HPLC法測定痛經(jīng)停膏中丹酚酸B的含量

張新軍，梁瑞雪，侯文靜，賈元印

（山東省中醫(yī)藥研究院，山東濟(jì)南250014）

HPLC法測定痛經(jīng)停膏中丹酚酸B的含量

張新軍，梁瑞雪，侯文靜，賈元印

（山東省中醫(yī)藥研究院，山東濟(jì)南250014）

目的建立痛經(jīng)停膏中丹酚酸B的含量測定方法。方法采用高效液相色譜法，色譜柱為Diamonsil C18（4.6 mm×250 mm，5μm），流動相為甲醇－乙腈－甲酸－水（30∶10∶1∶59），流速為1.0 mL·min－1，測定波長為286 nm。結(jié)果丹酚酸B在0.525～2.625μg范圍內(nèi)與色譜峰峰面積呈良好線性關(guān)系，相關(guān)系數(shù)為0.999 9，平均加樣回收率為98.2%，RSD為0.81%。結(jié)論本方法簡便可靠，準(zhǔn)確靈敏，專屬性強(qiáng)，能有效的控制痛經(jīng)停膏的內(nèi)在質(zhì)量。

痛經(jīng)停膏；丹酚酸B；含量測定；高效液相色譜法

痛經(jīng)停膏處方由延胡索、川芎、香附、丹參等多味藥物組成，采用現(xiàn)代科學(xué)方法提取各藥物的有效組分，并加工制成臨床用膏劑，臨床觀察表明，本膏劑外用貼敷神闕穴治療痛經(jīng)具有較好的療效。丹參是本藥物的主要藥味之一，具有活血祛瘀，通經(jīng)止痛，清心除煩，涼血消癰之功效，用于胸痹心痛，脘腹脅痛，瘕瘕積聚，熱痹疼痛，心煩不眠，月經(jīng)不調(diào)，痛經(jīng)經(jīng)閉，瘡瘍腫痛［1］。丹酚酸B是丹參中的水溶性有效成分之一，對心、腦、肝、腎等多個(gè)器官具有保護(hù)作用［2］。為了有效的控制制劑的質(zhì)量，參考相關(guān)文獻(xiàn)［3～7］，采用HPLC法對制劑中的丹酚酸B進(jìn)行了含量測定方法的研究，通過方法學(xué)的系統(tǒng)考察和3批樣品的測定，建立了痛經(jīng)停膏中丹酚酸 B的 HPLC含量測定方法，現(xiàn)報(bào)告如下。

1 儀器與試藥

高效液相色譜儀（戴安Ultimate 3000），色譜柱為Diamonsil C18（4.6 mm×250 mm，5μm），超純水（Millipore公司純水器），所用甲醇、乙腈為色譜純，其它試劑均為分析純，丹酚酸B對照品（中國藥品生物制品檢定所，批號：111562－200504），痛經(jīng)停膏由本課題組研制。

2 方法與結(jié)果

2.1 供試品溶液的制備 取本品藥膏適量，精密稱定，加一定量的硅藻土，拌勻，于60～65℃干燥，研細(xì)，取約1 g（相當(dāng)于0.5 g丹參藥材），精密稱定，置具塞錐形瓶中，精密加入甲醇50 mL，密塞，稱定重量，加熱回流1 h，放冷，再稱定重量，用甲醇補(bǔ)足減失的重量，搖勻，濾過，取續(xù)濾液，作為供試品溶液。

2.2 對照品溶液的制備 取丹酚酸B對照品適量，精密稱定為1.05 mg，置5 mL量瓶中，加甲醇使其溶解，并用甲醇稀釋至刻度，搖勻，作為對照品儲備液，其濃度為210μg·mL－1；精密吸取該儲備液2.5mL，置5mL量瓶中，加甲醇至刻度，搖勻作為對照品溶液，其濃度為105μg·mL－1。

2.3 陰性對照溶液的制備 按照樣品的制備工藝及供試品溶液制備方法制得缺丹參陰性對照溶液。

2.4 色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗(yàn) 用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；甲醇－乙腈－甲酸－水（30∶10∶1∶59）為流動相；檢測波長為286 nm。柱溫：30℃。理論板數(shù)按丹酚酸B峰計(jì)算應(yīng)不低于2 000。

2.5 方法學(xué)考察

2.5.1 空白干擾試驗(yàn) 分別精密吸取對照品溶液、供試品溶液與缺丹參陰性對照溶液各10μL，注入液相色譜儀，測定。結(jié)果表明，供試品色譜中，在與對照品色譜相應(yīng)位置上，有相同的色譜峰，而缺丹參陰性對照色譜中，在與對照品色譜相應(yīng)位置上，則未見明顯色譜峰出現(xiàn)，表明在該HPLC測定條件下，丹酚酸B的測定無干擾，見圖1。

