高尿酸血癥動(dòng)物模型與時(shí)間的關(guān)系

陶兆燕，程媛，唐熠，譚億民，李涓

·藥理毒理·

高尿酸血癥動(dòng)物模型與時(shí)間的關(guān)系

陶兆燕1，程媛2，唐熠2，譚億民2，李涓2

目的：通過(guò)喂食高蛋白高鈣飼料建立雞高尿酸血癥模型，觀察造模時(shí)間對(duì)該造模方法所建立的尿酸代謝障礙模型的影響。方法：選取100 d齡羅曼蛋雞，在產(chǎn)蛋日齡前喂以高蛋白、高鈣飼料，并限制進(jìn)水量，建立雞高尿酸血癥模型；分別于造模第7 d、14 d、21 d檢測(cè)血清尿酸值和糞便尿酸值。結(jié)果：造模第7 d、14 d、21 d，與空白組對(duì)照組比較，模型組糞便尿酸值均顯著升高；造模第21 d，模型組血清尿酸值與空白組對(duì)照組比較具有顯著性差異（P＜0.01）。結(jié)論：給雞喂食高蛋白高鈣飼料，在第21 d時(shí)血清尿酸值顯著升高，說(shuō)明造模成功，提示造模時(shí)間對(duì)該模型具有一定的影響。

高尿酸血癥模型；雞；造模時(shí)間

高尿酸血癥(hypemricemia)是長(zhǎng)期嘌呤代謝紊亂或尿酸排泄減少所引起的一組異質(zhì)性疾病[1]。近年來(lái)，由于經(jīng)濟(jì)發(fā)展和人們飲食結(jié)構(gòu)改變，高蛋白、高果糖[2,3]和高嘌呤食物攝取增加，高尿酸血癥的患病率正逐年上升，已成為威脅人類健康的重要疾病。為此，建立高尿酸血癥動(dòng)物模型，為研究該疾病發(fā)病機(jī)制和藥理研究，具有非常重要的意義。本文通過(guò)喂食高蛋白高鈣飼料建立雞高尿酸血癥模型，并觀察造模時(shí)間對(duì)該造模方法所建立的尿酸代謝障礙模型的影響，希望能為以后進(jìn)一步研究高尿酸血癥的發(fā)病機(jī)理提供參考。

1 材料

1.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物

100日齡“羅曼蛋雞”12只，體重(900±100)g，由成都正大畜禽有限公司提供；常規(guī)飼料由成都市新津希望飼料廠提供；造模飼料由四川省實(shí)驗(yàn)動(dòng)物專委會(huì)養(yǎng)殖場(chǎng)提供，其中造模飼料(底料為常規(guī)飼料，補(bǔ)充魚(yú)粉、骨粉)蛋白質(zhì)含量大于20%、含鈣量大于4%。

1.2 實(shí)驗(yàn)試劑

尿酸測(cè)定試劑盒，四川邁克生物科技股份有限公司生產(chǎn)，批號(hào)0812061。

2 方法

2.1 實(shí)驗(yàn)方法[4～6]

取100日齡羅曼蛋雞12只，在實(shí)驗(yàn)室適應(yīng)性喂養(yǎng)5 d后，稱重，并按體重隨機(jī)分為兩組，即空白對(duì)照組和模型組，每組6只。空白對(duì)照組給予常規(guī)飼料，自由飲水。其余6只每天給予上述高蛋白、高鈣飼料100 g進(jìn)行造模，并且每只雞每日控制進(jìn)水量100 mL。于造模第7 d、14 d、21 d抽取雞翅靜脈血（取血方法：將雞翅展開(kāi)暴露翼根靜脈, 7號(hào)針頭以45°角刺破血管, 1.5 mL離心管收集流出的血液，完畢后壓迫止血），取血前動(dòng)物禁食8 h，2000 rpm離心10 min，分離血清，按試劑盒規(guī)定檢測(cè)方法測(cè)定血清尿酸值。并于造模第7 d、14 d、21 d按相同的方法取雞糞便1 g，并用3 mL蒸餾水稀釋，3000 rpm離心10 min，取上清液按試劑盒規(guī)定檢測(cè)方法測(cè)定糞便尿酸值。

