醋莪術(shù)配方顆粒質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)研究

聶英軍，傅超美，傅舒，廖婉，嚴(yán)鑫，甘彥雄

·炮制制劑·

醋莪術(shù)配方顆粒質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)研究

聶英軍，傅超美，傅舒，廖婉，嚴(yán)鑫，甘彥雄

目的：建立醋莪術(shù)配方顆粒的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)。方法：采用薄層色譜法對(duì)醋莪術(shù)配方顆粒進(jìn)行定性分析，采用高效液相色譜法對(duì)醋莪術(shù)中的姜黃素進(jìn)行含量測(cè)定。結(jié)果：建立的薄層色譜圖中可檢視出醋莪術(shù)清晰的特征斑點(diǎn)；姜黃素在0.017μg～0.17μg范圍內(nèi)呈良好線性關(guān)系，回歸方程為：Y=1.1595X－0.0123，R=0.9998，平均回收率為97.33%（RSD為1.8%）。結(jié)論：本方法操作簡(jiǎn)便、科學(xué)、重現(xiàn)性好，可以有效控制醋莪術(shù)配方顆粒質(zhì)量。

]醋莪術(shù)；質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)；薄層色譜；高效液相色譜；姜黃素

醋莪術(shù)配方顆粒為姜科植物蓬莪術(shù)(Curcumap -haeocaulisVal.)的醋制品通過(guò)提取、分離、濃縮、干燥、成型等工藝環(huán)節(jié)制得的一種現(xiàn)代制劑[1～4]。單味中藥配方顆粒和傳統(tǒng)中藥飲片相比，具有體積小、便于攜帶和保存、質(zhì)量更穩(wěn)定可控等優(yōu)點(diǎn)。雖然中藥配方顆粒具有明顯優(yōu)勢(shì)，但研究基礎(chǔ)還很薄弱[5～7]。市售醋莪術(shù)配方顆粒的成分含量差異較大，本文旨在建立醋莪術(shù)有效的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)，以期為醋莪術(shù)配方顆粒的質(zhì)量控制奠定基礎(chǔ)[8,9]。

1 儀器與試藥

1.1 儀器

島津LC-10AT高效液相色譜儀（SPD-10AT紫外檢測(cè)器、LC-10AT色譜泵，江申JS-3030色譜工作站）。

1.2 試藥

姜黃素(批號(hào)：120420)、莪術(shù)二醇（批號(hào)：120514）、吉馬酮（批號(hào)：120228）、莪術(shù)醇(批號(hào)：120304)、莪術(shù)二酮（批號(hào)：120611），均購(gòu)于四川省維克奇生物科技有限公司；水為高純水，乙腈為色譜純，其余試劑均為分析純。

1.3 藥材

醋莪術(shù)飲片分別購(gòu)于四川新荷花飲片有限公司（批號(hào)：1300521）、重慶太極集團(tuán)（批號(hào)：1301106）、四川德仁堂飲片有限公司（批號(hào)：130614）。藥材經(jīng)成都中醫(yī)藥大學(xué)中藥標(biāo)本中心盧先明教授鑒定為姜科植物蓬莪術(shù)（Curcumaphaeocaulis Val.）的干燥根莖，符合《中國(guó)藥典》2010年版一部“莪術(shù)”項(xiàng)下有關(guān)規(guī)定。醋莪術(shù)配方顆粒由實(shí)驗(yàn)室自制。

2 方法與結(jié)果

2.1 薄層色譜鑒別

2.1.1 對(duì)照品溶液制備 取莪術(shù)二酮、莪術(shù)醇、吉馬酮、莪術(shù)二醇對(duì)照品，加入無(wú)水乙醇制成每1 mL含莪術(shù)二酮0.09 mg、莪術(shù)醇0.11 mg、吉馬酮0.08 mg、莪術(shù)二醇0.1 mg的溶液，作為混合對(duì)照品溶液。

2.1.2 供試品溶液制備 取醋莪術(shù)配方顆粒0.5 g，加石油醚(30 ℃～60 ℃)10 mL，超聲30分鐘，離心，濾過(guò)，取上層清液揮干，加無(wú)水乙醇定容至1 mL，作為供試品溶液。另取醋莪術(shù)飲片6 g，以相同方法制備對(duì)照藥材溶液。

2.1.3 陰性溶液 取糊精適量，加無(wú)水乙醇制成每1 mL含糊精0.1 mg的溶液。

2.1.4 薄層色譜試驗(yàn) 按《中華人民共和國(guó)藥典》2010年版薄層色譜法(附錄ⅥB)試驗(yàn)，吸取上述兩種溶液各10 μL，分別點(diǎn)于同一硅膠G薄層板上，以環(huán)己烷-醋酸乙酯（80:20）為展開(kāi)劑，展開(kāi)，取出，晾干，噴以1%香草醛硫酸溶液，在105 ℃加熱至斑點(diǎn)顯色清晰，在紫外光燈(365 nm)下檢視，供試品色譜中，在與對(duì)照品色譜相應(yīng)位置上，具有相同顏色斑點(diǎn)，而陰性對(duì)照無(wú)干擾。結(jié)果見(jiàn)圖2。

