延齡草中總皂苷的含量測定

羅方利，郭力，許莉，貝圓

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延齡草中總皂苷的含量測定

羅方利，郭力，許莉，貝圓

目的：建立延齡草總皂苷的含量測定方法。方法：以薯蕷皂苷元為對照品，采用分光光度法，高氯酸顯色，在408nm處測定吸光度，計算延齡草中總皂苷的含量。結果：薯蕷皂苷元在0.01～0.06mg．mL-1的濃度范圍內與吸光度值呈良好線性關系（R2=0.9996），方法的平均回收率為99.43%，RSD為2.64% 。結論：建立了延齡草中總皂苷含量測定方法，該方法操作簡便、準確、靈敏、重現性好，可用于延齡草的質量控制。

]延齡草；總皂苷；薯蕷皂苷元；分光光度法

延齡草（Trillium tschonoskii Maxim.）為百合科植物，又名頭頂一顆珠，主產于西藏、云南、四川、陜西、甘肅、湖北、河南、安徽、浙江、福建，生于海拔1000～3200米陰濕處。味甘，性平，有小毒，是傳統的名貴中藥，也是土家族著名民族藥之一[1]。從延齡草屬植物中分離得到的次生代謝產物包括甾體皂苷、黃酮苷、倍半萜苷、苯丙素苷等類型的化合物。其中以甾體皂苷為主，具有鎮靜安神、祛風活血、延年益壽等功效，主治頭暈目眩、失眠、跌打損傷、外傷出血、神經衰弱、高血壓、腦震蕩后遺癥等[2,3]。目前，對延齡草的化學成分分離和藥理活性的研究較多，而對其含量測定尚無系統性研究，因此本實驗旨在對延齡草總皂苷進行含量測定，為延齡草藥材的規范化和進一步的開發利用提供科學依據。

1 儀器與試藥

紫外-可見分光光度儀（UV-1100，上海天美科學儀器有限公司），Sartorius系列電子分析天平（BP211D，德國賽多利斯有限公司），超聲波清洗器（KQ3200E，昆山市超聲儀器有限公司），優普系列超純水器（UPH-I，成都超純科技有限公司）。

薯蕷皂苷元對照品（中國藥品生物制品檢定所，批號：1539-200001，供含量測定用）；實驗所用試劑均為分析純；延齡草藥材采自四川省南江縣，經成都中醫藥大學中藥鑒定教研室李敏教授鑒定確認為百合科延齡草屬植物延齡草(Trillium tschonoskii Maxim.）的干燥根莖。

2 方法與結果

2.1 對照品溶液的制備

精密稱取薯蕷皂苷元對照品適量，加甲醇制得0.1mg/mL的對照品溶液。

2.2 供試品溶液的制備

精密稱取延齡草藥材粉末0.1g，加60%乙醇提取2次，每次50mL，每次1h，合并濾液，揮至無醇味，用水飽和正丁醇萃取3次，每次40mL，合并正丁醇液，揮干，殘渣加甲醇溶解并定容至10mL，作為供試品溶液。

2.3 測定波長的選擇

分別取對照品溶液、供試品溶液0.3mL，置于10mL的具塞刻度試管中，揮干溶劑，精密加入高氯酸5mL，置25℃水浴中加熱25min，取出冷卻至室溫。以高氯酸為空白對照，在紫外-可見分光光度計上于300～ 600nm范圍內掃描測定紫外可見吸收光譜。結果對照品與供試品溶液的最大吸收波長均為408nm。

2.4 標準曲線的繪制

精密吸取薯蕷皂苷元對照品溶液0.1，0.2，0.3，0.4，0.5，0.6mL，置于10mL的具塞刻度管中，揮干溶劑，精密加入高氯酸5mL，密塞搖勻，置25℃恒溫水浴鍋中保溫25min，取出冷卻至室溫。以高氯酸為空白對照, 在408nm波長處測定吸收，繪制標準曲線。以含量（C）與吸光度（A）繪制標準曲線，結果表明，薯蕷皂苷元在0.01～ 0.06mg．mL-1范圍內呈良好的線性關系，其回歸方程為：A =10.500C-0.0420，R2= 0.9996。

