藏藥“俄色”的薄層色譜研究

夏冬梅，李敏，王道清，楊冰月，盧道會

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藏藥“俄色”的薄層色譜研究

夏冬梅，李敏，王道清，楊冰月，盧道會

目的：建立藏藥“俄色”的薄層色譜鑒別方法。方法：通過對提取試劑及展開系統進行系統的考察，建立以根皮素對照品為對照、以氯仿-甲醇-甲酸(8:2:0.1)為展開系統的薄層色譜鑒別方法。結果：不同批次俄色藥材在與對照色譜相應的位置上，顯相同顏色的熒光斑點，能夠有效的對“俄色”進行鑒別。結論：首次建立了藏藥“俄色”的薄層鑒別方法，該方法的Rf值適中，斑點清晰，具有較好的適應性，重現性好，為完善其質量標準奠定了基礎。

]俄色；根皮素；薄層色譜

藏藥“俄色”，來源于薔薇科蘋果屬隴東海棠系植物變葉海棠 Malus toringoides ( Rehd.) Hughes 或花葉海棠Malus transitoria ( Batal.) Schneid 的干燥葉，始載于《晶鏡本草》，具有保肝利膽、除膩滌滯、攻堅化積等功效，現代研究表明，“俄色”具有降血脂、降血壓、降血糖的功效[5～8]。分布于我國西藏、四川、青海、甘肅等地。金強[9]等人，通過對四川阿壩州蘋果屬植物野生資源調查，發現變葉海棠和花葉海棠在阿壩州均有分布。2012年全國第四次中藥資源普查發現，變葉海棠和花葉海棠在甘孜州資源分布也十分廣泛。

在前期，通過對其化學成分分析，分離出根皮素單體化合物，現代藥理研究表明，根皮素具有抗癌、保護心血管、抗氧化、抑制骨質疏松等活性[10～14]。因此，本文以根皮素為對照品，對“俄色”進行了系統的薄層色譜研究，以便為該民族藥的科學鑒定、質量控制以及合理開發提供依據。

1 實驗材料

1.1 材料來源

藥材樣品均為2011年從四川省甘孜州收集而得，經成都中醫藥大學中藥鑒定教研室李敏教授鑒定為薔薇科蘋果屬植物變葉海棠 Malus toringoides (Rehd.) Hughes 和花葉海棠Malus transitoria (Batal.) Schneid的干燥葉 。具體情況見表1。

表1 實驗樣品來源表

BY-6 2011/07/30 甘孜州爐霍縣仁達鄉BY-7 2011/08/15 甘孜州爐霍縣仁達鄉BY-8 2011/08/30 甘孜州爐霍縣仁達鄉BY-9 2011/09/8 甘孜州爐霍縣仁達鄉BY-10 2011/09/28 甘孜州爐霍縣仁達鄉花葉海棠 HY-1 2011/05/15 甘孜州爐霍縣格魯壩子鄉HY-2 2011/05/30 甘孜州爐霍縣格魯壩子鄉HY-3 2011/06/15 甘孜州爐霍縣格魯壩子鄉HY-4 2011/06/30 甘孜州爐霍縣格魯壩子鄉HY-5 2011/07/15 甘孜州爐霍縣格魯壩子鄉HY-6 2011/07/30 甘孜州爐霍縣格魯壩子鄉HY-7 2011/08/15 甘孜州爐霍縣格魯壩子鄉HY-8 2011/08/30 甘孜州爐霍縣格魯壩子鄉HY-9 2011/09/3 甘孜州爐霍縣格魯壩子鄉HY-10 2011/09/28 甘孜州爐霍縣格魯壩子鄉

1.2 試藥與試劑

根皮素對照品（自制對照品，純度99.7%），硅膠G(青島海洋化工廠)，羧甲基纖維素鈉（成都市科龍化工試劑廠），其余試劑均為分析純。

2 試驗方法

2.1 提取溶劑及制樣方法的考察

①稱取變葉海棠葉粉末3 g，加水50 mL，超聲提取30 min，過濾，濾液蒸干，殘渣加2mL甲醇溶解。

②稱取變葉海棠葉粉末3 g，加40%乙醇溶液50 mL，超聲提取30 min，過濾，濾液蒸干，殘渣加2mL甲醇溶解。

③稱取變葉海棠葉粉末3 g，加60%乙醇溶液50 mL，超聲提取30 min，過濾，濾液蒸干，殘渣加2mL甲醇溶解。

④稱取變葉海棠葉粉末3 g，加80%乙醇溶液50 mL，超聲提取30 min，過濾，濾液蒸干，殘渣加2 mL甲醇溶解。

⑤稱取變葉海棠葉粉末3 g，加無水乙醇溶液50 mL，超聲提取30 min，過濾，濾液蒸干，殘渣加2 mL甲醇溶解。

⑥稱取3 g變葉海棠粉末，加40%乙醇50 mL超聲提取1 h，過濾，濾液蒸干后加水10 mL溶解，水液加乙酸乙酯振搖提取兩次，每次20 mL，合并乙酸乙酯，蒸干，用2 mL甲醇溶解。

⑦稱取3 g變葉海棠粉末，加40%乙醇50 mL超聲提取30 min，過濾，濾液蒸干后加水10 mL溶解，石油醚（60～90℃）洗滌兩次，每次20 mL，棄去石油醚液，水液加乙酸乙酯振搖萃取兩次，每次20 mL，合并乙酸乙酯，蒸干，用2 mL甲醇溶解。

