i-CHROMATMReader免疫熒光分析儀測(cè)定超敏C反應(yīng)蛋白性能評(píng)價(jià)

金明超，任春云，王 星

(浙江大學(xué)醫(yī)學(xué)院附屬第一醫(yī)院，浙江杭州310003)

·儀器使用與排障·

i-CHROMATMReader免疫熒光分析儀測(cè)定超敏C反應(yīng)蛋白性能評(píng)價(jià)

金明超，任春云，王 星

(浙江大學(xué)醫(yī)學(xué)院附屬第一醫(yī)院，浙江杭州310003)

目的對(duì)i-CHROMATMReader免疫熒光分析儀檢測(cè)超敏C反應(yīng)蛋白(hypersensitive C-reactive protein,hs-CRP)的性能進(jìn)行驗(yàn)證和評(píng)價(jià)。方法根據(jù)美國(guó)臨床和實(shí)驗(yàn)室標(biāo)準(zhǔn)化協(xié)會(huì)(CLSI)標(biāo)準(zhǔn)，結(jié)合工作實(shí)際，設(shè)計(jì)實(shí)驗(yàn)方案，對(duì)韓國(guó)i-CHROMATMReader免疫熒光分析儀檢測(cè)hs-CRP的檢出限、精密度、準(zhǔn)確度、線(xiàn)性、可比性、參考區(qū)間、加樣量、干擾等主要分析性能進(jìn)行驗(yàn)證和評(píng)價(jià)，將實(shí)驗(yàn)結(jié)果與廠商(韓國(guó)Boditech Med Inc公司)提供的分析性能進(jìn)行比較。結(jié)果批內(nèi)精密度(CV%)為3.90%～6.17%、批間精密度(CV%)為4.04%～5.56%，均在廠商承諾范圍內(nèi)；檢出限為0.5mg/L，符合臨床要求；準(zhǔn)確度實(shí)驗(yàn)顯示i-CHROMATMReader免疫熒光分析儀與Beckman-Coulter Immage免疫分析儀檢測(cè)結(jié)果有較好的相關(guān)性；儀器對(duì)標(biāo)本類(lèi)型無(wú)特殊要求，全血與血清標(biāo)本測(cè)定hs-CRP結(jié)果差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05)，有較好的可比性；20個(gè)結(jié)果均小于8mg/L，即大于8mg/L樣本為0，可以引用廠商參考范圍0.00～8.00mg/L；甘油三酯、膽紅素對(duì)檢測(cè)結(jié)果的影響在可接受的范圍內(nèi)，抗干擾能力符合要求。結(jié)論i-CHROMATMReader免疫熒光分析儀檢測(cè)hs-CRP各項(xiàng)性能指標(biāo)符合質(zhì)量目標(biāo)要求，同時(shí)它具有操作簡(jiǎn)便、檢測(cè)迅速、精密度高、準(zhǔn)確度好、線(xiàn)性范圍廣、抗干擾能力強(qiáng)等優(yōu)點(diǎn)，值得推廣應(yīng)用。

i-CHROMATMReader；hs-CRP；性能評(píng)價(jià)

根據(jù)美國(guó)臨床和實(shí)驗(yàn)室標(biāo)準(zhǔn)化協(xié)會(huì)(CLSI)相關(guān)標(biāo)準(zhǔn)，參照醫(yī)學(xué)實(shí)驗(yàn)室質(zhì)量和能力認(rèn)可準(zhǔn)則(CNAS-CL02)和醫(yī)學(xué)實(shí)驗(yàn)室質(zhì)量和能力認(rèn)可準(zhǔn)則在臨床血液學(xué)檢驗(yàn)領(lǐng)域的應(yīng)用說(shuō)明(CNASCL027)，實(shí)驗(yàn)室在儀器投入使用前，應(yīng)通過(guò)對(duì)分析系統(tǒng)的評(píng)價(jià)，驗(yàn)證其性能是否能達(dá)到設(shè)備說(shuō)明書(shū)的性能要求。本科室近期引進(jìn)一臺(tái)韓國(guó)Boditech Med Inc公司i-CHROMATMReader免疫熒光分析儀，以免疫熒光定量測(cè)試和干化學(xué)層析技術(shù)為檢測(cè)原理，可檢測(cè)hs-CRP項(xiàng)目。為了保證檢驗(yàn)結(jié)果的準(zhǔn)確、可靠，根據(jù)CLSI的相關(guān)標(biāo)準(zhǔn)，自行設(shè)計(jì)實(shí)驗(yàn)方案，對(duì)該免疫熒光分析儀檢測(cè)hs-CRP進(jìn)行了性能評(píng)價(jià)，現(xiàn)總結(jié)如下。

