桑葉中蘆丁含量的動態變化研究

王 正，沈 華，李 蕾，酈紅巖

（江蘇吉貝爾藥業有限公司，江蘇鎮江212009）

桑葉中蘆丁含量的動態變化研究

王 正，沈 華，李 蕾，酈紅巖

（江蘇吉貝爾藥業有限公司，江蘇鎮江212009）

目的研究不同時期桑葉中蘆丁的含量。方法Kromasil C18柱（4.6 mm×250 mm，5μm）；流動相：甲醇－0.5%磷酸水溶液（梯度洗脫），檢測波長：358 nm；柱溫：30℃；結果蘆丁在0.126 2～2.02μg范圍內有良好的線性關系，r＝0.999 9，平均回收率為97.88%，桑葉中蘆丁含量最高在霜降前后。結論初步表明了桑葉中蘆丁含量隨季節變化的規律。

桑葉；蘆丁；高效液相色譜法；含量測定

桑葉為桑科植物桑Morus alba L.的干燥葉，具有疏散風熱、清肺潤燥、清肝明目的功能。桑葉是重要的傳統中藥，桑葉入藥首見于《神農本草經》，被列為中品。衛生部2002年發布的《關于進一步規范保健食品原料管理的通知》中將桑葉列入既是食品又是藥品的名單。《神農本草經》中稱桑葉為“神仙葉”，性寒、味甘苦，具有疏散風熱、清肺潤燥、清肝明目之功效，是常用中藥之一。明代李時珍所著的《本草綱目》中記載：“桑葉乃手足陽明之藥，汁煎代茗，能止消渴，明目長發。《中國藥典》2010年版中桑葉主治風熱感冒，肺熱燥咳，頭暈頭痛，目赤昏花。現代藥理研究表明桑葉具有降血糖、降血脂、抗氧化、抗腫瘤等多種活性［1，2］。對桑葉的藥理作用研究發現，桑葉黃酮類、生物堿類、多糖為降血糖有效組分［3～5］。本文建立了桑葉中蘆丁的含量分析方法，并對不同時期的桑葉蘆丁含量的動態變化進行研究［6～9］，為桑葉資源的合理利用提供一定的依據。

1 儀器與試藥

1.1 儀器 JASCO LC1500高效液相色譜系統（日本分光公司），PU－1580色譜泵；LG－1580－04四通道梯度單元；DG－1580－54四通道在線脫氣器；CO－1560柱溫箱；UV－1575紫外／可見光檢測器；Rheodyne Model 7125進樣閥；高純水機RO－MB－10D（杭州永潔達膜分離設備廠）；N2000色譜工作站（浙江大學信息智能研究所）；Mettler AE240分析天平（上海梅特勒－托利多儀器有限公司）；BP211D電子天平（北京賽多利斯天平有限公司）；SK250LH超聲波清洗儀（上海科導超聲儀器有限公司）；HHS－1恒溫水浴鍋（上海浦東躍新科學儀器廠）。

1.2 試藥 蘆丁對照品（中國藥品生物制品檢定所，批號：100080－200707）；甲醇為色譜純，水為注射用水，其余試劑均為分析純桑葉采自鎮江市蠶研所，經江蘇大學藥學院歐陽臻教授鑒定為桑科植物桑Morus alba L.的葉，低溫干燥后備用。

2 方法與結果

2.1 色譜條件 Kromasil C18柱（4.6 mm×250 mm，5μm）；流動相：甲醇（A）－0.5%磷酸水溶液（B）梯度洗脫（A∶B在0、5、10、15、18、40 min的比例為：30∶70、30∶70、35∶65、40∶60、50∶50、50∶50）；流速： 1.0 mL·min－1；檢測波長：358 nm；柱溫：30℃；進樣量：20μL。理論板數按蘆丁峰計算應不低于2 800，見圖1。

2.2 對照品溶液與供試品溶液的制備 精密稱取干燥至恒重的蘆丁對照品適量，加甲醇制成每mL含20μg的對照品溶液，即得。

取桑葉粉碎成細粉，稱取本品粉末約1.0 g，精密稱定，加甲醇50 mL，加熱回流30 min，濾過，藥渣再同法提取2次，合并濾液，減壓回收溶劑，殘渣用甲醇溶解并轉移至50 mL容量瓶，甲醇定容即得。

2.3 線性關系的考察 標準曲線的繪制：精密稱取蘆丁對照品0.050 50 g于50 mL量瓶中，加甲醇制成每1 mL含1.01 mg的對照品溶液，精密量取一定體積的該對照品溶液，用甲醇分別稀釋成6.31、12.62、25.25、50.5、101μg·mL－1，作為對照品溶液。精密吸取不同濃度的對照品溶液注入液相色譜儀，以進樣量（μg）為橫坐標（X），以峰面積值為縱坐標（Y），進行線性回歸繪制標準曲線，計算得回歸方程Y＝17 854X＋3 111.2，r＝0.999 9，結果表明蘆丁在0.126 2～2.02μg范圍內與峰面積呈良好的線性關系。