圖1 醋莪術(shù)飲片薄層色譜鑒別

由本實(shí)驗(yàn)對(duì)比結(jié)果可知：薄層色譜展開(kāi)斑點(diǎn)分離度較好，Rf值在0.3～0.8之間，陰性對(duì)照無(wú)干擾。

2.2 姜黃素HPLC含量測(cè)定

2.2.1 色譜條件 色譜柱：Dikma Diamonsil C18柱（Dikma公司，5 μm，4.6 mm×250 mm）；檢測(cè)波長(zhǎng)：420 nm；流動(dòng)相：乙腈-4%冰醋酸溶液(45：55)；流速1 mL．min-1；柱溫30 ℃；進(jìn)樣量10 μL。對(duì)照品、供試品色譜圖見(jiàn)圖2、圖3。

2.2.2 對(duì)照品溶液制備 精密稱定姜黃素對(duì)照品，置于15 mL容量瓶中，加入甲醇使其溶解，補(bǔ)重稀釋至刻度，制成濃度為0.0085 mg．mL-1的溶液，作為對(duì)照品溶液。

2.2.3 供試品溶液制備 精密稱定醋莪術(shù)配方顆粒0.5g（過(guò)2號(hào)篩），置于具塞三角燒瓶中，加入50 mL甲醇，稱重，使用超聲處理40 min(40 KHz，250 W)，稱重，加入甲醇至刻度，濾過(guò)，將濾液轉(zhuǎn)移于蒸發(fā)皿之中，重復(fù)提取兩次，將溶劑揮干，再加入5 mL甲醇溶解殘?jiān)瑸V過(guò)，定容于5 mL容量瓶中。

圖2 姜黃素對(duì)照品HPLC色譜圖

圖3 醋莪術(shù)配方顆粒HPLC色譜圖

2.2.4 線性關(guān)系考察 精密吸取濃度0.0085 mg．mL-1的姜黃素對(duì)照品溶液2,4,8,10,14,20 μL，使用上述色譜條件進(jìn)行測(cè)定，采集峰面積數(shù)值，以峰面積的平均值作為縱坐標(biāo)，以姜黃素含量作為橫坐標(biāo)，可得標(biāo)準(zhǔn)回歸曲線，以進(jìn)樣量X（μg），峰面積數(shù)值Y為坐標(biāo)軸，進(jìn)行線性回歸得回歸方程：Y=1.1595X－0.0123，R=0.9998。結(jié)果表明：姜黃素在0.017 μg～0.17μg范圍內(nèi)呈良好線性關(guān)系。

2.2.5 精密度 精密吸取姜黃素對(duì)照品溶液10 μL，連續(xù)6次進(jìn)樣，采集峰面積數(shù)值，由試驗(yàn)結(jié)果可知，姜黃素峰面積的相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差較小，RSD為0.11%，精密度良好。

2.2.6 穩(wěn)定性 精密吸取姜黃素對(duì)照品溶液、醋莪術(shù)配方顆粒供試品溶液，置室溫下保存0,2,4,6,8,12,18 h時(shí)間進(jìn)樣，每次進(jìn)樣10 μL，采集峰面積數(shù)值，由試驗(yàn)結(jié)果可知，姜黃素對(duì)照品峰面積RSD為1.28%，醋莪術(shù)配方顆粒供試品峰面積RSD為0.635%，對(duì)照品與供試品在18 h內(nèi)穩(wěn)定性均較好。

2.2.7 重復(fù)性 取同批次樣品6組，按照擬定的含量測(cè)定方法進(jìn)行操作，各進(jìn)樣10 μL。由試驗(yàn)結(jié)果可知，姜黃素峰面積RSD為2.06%，重復(fù)性良好。

2.2.8 加樣回收率考察 精密稱取醋莪術(shù)配方顆粒6組，每組1 g，每組加入姜黃素對(duì)照品0.0450 mg，以“2.2.1”項(xiàng)下含量測(cè)定方法進(jìn)行測(cè)定，結(jié)果見(jiàn)表1。

表1 加樣回收率考察結(jié)果（n=6）

由試驗(yàn)結(jié)果可知，平均回收率為97.33%，姜黃素峰面積RSD為1.8%，加樣回收率較好。

2.2.9 樣品測(cè)定 精密稱定不同批次制得的醋莪術(shù)配方顆粒，每批次三份，每份1g，按照“2.2.2”項(xiàng)下方法制備供試品溶液，進(jìn)樣10 μL，采集峰面積數(shù)值，經(jīng)計(jì)算得姜黃素含量，結(jié)果見(jiàn)表2。