1 材料與方法

1.1 標(biāo)本來(lái)源選取本院門(mén)診患者，采集靜脈血。全血標(biāo)本為EDTA-K2抗凝、血清標(biāo)本為分離膠高速離心。干擾物：TG含量6.72mmol/L的乳糜標(biāo)本；TBIL含量341μmol/L的黃疸標(biāo)本，且干擾物自身hs-CRP濃度均＜0.5mg/L。

1.2 儀器與試劑韓國(guó)Boditech Med Inc公司i-CHROMATMReader免疫熒光分析儀及配套hs-CRP試劑盒及質(zhì)控品、校準(zhǔn)品(批號(hào)2108CP，2109CP，2110CP；M209266)；美國(guó)Beckman-Coulter Immage免疫分析儀及配套試劑盒及質(zhì)控品、校準(zhǔn)品(批號(hào)M202312，M202313；M209266)原理為速率散射比濁法，可溯源至WHO,IFCC,BCR-470內(nèi)部方法標(biāo)準(zhǔn)化。BD一次性采血針及非可替真空采血管、定時(shí)器、Eppendorf移液器、生理鹽水。

1.3 檢測(cè)方法

1.3.1 檢出限實(shí)驗(yàn)檢出限(limit of detection,LoD)或檢測(cè)低限(lower limit of detection,LLD)是指檢測(cè)系統(tǒng)可檢測(cè)的最低分析物濃度，按文獻(xiàn)[1]介紹的方法，以緩沖液為空白樣品，對(duì)空白樣品進(jìn)行20次檢測(cè),與廠商給出的LoD值進(jìn)行比較。

1.3.2 精密度實(shí)驗(yàn)[1-3]

1.3.2.1 批內(nèi)精密度實(shí)驗(yàn)選取同一批號(hào)試劑盒，選取hs-CRP低、中、高濃度三個(gè)水平病人新鮮全血各一份，每份重復(fù)測(cè)定20次，計(jì)算批內(nèi)精密度,與廠商提供的性能參數(shù)相比較，判斷其符合性。

1.3.2.2 批間精密度實(shí)驗(yàn)選取hs-CRP低、中、高濃度三個(gè)水平質(zhì)控品，每天測(cè)定一次，連續(xù)測(cè)定20d，計(jì)算批間精密度，與廠商提供的性能參數(shù)相比較，判斷其符合性。

1.3.3 準(zhǔn)確度實(shí)驗(yàn)(方法學(xué)比對(duì))[1，2,4]選取40份患者血清標(biāo)本，hs-CRP濃度范圍應(yīng)覆蓋臨床可報(bào)告范圍，并保證結(jié)果有50%落于參考區(qū)間之外。每天分別在i-CHROMATMReader免疫熒光分析儀以及Beckman-Coulter Immage免疫熒光分析儀檢測(cè)8份標(biāo)本，每份重復(fù)檢測(cè)2次(檢測(cè)順序?yàn)?，2……8；8，7……1)，連續(xù)檢測(cè)5d，共收集40個(gè)患者標(biāo)本，記錄80對(duì)數(shù)據(jù)。對(duì)數(shù)據(jù)進(jìn)行方法內(nèi)離群值檢驗(yàn)、數(shù)據(jù)作圖，線(xiàn)性分析、方法間離群值檢驗(yàn)、X值合適范圍檢驗(yàn)、線(xiàn)性回歸。

1.3.4 線(xiàn)性實(shí)驗(yàn)[1，2,5]選取接近檢出限低濃度標(biāo)本(L)(本實(shí)驗(yàn)選用試劑盒緩沖液)，另選取一份接近預(yù)期上線(xiàn)高值全血標(biāo)本(H)，按比例配制成5個(gè)不同濃度標(biāo)本即1H，8H+2L，6H+4L，4H+6L，2H+8L (100%、80%、60%、40%、20%比例稀釋)，每個(gè)標(biāo)本重復(fù)測(cè)定3次，計(jì)算均值。根據(jù)系列濃度測(cè)量值繪制y軸為所有濃度測(cè)定均值，x軸為理論值的圖形，建立y=bx+a的回歸方程，驗(yàn)證線(xiàn)性范圍。

