5 統計學方法

采用SPSS 14.0統計學軟件進行數據分析，計數資料用率表示，組間比較采用χ2檢驗；Spearman相關性檢驗分析Nestin與Ki67在卵巢癌中表達的相關性，以P＜0.05為差異有統計學意義。

2 結果

2.1 Nestin與Ki67在正常卵巢及卵巢癌組織中的表達情況

Nestin的染色陽性為細胞質內出現棕黃色顆粒，Ki67的染色陽性為胞核內出現棕黃色顆粒（圖1、2）。Nestin及Ki67在正常卵巢組織中的陽性表達率（5.0%、15.0%）低于卵巢癌組織中（38.5%、76.7%），兩者相比，差異均有統計學意義（均P＜0.05）。見表1。

圖1 卵巢癌組織中Nestin的表達（DAB×400）

圖2 卵巢癌組織中Ki67的表達（DAB×400）

表1 不同卵巢組織中Nestin和Ki67的表達情況

2.2 卵巢癌組織中Nestin、Ki67的表達與臨床病理特征的關系

Nestin及Ki67在漿液性、黏液性、子宮內膜樣卵巢癌組織中的陽性表達差異無統計學意義（P＞0.05）。在不同的卵巢癌組織分化程度中，高級別者Nestin及Ki67的陽性表達率明顯高于低級別者，差異有統計學意義（P＜0.05）；在FIGOⅠ～Ⅱ期卵巢癌中Nestin及Ki67表達的陽性率明顯低于FIGOⅢ～Ⅳ期，兩者相比，差異有統計學意義（P＜0.05），殘余腫瘤＜1 cm與≥1 cm者Nestin陽性表達率分別為37.5%、75.0%，Ki67陽性表達分別為56.3%、91.7%，兩種殘余腫瘤相比，差異有統計學意義（P＜0.05）。見表2。

表2 不同臨床病理卵巢癌組織與Nestin和Ki67表達的關系

2.3 Nestin與Ki67在卵巢癌中表達的相關性

31例卵巢癌組織中，Nestin和Ki67均為陽性表達，Ki67表達陽性而Nestin陰性表達者23例，Nestin陽性表達而Ki67陰性表達者17例；采用計數資料的相關分析顯示，Nestin與Ki67在卵巢癌中的表達無明顯相關性（r=0.176，P=0.13）。

3 討論

腫瘤的發生、發展是多階段、多步驟演變的過程，最終在生物學方面表現為失控性生長，即過度增殖。腫瘤細胞的過度惡性增殖又為進一步侵入脈管發生遠處轉移奠定了基礎，而后者也正是導致死亡的最主要因素，在腫瘤研究中發現，Nestin是第Ⅳ類中間絲蛋白，目前被廣泛應用于神經干細胞的鑒定，最新研究發現Nestin在多種惡性腫瘤細胞中均有表達，如惡性膠質瘤、胃腸道間質腫瘤、睪丸間質腫瘤、惡性黑色素瘤，Nestin表達強度和腫瘤惡性程度和預后呈正相關，如在黑色素瘤中，惡性度越高Nestin表達越強，在遠處轉移的腫瘤中Nestin表達更強；惡性度低的大腦膠質瘤Nestin表達強度遠遠低于惡性度高者[4-7]。

本研究應用免疫組織化學方法首次檢測了Nestin在不同惡性程度卵巢癌中的表達，研究結果顯示，Nestin表達于部分卵巢癌標本中，在卵巢癌組織中Nestin的陽性表達率與組織類型無關（P＞0.05）；Nestin陽性表達率隨FIGO分期的進展而升高，Ⅲ～Ⅳ期與Ⅰ～Ⅱ期相比，差異有統計學意義（P＜0.05），殘余腫瘤＞1 cm組和殘余腫瘤＜1 cm組中陽性表達率分別為75.0%、37.5%，二者相比，差異有統計學意義（P＜0.05）。徐亮等[8]通過將Nestin和CD133作為干細胞標志物檢測其在膠質瘤中的表達，其結果顯示隨著膠質瘤腫瘤級別的增高，腫瘤標志物Nestin表達也增加，Kaplan-Meier生存曲線分析表明，Nestin高表達組患者生存率低，低表達組生存率高。

