不同劑量葉酸對托吡酯致胚胎毒性作用的干預(yù)研究

鄭麗娜，蘆珊珊，謝 巍，王立娜，郭 麗

(1.河北省唐山市婦幼保健院藥劑科，河北 唐山 063000；2.河北醫(yī)科大學(xué)第四醫(yī)院藥品科，河北 石家莊 050011)

葉酸(folic acid，F(xiàn)A)是由蝶啶、對氨基苯甲酸和谷氨酸組成的一種B族維生素，是細(xì)胞生長和分裂不可缺少的重要物質(zhì)[1]。FA參與體內(nèi)一碳單位的轉(zhuǎn)移和代謝，對 DNA、RNA 的合成，細(xì)胞增殖和組織分化有重要意義[2]。以神經(jīng)管畸形、唇腭裂等為主的多種出生缺陷與婦女懷孕早期體內(nèi)缺乏FA存在病因?qū)W聯(lián)系[3]。托吡酯(topiramate，TPM)是一種新型的抗癲癇藥物，具有多重抗癲癇作用機(jī)制，但同時(shí)也有拮抗FA代謝的藥理作用[4]。FA誘導(dǎo)胚胎甲酰四氫葉酸水平下降，引起胚胎細(xì)胞分裂障礙，使胚胎細(xì)胞分裂異常、發(fā)育畸形，從而導(dǎo)致胚胎停止發(fā)育、宮內(nèi)發(fā)育遲緩、流產(chǎn)、畸胎等異常妊娠情況[5]。本實(shí)驗(yàn)以小鼠為研究對象，觀察TPM的致畸作用及不同劑量FA干預(yù)效應(yīng)的差異，從而為臨床有效指導(dǎo)服用TPM的生育期婦女提供動物實(shí)驗(yàn)依據(jù)。

1 資料與方法

1.1 一般資料：SPF級昆明種小鼠，雌性體質(zhì)量(21.8±1.7)g，雄性體質(zhì)量(22.6±1.8)g，北京華阜康生物科技股份有限公司實(shí)驗(yàn)動物中心提供，合格證號SCXK(京)2009-0004。自然光照，自由飲水進(jìn)食，適應(yīng)性飼養(yǎng)1周。FA(北京北大藥業(yè)有限公司，每片0.4mg，批號S090528)，托吡酯(西安楊森制藥有限公司，每片25mg，批號090724035),上述所用藥物均用蒸餾水配制成所需濃度。

1.2 動物分組及給藥：按雌雄比例2∶1合籠交配，次日清晨定時(shí)檢查雌鼠陰栓，以查見陰栓者為妊娠零天，并隨機(jī)分為5組，每組20只孕鼠。①空白對照組，每天灌胃蒸餾水，容量為10mL·kg-1·d-1；② TPM劑量組，60mg·kg-1·d-1經(jīng)口灌胃；③TPM+低劑量FA組，TPM經(jīng)口灌胃劑量同②，同時(shí)添加0.07mg·kg-1·d-1FA；④TPM+中劑量FA組，TPM經(jīng)口灌胃劑量同②，同時(shí)添加0.35mg·kg-1·d-1FA；⑤TPM+高劑量FA組，TPM經(jīng)口灌胃劑量同②，同時(shí)添加0.7mg·kg-1·d-1FA。各組給藥劑量均相當(dāng)于成人等效劑量的10倍。上述各組小鼠于分組后次日，雌性鼠開始灌胃各藥物，按上述方法給藥，直至妊娠結(jié)束。

1.3 觀察指標(biāo)：觀察小鼠給藥后狀態(tài)，孕鼠于妊娠第22天處死,檢查子宮內(nèi)胚胎數(shù)及其發(fā)育狀況。記錄孕鼠體質(zhì)量、著床數(shù)、活胎數(shù)、死胎數(shù)、吸收胎數(shù)。測量仔鼠的體質(zhì)量、身長、尾長等。