1.3.5 可比性實(shí)驗(yàn)(全血與血清)選取10份新鮮血標(biāo)本，濃度范圍覆蓋儀器線(xiàn)性區(qū)間。用全血、血清分別在i-CHROMATMReader免疫熒光分析儀上檢測(cè)這10份標(biāo)本，每份重復(fù)檢測(cè)兩次，計(jì)算全血和血清在該免疫熒光分析儀的結(jié)果偏差百分比。

1.3.6 參考范圍評(píng)估實(shí)驗(yàn)[1，2,6]選取20份新鮮血標(biāo)本，男女比例為1:1，濃度范圍在正常區(qū)間內(nèi)(0.00～8.00mg/L)，要求結(jié)果大于8mg/L的個(gè)數(shù)小于等于2個(gè)。

1.3.7 加樣量實(shí)驗(yàn)選取低、中、高濃度的質(zhì)控品，每種質(zhì)控品分三組，每組實(shí)驗(yàn)樣本量均為10μl樣本和緩沖液的混合液。將三組混合液加到檢測(cè)板上的量分別為1滴，2滴(對(duì)照組)，3滴，驗(yàn)證其結(jié)果準(zhǔn)確性。

1.3.8 干擾實(shí)驗(yàn)[1，2,7]分別將干擾物用生理鹽水按100%、90%、80%……20%、10%、0%比例稀釋成不同濃度的溶液，然后將不同濃度的干擾物溶液與待測(cè)血清按1:1混合，最后將混合液在i-CHROMATMReader免疫熒光分析儀上檢測(cè)2次，結(jié)果取均值。根據(jù)影響度作為干擾實(shí)驗(yàn)評(píng)價(jià)指標(biāo)。影響度=[(加入干擾物的全血測(cè)定值-未加入干擾物的全血測(cè)定值)/未加入干擾物的全血測(cè)定值]×100%。1.4統(tǒng)計(jì)學(xué)方法采用SPSS16.0軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析。兩組間比較采用配對(duì)t檢驗(yàn)，以P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1.1 檢出限對(duì)空白樣品進(jìn)行20次檢測(cè)，空白樣品有18次結(jié)果小于0.5mg/L，2次檢測(cè)結(jié)果大于0.5mg/L，根據(jù)文獻(xiàn)，若超過(guò)LoD的測(cè)定值不超過(guò)3個(gè)，則給出的LoD值可用。

2.1.2 精密度批內(nèi)精密度(CV%)為3.90%～6.17%、批間精密度(CV%)為4.04%～5.56%，詳見(jiàn)表1。

表1 不同濃度水平下hs-CRP批內(nèi)、批間精密度(CV%)(n=20)

2.1.3 準(zhǔn)確度(方法學(xué)比對(duì))根據(jù)EP9-A2標(biāo)準(zhǔn)計(jì)算i-CHROMATMReader免疫熒光分析儀與Beckman-Coulter Immage免疫分析儀的2次檢測(cè)數(shù)據(jù)組內(nèi)和組間均無(wú)離群值。回歸方程為y=0.9939x+ 0.8140(y:i-CHROMATMReader,x:Beckman-Coulter Immage)，r2=0.9865。

2.1.4 線(xiàn)性回歸方程為y=0.9873x-0.3595(y：理論值，x：實(shí)測(cè)值)，r2=0.9963，臨床可報(bào)告范圍與廠商承諾范圍(0.5～200mg/L)接近。

2.1.5 全血與血清可比性全血與血清標(biāo)本在i-CHROMATMReader免疫熒光分析儀上測(cè)定hs-CRP結(jié)果差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05)，有較好的可比性。

2.1.6 參考范圍20個(gè)結(jié)果均小于8mg/L，即大于8mg/L樣本為0，可以引用廠商參考范圍0.00～8.00mg/L。

2.1.7 加樣量加1滴時(shí)，儀器報(bào)警或結(jié)果報(bào)＞200mg/L。加3滴與2滴(對(duì)照組)結(jié)果無(wú)明顯差異。2.1.8干擾將不同濃度的干擾物與待測(cè)全血等量1:1混合，加入干擾物濃度、測(cè)定值及影響度詳見(jiàn)表2、表3。