2.5 精密度試驗

精密吸取對照品溶液0.2 mL，按“2.4”項下方法測定吸光度，測定結果并計算RSD為0.74%( n = 5)，表明精密度良好 。

2.6 穩定性試驗

取同一供試品溶液，按“2.4”項下方法測定吸光度，測定其在不同時間的吸光度，結果表明，吸光度值在0～2h內RSD為0.92%，因此測定應控制在60 min內完成。

2.7 重復性試驗

稱取同一批樣品粉末，按“2.2”項下方法依法制備供試品溶液，按“2.4”項下方法測定吸光度，測定結果并計算RSD為1.05%。

2.8 加樣回收率試驗

稱取已知含量的延齡草粉末0.05g，共9份，分別精密加入1.02mg/mL的薯蕷皂苷元對照品1.0，1.2，1.4mL，按“2.2”項下方法處理樣品，按“2.4”項下方法測定吸光度，回收率99.43%，RSD為2.64%，結果表明，加樣回收率及相對標準偏差均符合要求。

表1 薯蕷皂苷元加樣回收率試驗結果表

2.9 樣品含量測定

按照“2.2”項下操作方法，制備5批供試品溶液，按“2.4”項下方法測定吸光度，結果見表2。

表2 樣品含量測定結果

3 討論

本文運用高氯酸、濃硫酸∶甲醇（4∶1）、5%香草醛-冰醋酸∶高氯酸（2∶8）分別對供試品溶液進行顯色，在200～700nm波長測定吸收光譜。結果顯示以高氯酸為顯色劑重現性好。由于比色法所顯顏色隨顯色溫度和時間變化而變化，因此，必須嚴格控制條件，盡量排除干擾。延齡草中所含化學成分除皂苷類外，尚有大量糖類、甾酮等物質，提取物直接進行比色測定干擾較大，誤差較大，因此我們對延齡草藥材進行萃取以除去部分對顯色反應有干擾的物質。

[1] 謝宗萬.全國中草藥匯編(上冊)[M].第二版.北京:人民衛生出版社, 2000: 225.

[2] 喻玲玲,鄒坤.延齡草屬植物的化學成分及藥理活性研究進展[J].中成藥,2008,30 (9):1350.

[3] 喻玲玲,鄒坤.延齡草總皂苷體內外抗腫瘤作用研究[J].2008,31(5):733.

（責任編輯: 胡慧玲）

Content determination of total saponins in Trillium tschonoskii Maxim. /LUO Fang-li,

GUO Li, XU Li, BEI Yuan //(Pharmacy College, Chengdu University of Traditional Chinese Medicine; The Ministry of Education Key Laboratory of Standardization of Chinese Herbal Medicine; State Key Laboratory Breeding Base of Systematic Research, Development and Utilization of Chinese Medicine Resources Co-founded by Sichuan Province and MOST, Chengdu 611137, China )

s] Objective: To establish the assay method of total saponins in Trillium tschonoskii Maxim. Method: The total saponins in Trillium tschonoskii Maxim. was calculated with diosgenin as reference. The medicine was in coloration with perchloric acid, and absorbability was detected at 408 nm by adopting spectrophotometric method. Result: The calibration curve was linear in the range of 0.01 mg．mL-1～ 0.06 mg．mL-1（R2= 0.9996）. The average recovery of diosgenin was 99.43% and RSD was 2.64%. Conclusion: The method is simple, accurate, sensitive and reproducible. It can be applied in the quality control of Trillium tschonoskii Maxim..

Trillium tschonoskii Maxim.; total saponins; diosgenin; spectrophotometric method

R 282.6

A

1674-926X(2014)02-006-02

成都中醫藥大學藥學院 中藥材標準化教育部重點實驗室 中藥資源系統研究與開發利用省部共建國家重點實驗室培育基地，四川 成都 611137

羅方利，碩士在讀，主要從事中藥有效成分分析研究 Email:870905012@qq.com

郭力，教授，博士生導師，主要從事中藥藥效物質基礎及質量標準化研究 Email:gli64@sina.com

2013-06-08