將上述7種溶劑的提取液點于硅膠G薄層板上展開，結果表明，方法②的色譜斑點清晰，斑點多，根皮素的斑點大，且制樣方法簡單。

2.2 稱樣量的考察

取變葉海棠葉粉末3、2、1、0.5 g，分別加入40%的乙醇50 mL，超聲30 min，濾液蒸干，殘渣加2 mL甲醇溶解。

結果表明，稱樣量0.5 g色譜斑點清晰，顏色適中，分離度最好。

2.3 提取溶劑用量的考察

稱取變葉海棠葉粉末0.5 g，加40%乙醇溶液20 mL、30 mL、40 mL、50 mL，進行超聲提取，過濾，取續濾液，蒸干加2mL甲醇溶解。

結果表明，溶劑用量為20mL的色譜斑點顏色較淺，效果較差，溶劑用量為30 mL、40 mL、50 mL的色譜斑點清晰，效果較好，且差別不大，故選用40%乙醇30 mL提取。

2.4 展開劑的考察

①乙酸乙酯:丁酮:甲酸:水=5:3:1:1；②氯仿:甲醇:乙酸=8:2:0.1；③ 乙酸乙酯:丁酮:甲醇:水=5:3:1:1；④ 甲苯:乙酸乙酯:丙酮:甲酸:水=2.5:4.5:4.5:0.85:0.6；⑤氯仿:甲醇:甲酸=8:2:0.1；以上5個展開系統展開前須先用展開劑飽和30 min后，上行展開。

結果表明，以氯仿:甲醇:甲酸（8:2:0.1）分離度最好，斑點清晰，Rf值適中。

2.5 點樣量的考察

對照品、樣品點樣量分別為3.5 μl，7 μl、10 μl、15 μl，于硅膠G薄層板上展開，結果表明，對照品、樣品的點樣量均在7 μl時分離效果好，斑點清晰。

2.6 方法的確定及樣品鑒別

取本品粉末0.5 g，加40%乙醇溶液25 mL，超聲30 min，濾過，蒸干，殘渣加甲醇2 mL使溶解，作為供試品溶液。另取根皮素對照品，加甲醇制成每l mL含0.5 mg的溶液，作為對照品溶液。照薄層色譜法（附錄ⅥB)試驗，吸取供試品溶液、對照品溶液各7μl，分別點于同一硅膠G薄層板上，以氯仿-甲醇-甲酸（8:2:0.1）為展示劑，展開，取出，晾干，噴以3%三氯化鋁乙醇溶液，晾干，置紫外光燈（365 nm）下檢視，供試品色譜中，在與對照品色譜相應的位置上，顯相同顏色的熒光斑點。

取變葉海棠和花葉海棠各10批，按上述試驗方法，薄層鑒別圖見圖1、2。結果表明，供試品色譜中，在與對照品色譜相應的位置上，均顯相同顏色的亮藍色熒光斑點。

圖1 不同批次的變葉海棠薄層色譜圖

圖2 不同批次的花葉海棠薄層色譜圖

3 討論

3.1 目前藏藥“俄色”尚沒有建立其質量標準，也沒有有關薄層色譜鑒別研究的報道，本文從藥材質量的控制研究出發，首次建立了藏藥“俄色”的薄層色譜鑒別方法，該方法對“俄色”中根皮素的鑒別有較好的適應性，該方法簡便，重現性較好，為藏藥“俄色”質量標準的建立奠定了良好的基礎。

3.2 以上“俄色”各樣品薄層色譜中，變葉海棠樣品薄層色譜中，BY-6、BY-8、BY-9、 BY-10樣品在與對照品色譜相應的位置上，亮藍色熒光斑點較弱；花葉海棠樣品薄層色譜中，HY-1、HY-3、HY-4、HY-10號樣品在與對照品色譜相應的位置上，亮藍色熒光斑點較弱，其余主要色譜斑點的熒光強弱有一定差異，這可能與樣品的采收時間、地理位置不同有關。

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（責任編輯: 胡慧玲）

The research of Tibetan medicine "Ese" with TLC

/XIA Dong-mei, LI Min, WANG Dao-qing, YANG Bing-yu, LU Dao-hui//(Pharmacy College, Chengdu University of Traditional Chinese Medicine; The Ministry of Education Key Laboratory of Standardization of Chinese Herbal Medicine; State Key Laboratory Breeding Base of Systematic Research, Development and Utilization of Chinese Medicine Resources Co-founded by Sichuan Province and MOST, Chengdu 611137, China )

Objective: To establish TLC identifcation method for Ese. Method: By means of systematic investigation on extraction reagent and the developing solvent, TLC identifcation method with phloretin as reference substance, and chloroformmethanol-formic acid (8:2:0.1) as developing solvent was established. Result: Different batches of “Ese” had fuorescent spots of the same color as phloretin. Conclusion: The method of TLC on Tibetan medicine “Ese” is frstly established. The Rf value is moderate and the spots are clear. The method is adaptable and reproducible, which provides a basic for the quality control of “Ese”.

Ese; phloretin; TLC

R 284

A

1674-926X(2014)02-007-03

全國第四次資源普查(No：2012-H-100)；四川省2013年藏藥材質量標準研究

成都中醫藥大學藥學院 中藥材標準化教育部重點實驗室 中藥資源系統研究與開發利用省部共建國家重點實驗室培育基地，四川 成都 611137

夏冬梅(1988-)，女，碩士研究生，研究方向：中藥品種、質量與資源研究

Tel:13568832468 Email:674991089@qq.com

李敏（1962-），教授，博士生導師，研究方向：中藥品種、質量及資源研究

Tel:13980038316 Email:028limin@163.com

2013-10-31