柴胡桂枝顆粒質量標準研究

王嬋,林廣,黃志權,周永強,粟華生

·炮制制劑·

柴胡桂枝顆粒質量標準研究

王嬋,林廣,黃志權,周永強,粟華生

目的：建立柴胡桂枝顆粒質量標準。方法：采用薄層色譜法對處方中的君藥柴胡進行定性鑒別；采用高效液相色譜法，色譜柱為Welch Ultimate XB-C18(250×4.6 mm，5 μm)，流動相為甲醇-0.1%磷酸（47:53），流速1.0 mL．min-1，檢測波長280 nm，柱溫25℃，對處方中黃芩的有效成分黃芩苷進行含量測定。結果：本品中柴胡定性鑒別薄層色譜特征明顯，專屬性強；有效成分黃芩苷含量測定專屬性強，穩定性、重復性好，平均回收率為100.15%，RSD為1.22%（n=6）。結論：該方法簡便、準確、重復性好，可作為柴胡桂枝顆粒的質量控制。

柴胡桂枝顆粒；質量標準；薄層色譜法；含量測定

柴胡桂枝顆粒由柴胡、桂枝、黃芩、白芍、人參等九味中藥組成，具有和解少陽，發散表邪的功能。主治少陽證兼有太陽表證，癥見發熱微惡寒、肢節煩痛，微嘔，心下支結，外證未去者，亦可用肝胃不和之胃疼[1]。中藥配方顆粒是應用現代制藥技術將傳統中藥飲片經過提取、濃縮、干燥、制粒、包裝而成的顆粒狀劑型，具有應用靈活、攜帶方便、質量可控、不需煎煮等優點[2]。隨著生活水平的日益提高，人們對中藥免煎顆粒的需求量不斷增長，因此提高對中藥配方顆粒的質量控制至關重要。有關柴胡桂枝顆粒藥理作用研究的報道較多，但對其質量控制方面的報道較少。為了保證藥品的安全性、有效性及質量可控性，本研究對處方中的君藥柴胡進行了薄層色譜鑒別，并采用高效液相色譜法對黃芩中的黃芩苷進行了含量測定。結果表明，本法操作簡便，穩定性、重現性好，精密度高，測定結果準確，可作為柴胡桂枝顆粒的質量控制。

1 儀器與試藥

Agilent 1260高效液相色譜儀（美國Agilent公司）；GR-202分析天平(日本)；昆山KQ-500DE超聲波清洗儀（昆山市超聲儀器有限公司）；卡瑪薄層攝像系統（Reportstar-5）；預制硅膠G薄層板（青島海洋化工有限公司）。

黃芩苷對照品（批號：MUST-11101403，含量測定用，成都曼思特生物科技有限公司）；柴胡對照藥材（批號：120992-201108，中國食品藥品檢定研究院）；甲醇（FIRSH）為色譜純，水為超純水，其他試劑均為分析純；柴胡桂枝顆粒（批號：A090283-01、A091015-01、A100364-02和A101035-01，培力（南寧）藥業有限公司）。

2 方法與結果

2.1 柴胡鑒別

取本品5.0 g，加熱水30 mL使溶解，放冷，用水飽和正丁醇振搖提取2次，每次25 mL，合并正丁醇液，用氨試液洗滌2次，每次30 mL，正丁醇液蒸干，殘渣加甲醇1 mL使溶解，作為供試品溶液。另取柴胡對照藥材0.5 g，加水50 mL，加熱回流1 h，濾過，濾液置水浴上蒸至約30 mL，放冷，自“用水飽和正丁醇振搖提取2次”起同供試品溶液方法制成對照藥材溶液。再取缺柴胡藥材的陰性樣品5.0 g，同供試品溶液方法制成陰性樣品溶液。照薄層色譜法（中國藥典2010年版一部附錄Ⅵ B）試驗，吸取上述供試品溶液及陰性樣品溶液各5 μL，對照藥材溶液10 μL，分別點于同一硅膠G薄層板上，以乙酸乙酯-乙醇-水（8：2：1）為展開劑，展開，取出，晾干，噴以2 %對二甲氨基苯甲醛的40 %硫酸溶液，60℃加熱至斑點顯色清晰，日光及紫外光燈（365 nm）下檢視。供試品色譜中，在與柴胡對照藥材色譜相應的位置上，顯相同顏色的主斑點，結果見圖1。