2.2 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

結(jié)果以 ± 表示，SPSS13.0統(tǒng)計(jì)軟件處理，計(jì)量資料符合正態(tài)分布，采用t檢驗(yàn)，不符合者采用非參數(shù)檢驗(yàn)秩和法分析，P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

3 結(jié)果

3.1 不同時(shí)期雞血清尿酸值

結(jié)果顯示，造模第7 d、第14 d，與空白對(duì)照組比較，模型組血清尿酸值無(wú)明顯變化，說(shuō)明喂食高蛋白、高鈣飼料后，短時(shí)間內(nèi)不能使血清中尿酸升高；造模第21 d，空白對(duì)照組比較，模型組血清尿酸值顯著升高(P＜0.01)，說(shuō)明此時(shí)造模成功。結(jié)果見(jiàn)表1、圖1。

表1 實(shí)驗(yàn)不同時(shí)期雞血清尿酸值測(cè)量結(jié)果 (，n = 6)

表1 實(shí)驗(yàn)不同時(shí)期雞血清尿酸值測(cè)量結(jié)果 (，n = 6)

注：與空白對(duì)照組比較，** P＜0.01

組別

圖1 實(shí)驗(yàn)不同時(shí)期雞血清尿酸值

3.2 不同時(shí)期雞糞便尿酸值

結(jié)果顯示，造模第7 d、14 d、21 d，與空白對(duì)照組比較，模型組糞便尿酸值均顯著升高(P＜0.01)，說(shuō)明喂食高蛋白、高鈣飼料后，任何時(shí)間段糞便中的尿酸值都會(huì)升高。結(jié)果見(jiàn)表2、圖2。

表2 實(shí)驗(yàn)不同時(shí)期雞糞便尿酸測(cè)量值(，n = 6)

表2 實(shí)驗(yàn)不同時(shí)期雞糞便尿酸測(cè)量值(，n = 6)

注：與空白對(duì)照組比較，** P＜0.01

糞便尿酸值（μ mol．L-1）造模7 d 造模14 d 造模21 d空白對(duì)照組 853.50±135.89 880.21±199.52 928.33±673.07模型組 1746.17±214.64** 1978.93±344.51** 2130.07±459.35**組別

圖2 實(shí)驗(yàn)不同時(shí)期雞糞便尿酸值

4 討論

高尿酸血癥是長(zhǎng)期嘌呤代謝障礙或(和)尿酸排泄減少所引起的一組異質(zhì)性疾病，其發(fā)病原因主要是尿酸生成增多或排泄減少，導(dǎo)致尿酸在體內(nèi)蓄積而使血中尿酸濃度升高。高尿酸血癥診斷標(biāo)準(zhǔn)為男性血尿酸≥416 μmol．L-1(7.0mg/dL)，女性≥ 357 μmol．L-1(6.0mg/dL)[7]。現(xiàn)代研究已經(jīng)明確高尿酸血癥的發(fā)病與體內(nèi)血尿酸水平的升高直接相關(guān)。尿酸是嘌呤代謝的產(chǎn)物，主要由細(xì)胞核酸代謝分解和其它嘌呤類化合物以及食物中的嘌呤核甘酸經(jīng)酶的分解作用而來(lái)。并且大量研究表明血尿酸水平升高與肥胖、脂質(zhì)代謝紊亂、糖尿病、動(dòng)脈粥樣硬化心血管疾病[8]等密切相關(guān)，已成為威脅人類健康的重要疾病。

動(dòng)物模型作為研究疾病發(fā)病機(jī)制和藥理藥效的一種方法在科學(xué)發(fā)展中有著重要的作用。從現(xiàn)有對(duì)高尿酸血癥動(dòng)物模型的研究來(lái)看，目前還沒(méi)有公認(rèn)的高尿酸血癥動(dòng)物模型。但已有研究證實(shí)，禽類與人的嘌呤核苷酸代謝途徑相似，缺乏尿酸酶，都是以尿酸為終產(chǎn)物排出體外。從尿酸生成及代謝途徑入手，使血清尿酸水平升高可增加它們的嘌呤吸收與生物合成以及減少尿酸降解和排泄，從而引發(fā)雞高尿酸血癥，其病理過(guò)程與人相似[9]。選用禽類作為高尿酸血癥模型動(dòng)物還能較確切的反映體內(nèi)嘌呤核苷酸的代謝水平，且具有高尿酸血癥水平持續(xù)穩(wěn)定的優(yōu)點(diǎn)[10]。

