維生素E對冷應激雛雞血清NO含量及GSH-Px活性的影響

王 奔，鄭 偉，張宏玲

（1.吉林農業科技學院動物醫學學院，吉林 吉林132101；2.內蒙古赤峰市松山區農牧業局，內蒙古 赤峰024000）

寒冷是北方地區動物最普遍的應激原，寒冷應激所引起的動物生長緩慢、抗病性差、甚至死亡是制約北方畜牧業和養殖業發展的主要因素之一。維生素E具有抗應激、抗疲勞、抗氧化、增強免疫能力等功能，它作為一種飼料添加劑在畜牧業中已得到廣泛的應用。國內外眾多學者在冷應激對動物機體的影響方面進行了廣泛研究,已有的大量研究表明，冷應激可對機體免疫系統產生影響，可改變多種細胞功能和免疫參數。但關于維生素E的抗應激作用在禽類中的研究還比較少。本試驗以雛雞為試驗對象，通過冷應激處理，用含不同水平維生素E的日糧飼喂。對雛雞血清中抗氧化功能相關指標進行檢測，旨在探討維生素E對冷應激雛雞機體的保護作用，提高動物的抗寒能力和抗氧化功能，為更好提高禽類抗冷應激能力和抗病力提供科學的理論依據。

1 材料與方法

1.1 試驗動物及分組 本試驗以1日齡的伊莎公雞為研究對象，共250只，飼養至15日齡時隨機分為正常組、應激組、維生素E低劑量組、維生素E中劑量組、維生素E高劑量組5組，每組各50只。常規分籠飼養，自由采食飲水。正常組和應激組飼喂全價飼料，低、中、高劑量組分別在飼料中添加200mg/kg、400mg/kg、800mg/kg的維生素E，除正常組在正常環境下飼養外，其余4組分別于12℃±1℃進行冷應激處理，應激時間分別為5、10、20 d，在各時間點每組隨機選取8只剖殺取樣[1]。

1.2 樣品采集與處理 在冷應激的第5天、10天、20天進行剖殺，將各組雛雞心臟采血，血液放入潔凈試管，置于室溫下，自行析出血清，用于NO和GSHPx的活性的檢測。

1.3 檢測項目與方法 （1）血清維生素E含量的檢測：用微量熒光法測定，單位μg/mL；（2）NO含量測定：硝酸還原酶法；（3）GSH-Px活性測定：用DTNB顯色法。試劑盒由南京建成生物工程研究所提供。

1.4 數據分析 數據采用SPSS13.0軟件進行單因素方差分析，差異具有顯著性意義時再進行LSD檢驗。試驗結果列表中，a為P＜0.05，A為P＜0.01（各組與正常組相比）；b為P＜0.05，B為P＜0.01（各組與應激組相比）；c為P＜0.05，C為P＜0.01（各組與低劑量組相比）；d為P＜0.05，D為P＜0.01（各組與中劑量組相比）。

2 結果

2.1 血清維生素E含量的測定 由表1可以看出，不同組別隨著應激時間的延長，血清維生素E含量升高并呈波動變化。在各時間點，隨著維生素E添加劑量的增加，血清維生素E含量逐漸回升；應激組與正常組相比差異均極顯著（P＜0.01）；各劑量組與正常組相比除低劑量組與正常組差異極顯著（P＜0.01），10 d高劑量組與正常組差異顯著外（P＜0.05），其他各劑量組與正常組間差異均不顯著（P＞0.05）；各劑量組與應激組相比除10 d低劑量組與應激組差異顯著（P＜0.05），5 d、20 d低劑量組與應激組差異不顯著外（P＞0.05），其他各劑量組與應激組間差異均極顯著（P＜0.01）。

表1 血清中維生素E含量 （n=8）單位：μg/mL

2.2 維生素E對冷應激雛雞血清NO含量的影響

由表2可以看出，不同組別隨著應激時間的延長，血清NO含量逐漸升高。在各時間點，隨著維生素E添加劑量的增加，血清NO含量逐漸下降；應激組與正常組相比差異均極顯著（P＜0.01）；各劑量組與正常組相比除10 d高劑量組與應激組差異不顯著外（P＞0.05），其他各劑量組與正常組間差異顯著（P＜0.05）或極顯著（P＜0.01）；各劑量組與應激組相比除5 d低劑量組與應激組差異不顯著（P＞0.05），10 d低劑量組與應激組差異顯著外（P＜0.05），其他各劑量組與應激組間差異均極顯著（P＜0.01）；各劑量組間比較差異顯著（P＜0.05）或極顯著（P＜0.01）。