2.5.2 線性關(guān)系考察 精密吸取相當(dāng)于0.525、1.05、1.575、2.1、2.625μg的對照品溶液，注入高效液相色譜儀，測得峰面積積分值。以峰面積積分值為縱坐標(biāo)，進(jìn)樣量（μg）為橫坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線并對數(shù)據(jù)進(jìn)行線性回歸，得回歸方程：Y＝13.055X－0.009，r＝0.999 9。結(jié)果表明進(jìn)樣量在0.525μg～2.625μg范圍內(nèi)與峰面積線性關(guān)系良好。

2.5.3 精密度試驗(yàn) 精密吸取同份對照品溶液10 μL，連續(xù)進(jìn)樣5次，測定峰面積積分值。結(jié)果供試品5次測定的平均值為14.267±0.035，RSD為0.22%，表明精密度良好。

2.5.4 穩(wěn)定性試驗(yàn) 精密吸取同份供試品溶液10 μL，每隔約2 h進(jìn)樣測定1次，共進(jìn)樣測定5次，其峰面積積分值在測定時(shí)間8 h內(nèi)基本不變，供試品5次測定平均值為13.345±0.316，RSD為2.37%，表明穩(wěn)定性良好。

2.5.5 重現(xiàn)性試驗(yàn) 取同一批樣品6份，分別制成供試品溶液，并測定丹酚酸B含量，結(jié)果6次測定的平均含量為（4.935±0.105）mg·g－1，其RSD為2.13%，表明重現(xiàn)性良好。

2.5.6 回收率試驗(yàn) 取同一批樣品，共取5份，每份約0.5 g，精密稱定，加一定量的硅藻土，拌勻，于60～65℃干燥，分別加入3.465 mg（配成濃度為3.465 mg·mL－1的溶液，準(zhǔn)確加入1.0 mL），按以上方法制備各供試品溶液并測定樣品中的含量，計(jì)算回收率，結(jié)果5次試驗(yàn)丹酚酸B的平均回收率為98.2%，RSD為0.81%，見表1。

圖1 HPLC色譜圖A.對照品溶液；B.供試品溶液；C.缺丹參陰性對照溶液

表1 加樣回收率試驗(yàn)結(jié)果

2.6 樣品中丹酚酸B的含量測定 按“2.1”項(xiàng)下方法制備4批痛經(jīng)停膏供試品溶液。分別精密吸取對照品與各供試品溶液各10μL，注入液相色譜儀，測定并計(jì)算各批樣品中丹酚酸B的含量。結(jié)果見表2。

3 小結(jié)與討論

3.1 丹參中既含有水溶性有效成分，又含有脂溶性有效成分，因此，對丹參采用高濃度乙醇提取，以充分提取其有效成分。

Determ ination of salvianolic acid B in Tongjingting Ointment by HPLC

ZHANG Xin-jun，LIANG Rui-xue，HOUWen-jing，JIA Yuan-yin
（Shandong Institute of Traditional Chinese Medicine，Jinan 250014，China）

ObjectiveTo establish a method for the determination of salvianolic acid B in Tongjingting Ointment.M ethodsThe HPLC procedure was performed on the chromatographic column of Diamonsil C18（4.6 mm×250 mm，5μm），themobile phasewas amixture ofmethanol－acetonitrile－formic acid－water（30∶10∶1∶59），the flow rate was1.0 mL·min－1and the detection wavelength was286 nm.ResultsSalvianolic acid B showed a good relationship with peak area at a range from 0.525μg to 2.625μg，and the correlation coefficientswere 0.999 9，the average recovery of scutellarin was 98.2%（RSD＝0.81%）.ConclusionThemethod was simple and reliable，accurate and sensitive and specific which can be used effectively for the quality control of Tongjingting Ointment.

Tongjingting Ointment；Salvianolic acid B；Determination；HPLC

R927.2

A

2095－5375（2014）12－0689－003

山東省中醫(yī)藥科技發(fā)展計(jì)劃項(xiàng)目（No.2011－165）

張新軍，男，助理研究員，研究方向：中藥新藥及中藥質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)研究，E－mail：xinjun_z＠126.com

侯文靜，女，副主任護(hù)師，研究方向：臨床護(hù)理研究，Tel：13553158463，E－mail：Xianzi1942＠163.com