延齡草鞣質的含量測定

羅方利，郭力，貝圓，許莉

·品種品質·

延齡草鞣質的含量測定

羅方利，郭力，貝圓，許莉

目的：建立延齡草中鞣質的含量測定方法。方法：以磷鉬鎢酸法作為顯色方法，采用紫外-可見分光光度法進行測定。結果：在0.0755～0.2012mg范圍內吸光度與鞣質含量呈良好的線性關系(r2=0.9991，n=9)，平均回收率為100.10 %，RSD= 2.51%，n=9。結論：該法精密度、重現性良好，可作為延齡草中鞣質的含量測定方法。

延齡草；鞣質；含量測定

頭頂一顆珠系百合科延齡草屬植物頭頂一顆珠(Trillium tschonoskii Maxim.)的干燥根狀莖及根，其味甘性溫，有小毒，有止血、解毒、接骨續筋等功效，主治頭痛眩暈、跌打損傷、神經衰弱、疔瘡腫毒等[1]。傳統醫學認為，含鞣質的中草藥具有收斂、止血、止瀉的作用[2,3]。現代藥理研究表明，鞣質具有抗脂過氧化、抗腫瘤、抗病毒、抑菌、抗炎、抗過敏、解毒、生發、增強腎功能等方面的作用[4]。目前，對延齡草植物中皂苷類成分研究較多，但未見延齡草中鞣質的相應報道，本實驗參照2010年版《中華人民共和國藥典》（一部）附錄ⅩB鞣質含量測定方法，對延齡草中鞣質含量進行了檢測。以期為延齡草藥材的規范化和進一步的開發利用提供科

1 儀器與試藥

紫外-可見分光光度儀（UV-1100，上海天美科學儀器有限公司），Sartorius系列電子分析天平，KQ3200E型超聲波清洗器（昆山市超聲儀器有限公司），優普系列超純水器（成都超純科技有限公司）等。

沒食子酸對照品(中國藥品生物制品檢定所,批號：110831-200302，供含量測定用) ;實驗所用試劑均為分析純，延齡草藥材來自四川省南江縣，經成都中醫藥大學中藥鑒定教研室李敏教授鑒定確認為百合科延齡草屬植物延齡草( Trillium tschonoskii Maxim.)的干燥根莖。

2 方法與結果

2.1 溶液的制備

2.1.1 對照品溶液的制備 精密稱取沒食子酸對照品5.03 mg，置100 mL 棕色容量瓶中，加水溶解并稀釋至刻度，得濃度為0.0503mg/mL的對照品溶液。

2.1.2 磷鉬鎢酸試液的制備 取鎢酸鈉100g、鉬酸鈉25g，加水700mL使溶解，加鹽酸100mL、磷酸50mL，加熱回流10h，放冷，再加硫酸鋰150g、水50mL和溴0.5mL，煮沸除去殘余的溴（約15分鐘），除去殘留的溴，冷卻，加水稀釋到 1000 mL，過濾，收集濾液即得。

2.1.3 供試品溶液的制備 取延齡草藥材0.5 g，精密稱定，置25 mL棕色量瓶中，加入純水15 mL，放置過夜，超聲處理10分鐘，放冷，加水稀釋至刻度，搖勻，靜置，濾過，即得。

2.2 最大吸收波長的確定

分別取對照品溶液和供試品溶液適量，置25mL棕色量瓶中，加入磷鉬鎢酸試液1mL，再分別加水至溶液總量為12mL，再用29%碳酸鈉溶液稀釋至刻度，搖勻，放置30分鐘，以相應的試劑為空白，在400nm～800nm范圍內進行全波長掃描，沒食子酸對照品溶液和供試品溶液的最大吸收波長均在760nm處，故確定其為測定波長。

2.3 標準曲線的繪制

精密量取沒食子酸對照品溶液1.5、2.0、2.5、3.0、3.5、4.0mL，分別置25mL棕色量瓶中，各精密加入磷鉬鎢酸試液1mL，再分別加水補足12mL，用29%碳酸鈉溶液稀釋至刻度，搖勻，放置30分鐘，以相應試劑為空白，照紫外-可見分光光度法，在761nm波長處測定吸光度，以濃度為橫坐標，吸光度為縱坐標，繪制標準曲線。進行線性回歸，得回歸方程：Y=3.8171X-0.0500，r2=0.9991，表明沒食子酸在0.0755～0.2012mg范圍內線性關系良好。

2.4 測定方法

2.4.1 總酚的測定 取上述供試品溶液0.5 mL，置25 mL棕色量瓶中，照“2.3”項下方法，自“加入磷鉬鎢酸試液1mL”起，依法測定，計算含量，即得。

2.4.2 不被吸附多酚的測定 取上述供試品溶液1 mL，加至盛有0.6 g干酪素的具塞錐形瓶中，密塞，置30 ℃水浴中保溫1小時，時時振搖，取出，放冷，搖勻，濾過，棄去初濾液，精密量取續濾液1.2 mL，置25 mL棕色量瓶中，照標準曲線的制備項下的方法，自“加入磷鎢酸試液1ml”起，依法測定吸光度，計算，即得。