從文中表1和圖1實(shí)驗(yàn)不同時(shí)期雞血清尿酸值結(jié)果可以看出，造模第7 d和第14 d，與空白對(duì)照組比較，模型組血清尿酸值無(wú)明顯變化，而造模第21 d，模型組血清尿酸值顯著升高，由此推測(cè)采用喂食高蛋白高鈣飼料建立高尿酸血癥模型的方法受時(shí)間影響較大。但該實(shí)驗(yàn)結(jié)果與一些文獻(xiàn)報(bào)道的造模7 d即可造成高尿酸血癥模型[5]不符，發(fā)生此現(xiàn)象的原因可能是造模飼料成份、喂養(yǎng)方法及其它一些客觀因素所致，具體原因還有待進(jìn)一步研究。從表2、圖2實(shí)驗(yàn)不同時(shí)期雞糞便尿酸值可以看出，與空白對(duì)照組比較，各個(gè)時(shí)間段的雞糞便尿酸值均顯著升高，說(shuō)明雞食用高鈣高蛋白飼料后由于其體內(nèi)自身的調(diào)節(jié)代謝作用將大部分尿酸排出了體外。從上述結(jié)果及設(shè)想可以得出，通過(guò)喂食高蛋白高鈣飼料建立的雞高尿酸血癥模型與造模時(shí)間有著密切的聯(lián)系，即造模時(shí)間對(duì)能否造成高尿酸血癥模型影響較大。同時(shí)，該造模方法對(duì)雞糞便尿酸值也具有一定影響。此外，通過(guò)本實(shí)驗(yàn)的研究也在理論上和數(shù)據(jù)上為高尿酸血癥的進(jìn)一步研究提供了實(shí)驗(yàn)參考。

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（責(zé)任編輯：陳思敏）

The relationships between animal model of hyperuricemia and time

TAO Zhao-yan1, CHENG Yuan2, TANG Yi2, TAN Yimin2, LI Juan2//(1. Chengdu University of Traditional Chinese Medicine, Chengdu 610075, China;2.Teaching Hospital of Chengdu University of Traditional Chinese Medicine, Chengdu 610072, China)

Objective:The chicken model of hyperuricemia was established by feeding high protein and high-calcium diet, and the effect of molding time on the establishment of uric acid metabolism disorder model was investigatedMethod:Roman laying hens of 100 days was selected, and fed high protein and high-calcium diet with limited the amount of water before the egg laying to establish the chicken model of hyperuricemia. At the molding time of 7d, 14d and 21d, the serum uric acid and fecal uric acid values were detected respectively.Result:At the molding time of 7d, 14d and 21d, compared with blank control group, the model group’s fecal uric acid values were all increased. At the molding time of 21d, the model group serum uric acid levels of had signifcant difference when compared with the blank control group.Conclusion:After the animal is fed with high protein highcalcium diet for 21 days, the serum uric acid values are signifcantly increased which indicate that the molding is succeed, and suggest that the molding time has a certain impact on the model.

Hyperuricemia model; Roman laying hens; molding time

R 285.5

A

1674-926X(2014)01-009-03

四川省科技廳科技基金（No.2009SZ0233）

1.成都中醫(yī)藥大學(xué)，四川 成都 610075；2. 成都中醫(yī)藥大學(xué)附屬醫(yī)院，四川 成都 610072

陶兆燕（1987-），女，四川瀘州人，在讀碩士研究生，主要從事中藥藥效與毒理研究Tel:13551079749 Email:taozhaoyan@126.com

李涓（1963-），女，重慶人，教授，主要從事藥理學(xué)、中藥藥理學(xué)研究以及新藥的開(kāi)發(fā)研究Tel:13668162880 Email:Li062@126.com

2013-06-13