重組豬源胰蛋白酶原的構(gòu)建、表達(dá)與活性分析

馮雪婷，劉素麗，黃瀟，王云康，龍軍，金亮，曹榮月*

（1. 中國(guó)藥科大學(xué)生命科學(xué)與技術(shù)學(xué)院，江蘇 南京210009；2. 江蘇未名生物醫(yī)藥有限公司，江蘇 常州 213000 ；3. 南京中醫(yī)藥大學(xué)生命科學(xué)與技術(shù)學(xué)院，江蘇 南京 210046）

·藥學(xué)研究·
PHARMACEUTICAL RESEARCH

重組豬源胰蛋白酶原的構(gòu)建、表達(dá)與活性分析

馮雪婷1,2，劉素麗2，黃瀟2，王云康1，龍軍3，金亮1，曹榮月1*

（1. 中國(guó)藥科大學(xué)生命科學(xué)與技術(shù)學(xué)院，江蘇 南京210009；2. 江蘇未名生物醫(yī)藥有限公司，江蘇 常州 213000 ；3. 南京中醫(yī)藥大學(xué)生命科學(xué)與技術(shù)學(xué)院，江蘇 南京 210046）

目的：構(gòu)建、表達(dá)重組豬源胰蛋白酶原，并對(duì)其進(jìn)行分離純化和酶活性分析。方法：利用大腸埃希菌表達(dá)系統(tǒng)（pET-28a，宿主菌BL21 DE3）優(yōu)化天然豬源胰蛋白酶原基因，經(jīng)乳糖誘導(dǎo)表達(dá)重組胰蛋白酶原蛋白，采用陰離子交換色譜法分離純化，以SDS-PAGE電泳鑒定目標(biāo)蛋白，以紫外分光光度法檢測(cè)重組蛋白的酶活力。結(jié)果：測(cè)序結(jié)果表明，重組豬源胰蛋白酶原基因工程菌構(gòu)建成功，SDS-PAGE檢測(cè)顯示目的蛋白條帶位置與標(biāo)準(zhǔn)豬源胰蛋白酶條帶位置一致，且酶活力可達(dá)513.09 U?mg-1。結(jié)論：成功獲得了重組豬源胰蛋白酶原，且酶活力較好，為進(jìn)一步研究生產(chǎn)提供了基礎(chǔ)。

豬源胰蛋白酶原基因；包涵體變性；乳糖誘導(dǎo)；稀釋復(fù)性

胰蛋白酶(trypsin，EC3.4.21.4)屬于絲氨酸蛋白酶的一種，在胰臟中以胰蛋白酶原的前體形式被合成和分泌。胰蛋白酶原與胰蛋白酶的結(jié)構(gòu)中均存在一個(gè)對(duì)Ca2+高度親和的部位，其對(duì)胰蛋白酶原的激活及胰蛋白酶活性狀態(tài)的保持非常重要[1]。在Ca2+的存在下，胰蛋白酶原被腸激酶或有活性的胰蛋白酶激活，形成活化胰蛋白酶[2]，后者作為肽鏈內(nèi)切酶，對(duì)多肽鏈中賴氨酸或精氨酸羧基所形成的肽鍵呈高度專一性，可水解該肽鍵產(chǎn)生以堿性氨基酸為羧基末端的小分子肽。……