圖1 柴胡薄層鑒別色譜圖

2.2 黃芩苷含量測定

2.2.1 色譜條件 色譜柱為Welch Ultimate XB-C18，250×4.6 mm，5 μm；以甲醇-0.1%磷酸（47:53）為流動相；檢測波長為280 nm；流速1.0 mL．min-1；柱溫25℃。理論塔板數按黃芩苷峰計算應不低于3000。

2.2.2 對照品溶液的制備 取黃芩苷對照品適量，精密稱定，加甲醇制成每1 mL含30 mg的溶液，即得。2.2.3 供試品溶液的制備 取本品適量，研細，取約0.2 g，精密稱定，置具塞錐形瓶中，精密加入70%乙醇50 mL，稱定重量，超聲處理（功率500 W，頻率40 kHz）30 min，取出，放冷，稱重，用70 %乙醇補足減失的重量，搖勻，濾過，取續濾液，即得。

2.2.4 陰性樣品溶液的制備 取缺黃芩藥材的柴胡桂枝湯配方顆粒陰性樣品，研細，取約0.2 g，精密稱定，置具塞錐形瓶中，精密加入70 %乙醇50 mL，稱定重量，超聲處理（功率500 W，頻率40 kHz）30 min，取出，放冷，稱重，用70 %乙醇補足減失的重量，搖勻，濾過，取續濾液，即得。

2.2.5 專屬性考察 分別吸取對照品溶液、供試品溶液、陰性樣品溶液各10 μL進樣。在“2.2.1色譜條件”下，供試品中黃芩苷色譜峰與對照品色譜峰保留時間一致，并與其他共存成分最小分離度為1.76（大于1.5），理論塔板數為10258（大于3000），主峰與雜質峰達到基線分離，且陰性樣品在相應的位置沒有色譜峰干擾，說明本方法專屬性良好。色譜圖見圖2、圖3、圖4。

圖2 黃芩苷對照品色譜圖

圖3 供試品色譜圖

圖4 陰性樣品色譜圖

2.2.6 線性關系考察 取黃芩苷對照品7.62 mg，置25 mL的量瓶中，加甲醇溶解并稀釋至刻度，搖勻，即得（濃度為0.3048 mg．mL-1)，精密量取上述對照品溶液0.20、0.50、1.0、2.0、4.0 mL分別置10 mL的量瓶中，加甲醇稀釋至刻度，搖勻，作為線1～線5，取0.3048 mg．mL-1的對照品溶液作為線6。分別精密吸取上述對照品溶液各10 μL，注入液相色譜儀進行測定。按上述色譜條件測得峰面積積分值，以進樣量(μg)為橫坐標，峰面積積分值為縱坐標，黃芩苷對照品的回歸方程：Y=2615.5136X+21.6848， R2 = 0.9999。結果表明：黃芩苷在0.06096～3.048 μg范圍內時，黃芩苷進樣量與峰面積呈良好的線性關系。

2.2.7 精密度試驗 精密吸取黃芩苷對照品溶液(濃度為60.96 μg．mL-1)10 μL，重復進樣6次，測定峰面積，結果表明，黃芩苷峰面積的RSD(%)值為0.07 %，小于2.0 %，說明儀器精密度良好。

2.2.8 穩定性試驗 取同一供試品溶液，分別于0 h、3 h、5 h、7 h、9 h進樣，依法測定，結果黃芩苷峰面積的RSD(%)值為0.20 %，說明供試品溶液在9 h穩定。

2.2.9 重復性試驗 取同一批樣品，研細，取6份，每份約0.2 g，精密稱定，按“2.2.3供試品溶液的制備”項方法制得供試品溶液，精密吸取供試品溶液各10 μL進樣，測定峰面積并計算黃芩苷含量。結果黃芩苷的平均含量為6.4194 mg．g-1，含量的RSD(%)值為0.39 %，說明重復性良好。

2.2.10 中間精密度試驗 取同一批樣品，研細，取12份，每份約0.2 g，精密稱定，按“2.2.3供試品溶液的制備”項方法制得供試品溶液，精密吸取供試品溶液各10 μL分別在不同時間注入兩臺不同液相色譜儀（每臺測6份），測定峰面積并計算黃芩苷含量。結果黃芩苷的平均含量為6.32 mg．g-1，黃芩苷含量的RSD(%)值為1.83%，說明中間精密度良好。