總酚量減去不被吸附的多酚量，即得鞣質含量。

2.5 精密度試驗

精密吸取同一沒食子酸對照品溶液，按“2.3”項下方法連續測定其吸光度A，重復5次，RSD為0.73%，表明該測定方法精密度良好。

2.6 穩定性試驗

精密吸取同一供試品溶液，按“2.3”項下方法分別于0、30、60、90、120min，測定其吸光度，RSD=1.18%，結果表明供試品溶液在2 h內穩定。

2.7 重復性試驗

分別稱取同一批延齡草樣品5份，每份約1g，按“2.1.3”項下方法制備，按“2.3”項下方法測定吸光度。總酚RSD=0.75%，不被吸附多酚RSD=1.20%，表明該測定方法重復性良好。

2.8 加樣回收率試驗

精密稱取已知含量的延齡草粉末0.5 g（9份），分別精密加入1.01mg/mL的沒食子酸對照品0.7，0.85，1mL，按“2.1.3”項下方法制備樣品溶液。按照“2.3”項下方法測定吸光度，計算回收率為100.10%，RSD=2.51%，結果見表1。

表1 沒食子酸加樣回收率試驗結果表

2.9 樣品含量測定

按照“2.1.3”項下操作方法，制備5批供試品溶液，按“2.3”項下方法測定吸光度，結果見表2。

表2 樣品含量測定結果

3 討論

鞣質的含量測定方法主要有比色法、高錳酸鉀法、皮粉法、干酪素法、絡合滴定法、分光光度法等。本實驗采用的磷鉬鎢酸-干酪素比色法具有靈敏、快速、操作簡便、成本低廉、方便實用、精密度高、專屬性強等特點[5]。

磷鉬鎢酸-干酪素法的原理為：在堿性溶液中，酚類化合物可以將鎢鉬酸還原(使W6+變為W5+)，生成藍色的化合物，顏色的深淺與酚含量呈正相關，且在760nm處有最大吸收。以干酪素作為鞣質吸附劑，進而消除樣品中其它含多酚羥基成分的干擾，可以選擇性地吸附有生理活性的鞣質，因此測出的是有療效的鞣質，而無療效的鞣質如鞣酐等則不被測定[6,7]。本方法中，鞣質含有的多酚羥基與磷鉬鎢酸試液反應生成的藍色產物遇光不穩定，強光照射會使顯色體系吸光度下降，因此顯色反應應該避光操作，使用棕色容器。延齡草中鞣質的含量測定對其質量控制具有參考價值，延齡草中鞣質與其傳統功效的相關性有待進一步研究。

[1] 謝宗萬等.全國中草藥匯編[M].上冊.第二版.北京:人民衛生出版社, 2000: 225.

[2] 陳佳江,郭力,許莉.疊鞘石斛與藥典收載石斛品種鞣質含量對比研究[J].中國實驗方劑學雜志,2013,19(2):64.

[3] 王宗偉.植物鞣質的藥理作用及結構特征.國外醫學.中醫中藥分冊,1997,19(2):22.

[4] 栗世婷,張曉霞. 鞣質藥理活性的研究新進展[J].疾病監測與控制雜志,2010,4(7):395.

[5] 劉若霞,郭巧玲,田素英.金櫻莖鞣質的含量測定[J].現代中藥研究與實踐,2011,25(6):73.

[6] 張燕,張洪斌,胡海強,等.磨盤草不同部位中鞣質含量測定[J].中國中醫藥信息雜志,2010,17(3):53.

[7] 朱瓊,包貝華,曹雨誕.雞冠花炭飲片中鞣質的含量測定[J].南京中醫藥大學學報,2010,26(1):62.

（責任編輯: 胡慧玲）

Content determination of tannin in Trillium tschonoskii Maxim.

LUO Fang-li, GUO Li, BEI Yuan, XU Li//(Pharmacy College, Chengdu University of Traditional Chinese Medicine; The Ministry of Education Key Laboratory of Standardization of Chinese Herbal Medicine; State Key Laboratory Breeding Base of Systematic Research, Development and Utilization of Chinese Medicine Resources, Chengdu 611137, China)

Objective:To establish a method for the content determination of tannin in Trillium tschonoskii Maxim.Method:The content of tannin in Trillium tschonoskii Maxim. was detected by molybdophosphate colorimetric method.Result:The absorbance with the tannin was linear within the range of 0.0755 mg ～ 0.2012 mg(r2=0.9991，n=9). The average recovery was 100.10% and RSD was 2.51% (n=9).Conclusion:This method can be used for the quality control of Trillium tschonoskii Maxim. with good precision and reproducibility.

Trillium tschonoskii Maxim.; tannin; content determination

R 282.6

A

1674-926X(2014)01-003-02

成都中醫藥大學藥學院 中藥材標準化教育部重點實驗室 中藥資源系統研究與開發利用省部共建國家重點實驗室培育基地，四川 成都 611137

羅方利，碩士在讀，主要從事中藥有效成分分析研究 Email:870905012@qq.com

郭力，教授，博士生導師，主要從事中藥藥效物質基礎及質量標準化研究 Email:gli64@sina.com

2013-06-08學依據。