本研究提示Nestin可作為判斷卵巢癌惡性程度及預后的一種指標，Nestin表達越高，腫瘤組織中CSCs的數量越多，腫瘤的惡性程度就越高，在卵巢癌疾病發展過程中表現出耐藥，其預后越差，生存率越低，從而預測腫瘤的惡性程度及患者的生存率，為卵巢癌的診斷和預后判斷提供幫助。

Ki67是反映惡性腫瘤細胞增殖活性的一項重要分子標志，其表達范圍覆蓋了除G0期以外的各增殖周期細胞，是目前檢測腫瘤增殖活性和增殖速率最可靠的指標[9-11]。有研究認為Ki67可能是具有蛋白結合特性的重要結構，在細胞有絲分裂中起著維持規則DNA結構的重要作用，Ki67對于預見腫瘤生物學行為，評估預后和選擇適當的治療措施具有重大意義[12-15]。Ki67在漿液性腺癌、內膜樣癌、黏液性腺癌中的陽性表達差異無統計學意義（P＞0.05），說明Ki67表達與細胞類型無關。Ki67陽性表達率隨FIGO分期的進展而升高，Ⅲ期～Ⅳ期與Ⅰ期～Ⅱ期相比，差異有統計學意義；殘余腫瘤＜1 cm與殘余腫瘤≥1 cm的陽性表達相比有統計學意義（P＜0.05），這表明晚期及高級別卵巢癌具有更高的增殖活性，Ki67的表達可用于判斷卵巢癌惡性程度與與腫瘤的侵襲性，這與國內外學者的研究結果一致[16]。

綜上所述，腫瘤的生物學行為包括增殖、浸潤、轉移、復發等涉及到許多生物因子和蛋白的表達，本研究顯示，卵巢組織中Nestin和Ki67表達無明顯相關性，二者表達上調可能與卵巢癌的發生發展、浸潤、轉移過程相關，與患者的組織學類型無關。因此，本研究認為聯合檢測Nestin和Ki67有利于闡明二者在卵巢腫瘤發生發展、浸潤、轉移中的演變規律，為卵巢癌早期診斷提供參考依據。

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Expression and clinical significance of Nestin and Ki67 in epithelial ovarian cancer

DUAN Aihong1SUN Zhiqiang2YANG Liping1HU Zhiqiang31.Department of Gynecology,Central Hospital of Handan City,Hebei Province,Handan056001,China;2.Department of Neurosurgery,Central Hospital of Handan City,Hebei Province,Handan056001,China;3.Department of Radiology,Central Hospital of Handan City,Hebei Province,Handan056001,China

Objective To investigate the expression of Nestin and Ki67 in epithelial ovarian cancer and the relationship between their expression and clinicopathologic characteristics.Methods pathological files of 60 patients with epithelial ovarian carcinoma and 20 patients with nomal ovarian tissues from January 2007 to January 2009 in Gynecology Department of Central Hospital of Handan City were retrospective analyzed,the Nestin and Ki67 were detected by immunohistochemistry(SP method),the expression of Nestin and Ki67 in nomal ovarian and epithelial ovarian cancer tissues with different pathological pattern,FIGO stages and residual tumor size were analyzed and compared.Results①The positive expression rate of Nestin Ki67 in ovarian epithelial carcinomas(38.5%,76.7%)were higher than those in normal ovarian tissues(5.0%，15.0%),the differences were statistically significant(all P＜0.05).②The positive expression of Nestin and Ki67 in epithelial ovarian cancer tissues with high differentiation degree was higher than those in with low differentiation degree(all P＜0.05).The higher FIGO stage and larger residual tumor size,the higher positive expression of Nestin and Ki67 in epithelial ovarian cancer tissues.③There was no significant correlation between Nestin and Ki67 expression(r=0.176,P=0.13).Conclusion The expressions of Nestin and Ki67 are associated with the development and progression of the ovarian epithelial neoplasm,the detection of Nestin and Ki67 may be helpful to estimate the malignant degree and prognosis of the epithelial ovarian carcinoma.

Ovarian cancer;Nestin;Ki67;Immunohistochemistry

R737.31

A

1673-7210（2014）02（b）-0024-04

2013-10-12本文編輯：任念）

段愛紅（1974.9-），女，碩士研究生，副主任醫師；研究方向：婦科腫瘤。