2.2.11 加樣回收率試驗 取同一批已知含量的樣品（含量為6.4194 mg．g-1），研細，取6份，每份約0.1 g，精密稱定，置具塞錐形瓶中，分別精密加入黃芩苷對照品溶液（濃度為0.3048 mg．mL-1）2.0 mL，水浴蒸干溶劑，按供試品溶液的制備方法制得供試品溶液，進樣測定，計算回收率，結果見表1。

表1 黃芩苷加樣回收率試驗結果

結果表明，黃芩苷回收率在95%～105%之間，RSD(%)值小于2.0%，說明本方法回收率良好。

2.2.12 樣品含量測定 取本品三批各約0.2 g，精密稱定，照“2.2.3供試品溶液的制備”制得供試品溶液，在“2.2.1色譜條件”下進樣測定，結果見表2。

表2 柴胡桂枝顆粒含量測定結果

3 討論

根據柴胡桂枝顆粒的組方原則與方解，柴胡、桂枝為君藥，黃芩、白芍為臣藥，本研究按照處方的君臣佐使優先順序首先對君藥“柴胡”進行了薄層鑒別研究，并建立了其薄層色譜定性鑒別方法，結果薄層色譜斑點清晰，陰性無干擾，專屬性強，重現性好。

在含量測定研究中，曾對君藥“桂枝”中的桂皮醛進行過含量測定的研究，供試品溶液的制備方法采用的是與《中國藥典》2010版【桂枝】的含量測定項的方法：用甲醇進行超聲處理；流動相為：乙腈-0.1%冰醋酸（33:67），檢測波長為290nm。但經計算得到產品中桂皮醛含量約為0.007%，含量較低，不僅進行準確定量難度較大，而且意義不大，因此未選擇其作為含測指標。在黃芩苷含量測定中，參考2010版《中國藥典》一部【黃芩】含量測定項的流動相[3]，使用甲醇-0.1%磷酸（47:53）作為流動相，結果黃芩苷峰與雜質峰分離效果較好，因此確定選用該流動相。在黃芩苷提取條件的考察中，分別對甲醇、70%甲醇、50%甲醇、乙醇、70%乙醇、稀乙醇等提取溶劑進行了比較，結果用70%甲醇和70%乙醇作為提取溶劑時，測得含量較高且無明顯差異，但考慮到甲醇的毒性，因此選擇70%乙醇作為提取溶劑。除此之外，還考察了提取方式（超聲處理、加熱回流、浸泡處理），超聲處理時間（15 min、30 min、45 min），溶劑用量（25 mL、50 mL、100 mL）對黃芩苷含量的影響，結果以50 mL超聲處理30 min提取的黃芩苷含量較高。文中建立的定性、定量方法準確、可行，可有效控制柴胡桂枝顆粒的質量。

[1] 段富津主編.方劑學[M].上海:上海科技出版社,1995.

[2] 劉志勤.中藥配方顆粒利弊淺析[J].實用中醫藥雜志,2007, 28(8):722.

[3] 國家藥典委員會.中國藥典一部[S].北京:中國醫藥科技出版社,2010 :282.

（責任編輯：陳思敏）

Study on the quality standard of Chaihuguizhi Granules

WANG Chan, LING Guang, HUANG Zhi-quan, ZHOU Yongqiang, LI Hua-sheng//(Pura (Nanning) Pharmaceutical Co., Ltd., Nannin 530000, Guangxi)

Objective:To establish the quality standard of Chaihuguizhi Granules．Method:TLC was used to identify Chaihu in the prescription. HPLC method was used to carry out the determination. Welch Ultimate XB-C18column(250×4.6mm，5 μm) was used, and mobile phase was methanol-0.1% phosphoric acid(47:53). The fow rate was 1.0 mL．min-1,and detection wavelength was 280 nm. The column temperature was set at 25℃.Result:TLC Chromatogram were clear without the interference of the blank control. The average recovery of Baicalin in Scutellariae Radix were 100.15% with RSD of 1.22% ( n=6).Conclusion:The methods of identifcation and quantifcation are convenient, accurate and reproducibility. They can be used effectively for the quality control of Chaihuguizhi Granules．

ChaihuguizhiGranules; quality standard; TLC; content determination

R 283

A

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2013-05-02