圖1 HPLC色譜圖

2.4 進樣精密度試驗 精密吸取同一濃度對照品溶液，依法測定，連續進樣6次，測定峰面積，其精密度良好，蘆丁的RSD為1.63%。

2.5 供試液穩定性試驗 取同一樣品供試液，分別在0、2、4、8、12、24 h測定蘆丁峰面積，其RSD為1.78%，表明樣品在24 h內具有良好的穩定性。

2.6 重復性試驗 取同一批樣品分別精密稱取6份，依法處理，測定，結果樣品中蘆丁的平均含量為1.710 2 mg·g－1，RSD為2.24%。

2.7 回收率測定 精密稱取已知含量的樣品6份約1.0 g，加入蘆丁對照品溶液，依法處理，得供試品溶液，依法測定，結果見表1。

表1 加樣回收率試驗結果（n＝6）

2.8 樣品測定 分別精密稱取不同批次的桑葉樣品，按供試品溶液制備方法制備，如法測定，結果見表2。

表2 桑葉中蘆丁含量動態變化

圖2 桑葉中蘆丁含量變化

3 總結

桑葉收載于《中國藥典》2010年版，其中對桑葉中蘆丁的含量測定方法是采用高效液相色譜法（梯度洗脫）進行的，本文對不同時期的桑葉中蘆丁的含量進行了含量測定。經過研究，不同時期的桑葉中蘆丁的含量是呈動態分布的，在霜降節氣前后含量達到最高，經霜后含量逐漸下降，這有助于更好控制桑葉的質量，為桑葉的采摘提供依據。

本文研究了經霜前后野桑和園桑中蘆丁的含量動態變化，結果表明經霜前后的野桑和園桑中蘆丁的含量均有一定差異。園桑中蘆丁含量比同期的野桑高。兩者含量從9月份開始持續上升，10月23日霜降節氣前后含量達到最高，經霜后含量逐漸下降。因此，桑葉經霜藥用可能與黃酮類成分有關，其具體機制有待進一步研究。

［1］趙麗珺，齊鳳蘭，瞿曉華，等.桑葉的營養保健作用及綜合利用［J］.中國食物與營養，2004，2：22－25.

［2］黎小萍，陳華玲，楊普秀，等.桑葉的藥用與保健價值及其開發利用現狀［J］.蠶桑茶葉通訊，2005，119（1）：8－9.

［3］宋立人，洪峋，丁緒亮，等.現代中藥學大辭典［M］.北京：人民衛生出版社，2001.

［4］江蘇新醫學院.中藥大辭典（下冊）［M］.上海：上海科學出版社，1997.

［5］李有業，卜穎，耿風琴.桑葉——新功能食品的原料［J］.世界農業，2000，4：44－55.

［6］萬利秀，肖更生，劉亮.桑葉中黃酮的研究進展［J］.廣東蠶業，2008，43（3）：44－48.

［7］全國中草藥匯編編寫組.全國中草藥匯編［M］.北京：人民衛生出版社，2000.

［8］國家藥典委員會.中華人民共和國藥典2010年版（一部）［S］.北京：中國醫藥科技出版社，2010.

［9］楊普香，黎小萍.桑葉茶黃酮類化合物的測定方法研究［J］.食品科學，2001，22（10）：81－82.

表2 4批樣品中丹酚酸B的含量測定結果

3.2 供試品溶液制備中對提取溶劑進行了考察，分別采用甲醇和75%甲醇提取，結果兩者含量接近，但75%甲醇提取的雜質稍多，因此確定采用甲醇提取。

3.3 本文建立的含量測定方法，具有靈敏度高，重現性好，專屬性強，無明顯干擾等優點，是有效控制本品內在質量的較理想方法。

參考文獻：

［1］國家藥典委員會.中華人民共和國藥典2010年版（一部）［S］.北京：中國醫藥科技出版社，2010：70.

［2］孫仁弟，徐向陽，宋燕青.丹酚酸B的藥理研究進展［J］.藥物流行病學雜志，2012，21（9）：458－462.

［3］張曉峰.HPLC法測定丹酚酸B的含量［J］.中國醫藥指南，2011，9（7）：57－58.

［4］勵娜，胡榮，張小梅，等.HPLC法測定丹參提取物中丹酚酸B的含量［J］.重慶中草藥研究，2012，2（66）：3－5.

［5］劉丹，余良忠，文萍.HPLC法測定南丹參中丹酚酸B的含量［J］.遼寧中醫雜志，2011，38（9）：1872－1873.

［6］賈元印，張新軍，周禮.HPLC－ELSD法測定脈通膠囊中黃芪甲苷的含量［A］.中華中醫藥學會第九屆制劑學術研討會論文匯編［C］.2008.

［7］程月發，藍建芳，張珺，等.丹參膠囊中丹參酮ⅡA及丹酚酸B含量測定方法研究［J］.齊魯藥事，2012，31（7）：397－399.

Study on the dynam ic change of rutin content in mulberry leaves

WANG Zheng，SHEN Hua，LILei，LIHong-yan
（Jiangsu Jibrier Pharmaceutial Co.，Ltd.，Zhenjiang 212009，China）

ObjectiveTo study the content of rutin in different period ofmulberry leaf.Methods The Kromasil C18column（4.6 mm×250 mm，5μm）was used，andmobile phasewas composed ofmethanol－0.5%phosphoric acid solution（gradient elution），Detection wavelength was at358 nm，the column temperaturewas at30℃.ResultsThe linear range of rutin was0.126 2～2.02μg（r＝0.999 9）.The average recovery of rutin was97.88%，the highest contentof rutin inmulberry leaves before and after the frost.ConclusionPreliminary results suggested that rules of rutin inmulberry leaves seasonal changes.

Mulberry leaves；Rutin；HPLC；Determination

R284.2

A

2095－5375（2014）12－0693－003

王正，男，研究方向：藥品生產、生產工藝以及產品質量，E－mail：haolewangzheng＠126.com