表2 TG對(duì)hs-CRP結(jié)果的干擾影響度

表3 TBIL對(duì)hs-CRP結(jié)果的干擾影響度

3 討論

臨床檢驗(yàn)結(jié)果的質(zhì)量直接關(guān)系到患者的診斷、治療和預(yù)后，這就要求我們保證hs-CRP檢測(cè)結(jié)果的準(zhǔn)確、可靠。按照CAP及CNAS認(rèn)可要求，對(duì)一個(gè)新的檢測(cè)系統(tǒng)進(jìn)行性能評(píng)價(jià)是必須的，這也是質(zhì)量監(jiān)控的前提。我們根據(jù)CLSI的相關(guān)標(biāo)準(zhǔn)，自行設(shè)計(jì)方案，對(duì)韓國(guó)i-CHROMATMReader免疫熒光分析儀檢測(cè)hs-CRP的主要分析性能進(jìn)行驗(yàn)證，結(jié)果顯示該儀器檢出限LoD為0.5mg/L；精密度(CV%)批內(nèi)為3.90%～6.17%，批間為4.04%～5.56%，均在廠家聲明范圍內(nèi)；方法學(xué)比對(duì)顯示回歸方程為y=0.9939x+0.8140，r2=0.9865，說(shuō)明兩種分析系統(tǒng)檢測(cè)hs-CRP相關(guān)性較好、檢測(cè)性能相當(dāng)，經(jīng)配對(duì)t檢驗(yàn)(t=1.733，P＞0.05)顯示兩種分析系統(tǒng)檢測(cè)結(jié)果的差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義；選取一份接近預(yù)期上線(xiàn)高值作系列稀釋成5個(gè)不同濃度水平，用理論值和實(shí)測(cè)值作回歸分析，回歸方程為y= 0.9873x-0.3595,r2=0.9963，表明線(xiàn)性范圍較好，且與廠家聲明的臨床可報(bào)告范圍接近，經(jīng)F檢驗(yàn)(F= 1613,P＜0.001)，相關(guān)系數(shù)t檢驗(yàn)(t=40.158,P＜0.001)顯示回歸方程有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義；對(duì)全血與血清10份樣本t檢驗(yàn)(P＞0.05)顯示全血與血清測(cè)定hs-CRP結(jié)果差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，說(shuō)明該儀器對(duì)標(biāo)本類(lèi)型無(wú)明顯要求，有較好的可比性。實(shí)驗(yàn)中發(fā)現(xiàn)應(yīng)用血清檢測(cè)比全血檢測(cè)與Beckman-Coulter Immage相關(guān)性更好，可能為全血中有抗凝物質(zhì)存在一定干擾，但測(cè)定結(jié)果的誤差在臨床可接受范圍內(nèi)；加樣量顯示加1滴時(shí)，儀器報(bào)警或者結(jié)果報(bào)＞200mg/L，加3滴時(shí)，檢測(cè)結(jié)果與2滴(對(duì)照組)無(wú)明顯差異。即只要加到檢測(cè)板上的量足夠(75μl)，對(duì)準(zhǔn)確性無(wú)影響，量不夠時(shí)，儀器會(huì)報(bào)警，需重做。脂血和黃疸標(biāo)本對(duì)檢測(cè)的影響度分別為-7.5%～2.8%和-2.2%～9.3%絕對(duì)值都小于10%，說(shuō)明該儀器具有較強(qiáng)的抗干擾能力，干擾實(shí)驗(yàn)顯示隨干擾物濃度的增高對(duì)hs-CRP測(cè)定影響度也相應(yīng)增加。

綜上可見(jiàn)，韓國(guó)i-CHROMATMReader免疫熒光分析儀的主要分析性能指標(biāo)符合質(zhì)量目標(biāo)要求，可用于臨床檢測(cè)。

[1]王治國(guó).臨床檢驗(yàn)方法確認(rèn)與性能驗(yàn)證[M].北京:人民衛(wèi)生出版社,2009:246-253.

[2]馮仁豐.臨床檢驗(yàn)質(zhì)量管理技術(shù)基礎(chǔ)[M].第2版.上海:上海科學(xué)技術(shù)文獻(xiàn)出版社,2008.

[3]CLSI.EP15-A User Demonstration of Performance for Precision and Accuracy[S].Wayne,PA:CLSI,2001.

[4]CLSI.EP9-A2 Method Comparison and Bias Estimation Using Patient Samp les[S].Wayne,PA:CLSI,2002.

[5]CLSI.EP6-A Evaluation of the Linearity of Quantitative Measurement Procedures[S].Wayne,PA:CLSI,2003.

[6]CLSI.C28-A2 How to Define and Reference Intervals in the Clinical Laboratory.CLSI,2000.

[7]鄧芳梅,林曉文,李德發(fā).i-CHROMATMREADER免疫熒光分析儀性能評(píng)價(jià)[J].臨床輸血與檢驗(yàn)雜志,2010,12(2):107-109.

R446.62

A

1674-1129(2014)02-0227-03

10.3969/j.issn.1674-1129.2014.02.050

2013-10-22；收回日期2013-11-11)