2 結(jié) 果

2.1 對孕鼠生殖能力的影響：與空白對照組相比較，各組著床數(shù)差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。TPM組、TPM+低劑量FA組、TPM+中劑量FA組活胎率、吸收胎率和死胎率與空白對照組比較差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，TPM+高劑量FA組與空白對照組比較差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。TPM+FA高劑量組與TPM組比較活胎率顯著升高、吸收胎率和死胎率明顯降低，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.01)。見表1。

2.2 對胎鼠生長發(fā)育的影響：與空白對照組比較，TPM組與TPM+低劑量FA組胎鼠體質(zhì)量、身長、尾長均顯著降低，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.01)，TPM+中劑量FA組與TPM+高劑量FA組差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。TPM+中劑量FA組、TPM+高劑量FA組與TPM組相比較，胎鼠體質(zhì)量、身長、尾長差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.01)。見表2。

2.3 對胎鼠畸形方面的影響：與空白對照組比較，TPM組、TPM+低劑量FA組和TPM+中劑量FA組畸形數(shù)明顯升高，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.01)。TPM+高劑量FA組與TPM組相比較畸形數(shù)差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.01)，畸形類型主要表現(xiàn)為唇腭裂(cheilopalatognathus)、小頭(microcephaly)、脊膜膨出(meningocele)、短肢(micromelia)等。見表3。

表1 藥物對孕鼠生殖能力的影響Table 1 Effects of drugs on reproductive ability of pregnant mice (n，%)

*P<0.01vscontrol group #P<0.01vsTPM group by χ2test

TPM：topiramate；FA：folic acid

GroupsLive birth numberWeight of fetal mice(g)Length of fetal mice(cm)Tail length of fetal mice(cm)Control group2231.57±0.082.39±0.131.17±0.06TPM group1971.09±0.05?1.86±0.27?0.99±0.05?TPM+FA low-dose group1981.21±0.07?1.98±0.20?1.02±0.07?TPM+FA mid-dose group2031.42±0.06#2.15±0.17#1.09±0.04#TPM+FA high-dose group2111.48±0.09#2.24±0.27#1.10±0.05#

*P<0.01vscontrol group #P<0.01vsTPM group byANOVA

TPM：topiramate；FA：folic acid

表3 藥物對胎鼠畸形方面的影響Table 3 Effects of drugs on deformity of pregnant mice

*P<0.01vscontrol group #P<0.01vsTPM group by χ2test

TPM：topiramate；FA：folic acid

3 討 論

本研究結(jié)果顯示，TPM對小鼠的生殖能力、胎鼠的生長發(fā)育及致畸方面有明顯影響，補(bǔ)充低劑量FA并不能有效拮抗這種毒性作用，而中劑量FA僅在胎鼠生長發(fā)育方面有一定的干預(yù)效應(yīng)，高劑量FA干預(yù)TPM毒性作用的效果更明顯。

FA又稱蝶酰谷氨酸，是細(xì)胞生長和分裂所必需的物質(zhì)，在人體合成代謝中發(fā)揮著重要作用[6]。人類自身不能合成FA，必須依賴食物供給。若孕婦缺乏FA，便會引起胚胎細(xì)胞分裂障礙，導(dǎo)致胚胎細(xì)胞分裂異常和胚胎細(xì)胞發(fā)育畸形[7]。有研究表明，孕婦缺乏FA會導(dǎo)致胎兒先天性異常，特別是神經(jīng)管畸形的發(fā)生[8]。正常妊娠期婦女為滿足胎兒生長發(fā)育每天需要FA量為400～500μg[9]。我國從20世紀(jì)80年代末期開始，在全國各地區(qū)推廣服用FA增補(bǔ)劑，已經(jīng)有效地降低了神經(jīng)管畸形的發(fā)生，使高發(fā)地區(qū)預(yù)防率達(dá)到85%，低發(fā)地區(qū)預(yù)防率達(dá)到40%[10]。但對服用抗癲癇藥物孕婦的用量尚無報(bào)道。本研究證實(shí)低劑量FA拮抗TPM的毒性作用不明顯，這可能與TPM使血清FA水平降低有關(guān)。因此，對應(yīng)用TPM治療的癲癇妊娠婦女應(yīng)早期、足量補(bǔ)充FA，以預(yù)防畸形的發(fā)生。

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