2.3 維生素E對冷應激雛雞血清GSH-Px活性的影響 由表3可以看出，不同組別隨著應激時間的延長，血清GSH-Px活性逐漸降低。在各時間點，隨著維生素E添加劑量的增加，血清GSH-Px活性逐漸回升；應激組與正常組相比差異均極顯著（P＜0.01）；各劑量組與正常組相比除低劑量組與正常組、10 d中劑量組與正常組差異極顯著外（P＜0.01），其他各劑量組與正常組間差異均不顯著（P＞0.05）；各劑量組與應激組相比除低劑量組與應激組不顯著外（P＞0.05），其他各劑量組與應激組間差異均極顯著（P＜0.01）；各劑量組間除中劑量組與高劑量組差異不顯著外（P＞0.05），其他各劑量組間相比較差異均極顯著（P＜0.01）。

表2 維生素E對冷應激雛雞血清NO含量的影響（n=8）單位：U/mL

表3 維生素E對冷應激雛雞血清GSH-Px活性影響（U/mL，n=8）

3 討論

冷應激對機體的氧化損傷一直是冷應激研究的熱點，自由基尤其是氧自由基在生物體內的含量改變時，可能會導致氧化應激及細胞損傷，已有報道表明，冷應激能夠引起氧自由基含量的改變。當機體受到過度刺激時，會誘導NO的大量產生，可與體內超氧陰離子（0-2）等活性氧反應生成過氧亞硝酸鹽（ONOO-）介導細胞毒作用[2]。過量的超氧陰離子自由基可誘發機體內不飽和脂肪酶的一系列脂質氧化連鎖反應，造成生物膜結構和功能損傷，使機體抗病力下降、生產力降低，引發各種疾病。谷胱甘肽過氧化物酶（GSH-Px）是機體內廣泛存在的一種重要的過氧化物分解酶，它特異催化還原型GSH對過氧化物的還原反應。一般認為它在細胞內能清除有害的過氧化代謝產物，阻止脂質過氧連鎖反應，從而起到保護細胞膜結構和功能的作用[3]。楊鳳微等[4]研究表明，冷應激能引起雛雞血清NO含量升高、GSH-Px活性降低，使機體抗氧化系統遭到破壞。Gumuslu等[5]研究證明，慢性冷應激可使鼠紅細胞CuZn-SOD活性下降，GSH-Px活性升高。Sahin等[6]研究表明，冷應激可以破壞氧化與抗氧化系統的平衡，通過改變酶與非酶的抗氧化系統，蛋白質氧化以及脂質氧化等對鼠機體組織器官造成氧化損傷。

維生素E能消除和對抗體內脂質過氧化物酶的形成，使自由基減少，從而起到抗氧化作用。在寒冷狀態下機體代謝增強，脂質過氧化產物蓄積，維生素E可清除過剩的脂質過氧化物，從而保護生物膜及亞細胞結構的完整性。宋志宏等[7]研究表明，大鼠冷暴露后血及肝臟組織中GSH-Px和SOD的活性明顯下降，而飼料中加入一定量的維生素E可使上述指標的變化明顯改善，接近于室溫下正常對照組水平。也有研究表明，在應激前補充維生素C和維生素E有助于改善由低體溫引起的人尺神經傳導的損傷，維生素E可通過抗脂質過氧化作用，提高機體的耐寒力[8]。

本試驗結果中應激組NO含量升高，GSH-Px活性降低，總體趨勢與所報道的研究結果基本一致，提示在冷應激時機體的氧化-抗氧化平衡失調、氧自由基生成增多，造成機體組織細胞的損傷。有研究發現，補充外源性維生素E能夠增加體內GSH合成，增加機體抗氧化能力。Ozkan S等[9]研究表明，在低溫下飼喂無機硒加維生素E飼料可增加雛雞肝中GSH-Px和谷光甘肽的含量，增加家禽在低溫下的抗氧化能力。本試驗觀察到添加維生素E組，尤其是中劑量組和高劑量組血清中NO含量、GSH-Px活性均接近于正常水平，說明維生素E可促進細胞的新陳代謝，增加機體中NO含量和GSH-Px的活力，發揮其抗氧化和清除自由基作用。提示適量的維生素E對冷應激引起的雛雞氧化損傷有保護作用，可以明顯抑制氧自由基含量增高，可減輕氧自由基對機體的損傷作用。

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