表2 樣品含量測(cè)定結(jié)果

三個(gè)批次配方顆粒中的姜黃素平均含量為0.0479 mg．g-1。

3 討論

本實(shí)驗(yàn)按照《中國(guó)藥典》2010版一部莪術(shù)項(xiàng)下的鑒別方法進(jìn)行實(shí)驗(yàn)，能檢視出莪術(shù)的特征斑點(diǎn)，但斑點(diǎn)分離度較差，經(jīng)過(guò)調(diào)整展開(kāi)劑類型，使用環(huán)己烷-醋酸乙酯（80:20）為展開(kāi)劑展開(kāi)后，比較藥典方法TLC圖譜結(jié)果，發(fā)現(xiàn)環(huán)己烷-醋酸乙酯（80:20）為展開(kāi)劑的譜圖中姜黃素鑒別斑點(diǎn)清晰，展開(kāi)效果更好，綜合評(píng)價(jià)后，選擇其為薄層展開(kāi)劑。

姜黃素作為醋莪術(shù)配方顆粒的評(píng)價(jià)指標(biāo)性成分，通過(guò)實(shí)驗(yàn)結(jié)果可知，該方法科學(xué)準(zhǔn)確，具有較好的重現(xiàn)性，能夠很好的控制醋莪術(shù)配方顆粒的質(zhì)量。

以醋莪術(shù)配方顆粒中姜黃素含量作為評(píng)價(jià)指標(biāo)成分，分別考察了提取方式（超聲、回流、索式）、提取溶劑（70%乙醇、水、不同濃度甲醇）、超聲時(shí)間，超聲頻率，最終確定加入50 mL甲醇，超聲處理40 min(40 KHz，250 W)。通過(guò)實(shí)驗(yàn)結(jié)果可知，該方法科學(xué)準(zhǔn)確，具有較好的重現(xiàn)性，能夠很好的控制醋莪術(shù)配方顆粒的質(zhì)量。

[1] 張廷模.臨床中藥學(xué)[M].北京:中國(guó)中醫(yī)藥出版社,2006:567.

[2] 廖婉,傅超美,章津銘,等.醋莪術(shù)對(duì)氣滯血瘀證血液流變學(xué)影響的表征及譜效相關(guān)性研究[J].中成藥,2013,35(2):330.

[3] 廖婉,傅超美,章津銘,等.醋莪術(shù)飲片HPLC指紋圖譜研究[J].中藥材,2012,35(10):1582.

[4] 廖婉,傅超美,章津銘,等.醋莪術(shù)飲片質(zhì)量控制方法的研究[J].華西藥學(xué)雜志,2012,27(4):447.

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（責(zé)任編輯：何瑤）

Research on the quality standards of dispensing granules of Ezhu prepared with vinegar

/NIE Ying-jun, FU Chao-mei, FUShu, LIAO Wan, YAN Xin, GAN Yan-xiong// ( Pharmacy College, Chengdu University of Traditional Chinese Medicine; The Ministry of Education Key Laboratory of Standardization of Chinese Herbal Medicine; State Key Laboratory Breeding Base of Systematic Research, Development and Utilization of Chinese Medicine Resources Co-founded by Sichuan Province and MOST, Chengdu 611137, China)

Objective: To establish the quality standards of dispensing granules of Ezhu prepared with vinegar. Method: Thin layer chromatography (TLC) was used in qualitative analysis of dispensing granules of Ezhu prepared with vinegar. High performance liquid chromatography (HPLC) method was applied in the content determination of curcumine in dispensing granules of Ezhu prepared with vinegar. Result: The characteristic spots of dispensing granules of Ezhu prepared with vinegar were clearly detected in the established TLC chromatography. Curcumine had good linear relationship within the concentration range of 0.017μg～0.17μg. The regression equation was: y=1.1595x-0.0123( R =0.9998). The average recovery was 97.33% (RSD was 1.8%). Conclusion: The method is simple, scientifc, and good reproducibility, and can effectively control the quality of dispensing granules of Ezhu prepared with vinegar.

Ezhu prepared with vinegar; quality standards; Thin layer chromatography; High performance liquid chromatography; curcumine

R 283.6

A

1674-926X(2014)02-008-03

四川省科技支撐計(jì)劃（2013S20123）；四川省中醫(yī)藥管理局科技專項(xiàng)（2012-E-041）；四川省科技創(chuàng)新苗子工程資助項(xiàng)目（20133006）

成都中醫(yī)藥大學(xué)藥學(xué)院 中藥材標(biāo)準(zhǔn)化教育部重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室 中藥資源系統(tǒng)研究與開(kāi)發(fā)利用省部共建國(guó)家重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室培育基地，四川 成都 611137

聶英軍，碩士在讀，主要從事中藥新制劑、新技術(shù)與新工藝研究 Email:389916897@qq.com

傅舒，助教，主要從事中藥新制劑、新技術(shù)與新工藝研究 Email:fushu317@126.com

2013-12-01